口蹄疫疫苗接种的局部免疫

灭能口蹄疫疫苗预防接种的效果与疫苗的质量直接有关.曾经提出了许多评价疫苗免疫活性的方法.其中以接种动物血清中和病毒活性法应用最广.因为许多作者证明,接种动物免疫的程度决定于血清中含病毒中和抗体的量.     

牛传染性鼻气管炎弱毒与牛病毒性腹泻弱毒抗原免疫干扰的研究

本试验使用3~6月龄健康易感牛9头(牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)抗原、抗体均阴性),共分3组,每组3头犊牛。第1组首免肌肉注射IBRV-LNM弱毒疫苗株种毒,接种1周后,每头牛接种BVDV-SM弱毒疫苗株;第2组只接种BVDV-SM弱毒疫苗株种毒,接种时间同第1组;第3组为对照组,接种MDBK细胞培养液。接种BVDV-SM疫苗毒后每周采血至疫苗毒接种后28 d,测定接种后BVDV抗体效价,并采用BVDV-JL检验用强毒进行攻毒试验。结果表明,第1组与第2组试验动物血清中牛病毒性腹泻病毒抗体水平无明显差异,能够抵抗BVDV-JL强毒攻击达到免疫保护的效果,说明牛传染性鼻气管炎病毒IBRV-LNM弱毒疫苗株接种后在牛体内对牛病毒性腹泻病毒BVDV-SM疫苗毒不产生免疫干扰作用。     

麻疹疫苗对幼犬犬瘟热病毒母源抗体水平的影响

采用固定病毒稀释血清法,测定了不同日龄幼犬犬瘟热病毒(CDV)母源中和抗体效价。2、9、16和23 d幼犬平均抗体效价为1∶12、1∶24、1∶40和1∶22。幼犬23日龄时,分别接种CDV疫苗株、麻疹病毒(MV)疫苗株和正常Vero细胞培养物。结果发现,CDV疫苗株接种犬母源抗体于接种后14 d时仅为1∶6,而接种MV疫苗株和Vero细胞冻融物组CDV母源抗体未发生显著降低,接近1∶20的保护水平。本试验结果表明,当幼犬母源抗体效价为1∶20左右时,母源抗体可被CDV疫苗封闭,而MV疫苗株不受CDV母源抗体干扰。本文为临床应用MV疫苗接种幼犬,获得对CD交叉保护提供理论依据。     

MD CVI988疫苗的PFU与免疫效果

ＭＤＶＣＶＩ９８８株是由Ｒｉｓｐｅｎｓ等人（１９７２）采用原代鸭胚成纤维细胞（ＤＥＦ）健康白色来航鸡中分离得到的,其第３５代细胞培养毒是目前荷兰使用最为广泛的ＭＤ疫苗。１９８３年荷兰约有４７６０多万只蛋鸡接种过该疫苗;约有９７０万只蛋鸡接种了火鸡疤疹病毒（ＨＶＴ）Ｆｃ１２６疫苗。这段时间因ＭＤ造成的损失相对较低,死亡率不超过２．５％。在特定条件下（通常是环境卫生较好的农场）,ＭＤＶＣＶＩ９８８疫苗第３５代细胞培养物传代病毒能表现出令人满意的保护效力,对生产鸡只也很安全。关于ＭＤ疫苗,特别是ＣＶＩ…     

抗牛暂时热(或牛流行热)细胞培养疫苗

用919株牛暂时热病毒制造细胞培养疫苗。Tzipori(1974)曾将其他牛暂时热BEF病毒株适应于Vero细胞系,并在啮齿动物进行传代,结果传代毒对牛的抗原性不如919株好。919株弱毒是将病牛血毒直接接种Veto细胞,因而避免了病毒抗原性发生改变。将919株弱毒经静脉接种犊牛所诱发的中和抗体应答和犊牛被接种417WBC株强毒后发     

生物反应器中PRRSV TJM株在Marc-145细胞上最佳增殖条件研究

为了在Marc-145细胞上获得更高滴度的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJM株,对细胞培养条件、细胞接种量、微载体的用量以及病毒培养时间等条件进行了优化。结果表明,利用生物反应器悬浮培养Marc-145细胞在血清为金源康且含量为10%、培养基为DMEM、细胞接种密度为20~30细胞/球、微载体为5 g等条件下生长状态最好;病毒最佳培养时间为27~36 h,病毒增殖效果好且能够达到最高的病毒滴度。本试验为微载体培养条件下大规模生产PRRSV-TJM株疫苗奠定了一定理论基础。     

猪细小病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法检测不同接毒条件对病毒增殖效果的影响

为提高细小病毒(PPV)细胞培养的滴度,本试验通过对猪细小病毒(PPV)感染ST细胞接毒工艺各步骤的比较研究,从不同接毒方式、细胞接种量、病毒感作时间以及接种浓度等方面进行分析,利用猪细小病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法对病毒滴度进行检测。结果表明:ST细胞覆盖率接近单层时接毒,采用分步法接毒,以103倍稀释病毒接种,接种病毒后感作2h,将接毒后细胞维持液中血清浓度设为2%这5个方面的接毒工艺可提高PPV细胞培养的病毒滴度。     

猪细小病毒SYBRGreenI实时荧光定量PCR方法检测不同接毒条件对病毒增殖效果的影响

为提高细小病毒（PPV）细胞培养的滴度,本试验通过对猪细小病毒（PPV）感染ST细胞接毒工艺各步骤的比较研究．从不同接毒方式、细胞接种量、病毒感作时间以及接种浓度等方面进行分析,利用猪细小病毒SYBRGreenI实时荧光定量PCR方法对病毒滴度进行检测。结果表明：ST细胞覆盖率接近单层时接毒,采用分步法接毒,以10^3倍稀释病毒接种,接种病毒后感作2h,将接毒后细胞维持液中血清浓度设为2％这5个方面的接毒工艺可提高PPV细胞培养的病毒滴度。     

猪常用疫苗基本特性及使用方法

(一)猪瘟疫苗免疫接种是预防和控制猪瘟的主要手段,目前我国瘟猪疫苗种毒均为猪瘟兔化弱毒,疫苗有组织苗和细胞苗2种类型。组织苗主要是利用猪瘟兔化弱毒接种3～5日龄乳兔,接种36小时后取乳兔的肝、脾及肌肉组织制成的疫苗。细胞苗是猪瘟兔化弱毒经犊牛睾丸细胞或ST细胞培养制成的疫苗,犊牛睾丸细胞有可能携带牛病毒性腹泻粘膜病病毒。生     

猪伪狂犬病疫苗的研究进展

控制伪狂犬病,应采取综合性措施,如引种时的检疫、加强环境的消毒及灭鼠等。虽然接种疫苗并不能阻止猪感染伪狂犬病病毒,但免疫接种使得建立潜伏感染需要更多的病毒量和降低野毒的排出量。因而,免疫后能减少病毒的传播,阻止临床症状的发生,减轻感染后的症状严重性,减少经济损失等。在现阶段,伪狂犬病呈现高感染率和高发病率,疫苗的作用是不可替代的。因此免疫接种是预防和控制甚至消灭伪狂犬病的根本措施。目前用于预防该病的疫苗有以下几种。１灭活疫苗将分离的伪狂犬病病毒用ＢＨＫ-２１细胞或ＩＢＲＳ-２等传代细胞培养,当病毒的增殖滴度…     

马立克氏疫苗病毒在鸡传代细胞上的培养工艺

为探索马立克氏病（Marek＇s disease,MD）疫苗病毒在DF-1细胞系上的最佳培养工艺以及由此方法制备的马立克氏病疫苗对鸡的保护效力,通过进行培养基和血清选择、病毒在DF-1细胞上接种稀释度和接种方式选择以及滴度测定,并制备以DF-1细胞为基质的CVI988和FC-126病毒疫苗,按中华人民共和国兽用生物制品规程（2000）检验合格后与其他商品苗进行保护效率对比试验。结果表明,试验成功探索了CVI988和FC-126病毒在DF-1细胞系上的培养工艺,以DF-1细胞为基质制备的疫苗也取得了和其他商品苗保护率相当的良好效果,因此推断DF-1细胞可以作为马立克氏病疫苗病毒的传代细胞培养候选基质。     

细胞培养工艺制备H9亚型禽流感灭活疫苗研究进展

目前,制备H9亚型禽流感疫苗大多是采用鸡胚接种的方法进行病毒培养和扩增,这种传统的方法存在诸多缺陷,如劳动强度大、鸡胚用量大、工艺废弃物处理难度大、疫苗质量难以控制等,而细胞培养技术可以弥补该传统方法的诸多缺陷,完全符合未来循环经济发展的趋势。本文从H9亚型禽流感病毒及其危害、MDCK细胞制备H9亚型禽流感疫苗现状以及利用生物反应器规模化培养细胞制备禽流感疫苗的前景和展望等方面进行介绍。     

白羽肉鸡标准化规模养殖模式下的生物安全与对策

1疫苗生产工艺、条件与生物安全及其对策在我国现行多数传统动物疫苗的生产工艺中,仍然多采用以下几种病毒扩增的宿主系统:鸡胚源(尿囊液病毒抗原)、鸡胚成纤维细胞培养源(细胞培养物病毒抗原)、动物其它细胞培养源(细胞培养物病毒抗原)、含毒动物组织源(感染组织     

狐狸脑炎病毒细胞培养灭活疫苗的研究

采用分离到的狐狸脑炎病毒ＦＥＶ－Ｈ作种毒，经ＭＤＣＫ细胞培养，经最终含量为０．２％的甲醛灭活，制备狐狸脑炎病毒细胞培养灭活疫苗。皮下接种疫苗１０ｍｌ，试验狐，貉，犬均无临床特异反应，局部吸收良好。最小免疫剂量为１６倍稀释的疫苗原液１ｍｌ，使用剂量定为４倍稀释的疫苗原液１ｍｌ，试验狐狸免疫后３０天，血清中和抗体效价达到高峰值１：１４５，能耐受张毒攻击。免疫后６个月，抗体水平降至１：３２，但此时仍能耐     

PRRSV NVDC-JXA1株在Marc-145细胞上增殖条件的优化

为了在Marc-145细胞上获得更高滴度的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NVDC-JXA1株,优化了细胞培养条件、病毒接种剂量、病毒吸附时间、收毒时间和病毒冻融次数等条件。结果表明Marc-145细胞在MEM培养基、新生牛血清含量80 mL/L,细胞接种密度150 000个/mL,pH7.0条件下生长状态最好;PRRSV NVDC-JXA1株的最佳接种剂量为400 TCID50/mL,病毒吸附时间为30 min,收毒时间为接种后72 h,在-20℃冻融3次,PRRSV NVDC-JXA1株增殖效果最好。该结果为NVDC-JXA1株PRRSV疫苗的生产提供了依据。     

人用流感疫苗鸡胚孵化技术要点

正流感是威胁人类健康的重要疾病之一,疫苗接种是当前人类防控流感流行的有效手段之一。随着生物技术的发展,人用流感疫苗的种类越来越多,全病毒灭活疫苗、裂解疫苗、亚单位疫苗等均已经上市使用。流感病毒的培养主要依靠鸡胚尿囊腔接种繁殖,但随着生物技术发展,受到蛋源紧张的控制,细胞培养等生产技术逐步进入流感     

猪乙型脑炎病毒在Vero细胞上的繁殖特性及其灭活疫苗的免疫原性研究

试验旨在对猪乙型脑炎病毒（JEV,SA14-14-2株）在传代细胞上的繁殖培养特性及其制备的灭活疫苗免疫原性进行研究,确定猪JEV在细胞培养瓶中培养的关键技术参数及其灭活疫苗的免疫原性。以Vero细胞培养病毒,通过接种时间、接毒量、吸附时间、吸附温度、维持液pH、维持培养温度及培养时间7个条件的优化,将繁殖的病毒液冻融一次,采用病毒蚀斑数测定方法测定病毒滴度。按照优化好的条件繁殖一批毒液,经β-丙内酯灭活,与双相佐剂混合,制备成猪乙型脑炎灭活疫苗。两次免疫（间隔14 d）接种乙型脑炎抗体阴性仔猪,首次免疫前（0 d）、免疫后第7、14、21、28、35、42天采集血清,检测血清中和抗体。二免后第28天进行乙型脑炎P3强毒的攻击,攻毒前（0 d）、攻毒后第1、2、3、5、7、9天采集血浆,攻毒后第14天剖杀免疫猪,采集脑组织,检测血浆和脑组织中JEV。结果显示,用细胞培养瓶进行培养,将Vero细胞培养至48 h进行病毒接种,接种量为1 000 PFU/mL,病毒吸附温度为37℃,吸附时间为90 min,吸附后用pH 7.6~8.8维持液继续培养,培养温度为35℃,培养96 h后收获毒液,冻融一次,可获得较高滴度的病毒。仔猪免疫制备的灭活疫苗后血清抗体水平迅速升高,血浆和脑组织中均未检测出JEV,免疫组试验猪能抵抗强毒攻击,可获得有效免疫保护。本试验结果为猪乙型脑炎疫苗的生产提供了参考依据。     

鹅病毒性传染病病原的采集和分离

要进行鹅病毒性传染病的确诊,必须借助于病毒学检验.因此,必须了解常用的病毒学诊断技术.病毒不同于细菌等微生物,是严格的细胞内寄生.一般不能在无生命的人工培养基上培养,只能在活的易感组织细胞内生长繁殖.用于分离培养病毒的方法有禽胚接种法、细胞培养接种法和接种实验动物分离培养等.在兽医临床工作中,分离病毒的方法最常使用的是禽胚接种.     

猪乙型脑炎病毒在Vero细胞上的繁殖特性及其灭活疫苗的免疫原性研究

试验旨在对猪乙型脑炎病毒(JEV,SA14-14-2株)在传代细胞上的繁殖培养特性及其制备的灭活疫苗免疫原性进行研究,确定猪JEV在细胞培养瓶中培养的关键技术参数及其灭活疫苗的免疫原性。以Vero细胞培养病毒,通过接种时间、接毒量、吸附时间、吸附温度、维持液pH、维持培养温度及培养时间7个条件的优化,将繁殖的病毒液冻融一次,采用病毒蚀斑数测定方法测定病毒滴度。按照优化好的条件繁殖一批毒液,经β-丙内酯灭活,与双相佐剂混合,制备成猪乙型脑炎灭活疫苗。两次免疫(间隔14d)接种乙型脑炎抗体阴性仔猪,首次免疫前(0d)、免疫后第7、14、21、28、35、42天采集血清,检测血清中和抗体。二免后第28天进行乙型脑炎P3强毒的攻击,攻毒前(0d)、攻毒后第1、2、3、5、7、9天采集血浆,攻毒后第14天剖杀免疫猪,采集脑组织,检测血浆和脑组织中JEV。结果显示,用细胞培养瓶进行培养,将Vero细胞培养至48h进行病毒接种,接种量为1 000PFU/mL,病毒吸附温度为37℃,吸附时间为90min,吸附后用pH 7.6～8.8维持液继续培养,培养温度为35℃,培养96h后收获毒液,冻融一次,可获得较高滴度的病毒。仔猪免疫制备的灭活疫苗后血清抗体水平迅速升高,血浆和脑组织中均未检测出JEV,免疫组试验猪能抵抗强毒攻击,可获得有效免疫保护。本试验结果为猪乙型脑炎疫苗的生产提供了参考依据。     

应用HEV ORF2蛋白McAb间接免疫荧光法检测HEV的研究

应用抗猪戊型肝炎病毒（HEV）ORF2蛋白单克隆抗体和猪戊型肝炎病毒多克隆抗血清对感染猪戊型肝炎病毒的A549细胞培养物进行了间接免疫荧光检测病原的比较研究。单克隆抗体（McAb）进行的间接免疫荧光染色后,HEV感染细胞培养物中多数细胞在其胞浆和细胞膜上出现黄绿色荧光,未接种病毒的细胞培养物被伊文思蓝染成红色,未见有黄绿色荧光染色的细胞存在;多克隆抗血清对接种病毒的细胞培养物染色后,荧光强度高,呈现亮绿色,但未接种HEV的细胞培养物亦有一定的非特异性荧光反应。结果表明,利用所研制的抗HEVORF2蛋白McAb进行间接免疫荧光法对病原检测具有很高的特异性。