大型溞ChE和NAGase间接竞争和非竞争ELISA方法的比较

[目的]探索间接非竞争ELISA和间接竞争ELISA法测定大型溞ChE和NAGase的试验条件及方法灵敏度。[方法]分别采用间接竞争和间接非竞争ELISA方法测定大型溞ChE和NAGase。[结果]对于ChE,间接非竞争ELISA的最适抗原浓度和抗体稀释倍数分别为1.466μg/m L和1∶10 000,灵敏度为7.426 7 ng/m L;间接竞争ELISA的最适抗原浓度和抗体稀释倍数分别为5.277μg/m L和1∶8 000,灵敏度为0.163 4 ng/m L。对于NAGase,间接非竞争ELISA的最适抗原浓度和抗体稀释倍数分别为8.961μg/m L和1∶6 000,灵敏度为4.199 9 ng/m L;间接竞争ELISA的最适抗原浓度和抗体稀释倍数分别为6.450μg/m L和1∶4 000,灵敏度为0.250 8 ng/m L。[结论]无论是ChE还是NAGase,间接竞争ELISA在最适抗体浓度下的检测灵敏度均高于间接非竞争ELISA,加之其操作简便,间接竞争ELISA在生物和环境样品ChE和NAGase含量检测中值得推广应用。     

GA_4间接酶联免疫吸附测定方法的建立

利用 GA_4-17-BSA 作为免疫抗原,GA_4-16-OA 作为包被抗原,建立了检测自由态 GA_4的间接ELISA。检测极限为4.1ng/mL,抗血清与 GA_7,GA_3,GA_4-ME 的交叉反应率分别为68.51%,9.10%。1.90%,与 IAA,ABA,ZR 交叉反应率极小。     

基于特异性对硫磷单克隆抗体的间接竞争酶联免疫吸附分析方法建立

[目的]制备特异性识别对硫磷(PA)的单克隆抗体,建立其间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA),为实现对硫磷的农残快检提供技术支持.[方法]以化合物4-(二乙氧基硫代磷酸酯基)苯甲酸为半抗原,分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备人工抗原,免疫7周龄Balb/c雌性小鼠,取抗血清效价最高、特异性最优小鼠的脾脏细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,采用间接酶联免疫方法(i-ELISA)及ic-ELISA分别评价融合细胞株的阳性和特异性,通过有限稀释法筛选稳定分泌对硫磷抗体的单克隆细胞株.再通过棋盘格试验筛选出抗原抗体最佳工作浓度组合建立对硫磷ic-ELISA标准曲线,并基于对硫磷单克隆抗体与各结构类似物的交叉反应率,评估ic-ELISA的特异性.采购西红柿样品进行对硫磷的添加回收试验,运用气相色谱法(GC)验证ic-ELISA的准确性.[结果]成功合成对硫磷人工抗原PA-BSA和PA-OVA,经5次免疫后融合小鼠的血清效价为8×103;通过有限稀释法筛选获得灵敏度高、特异性最强的对硫磷单克隆细胞株4F11A10.以2μg/mL包被抗原PA-OVA、0.25μg/mL细胞株4F11A10分泌抗体为最佳抗原抗体工作浓度组合,建立对硫磷ic-ELISA及其标准曲线,其半抑制浓度(IC50)为50 ng/mL,检测范围(IC20~IC80)为2.34~300 ng/mL;所建立的对硫磷ic-ELISA与5种有机磷农药(丙溴磷、杀扑磷、倍硫磷、水胺硫磷和甲拌磷)均无交叉反应.对比ic-ELISA和GC测定西红柿样品中对硫磷的添加回收试验结果,发现ic-ELISA的添加回收率为84.86%~100.27%,GC的添加回收率为97.60%~106.40%,两种方法的检测结果一致性较好.[结论]建立的ic-ELISA可用于快速检测蔬菜、水果等农产品中的对硫磷残留.     

应用间接酶联免疫吸附试验检测人参软腐细菌

通过间接酶联免疫吸附试验可以检测参土、田间腐烂参根和潜伏在外观无病参根内的软腐细菌。对人参软腐细菌检出的灵敏度为4×10~5细胞/ml。病、健参根组织提取液的稀释度为1/1000-1/2000。免疫球蛋白最适浓度为10μg/ml。应用人参细菌性软腐病菌株Ecc和Ps.c.分别免疫家兔得到相同效价(1:1280)的抗血清。     

结合态GA_3的间接酶联免疫吸附测定研究

利用GA3-7免疫家兔得到的抗血清,建立了检测结合态GA3的间接酶联免疫吸附测定方法(ELISA)。免疫抗原与包被抗原用最常见的DCC活化羧基与蛋白质相联。检测极限为12.3 ng/mL,线性范围12.3~1 000 ng/mL。抗血清与GA3的交叉反应率为2.3%,与GA4、IAA、ABA和ZR的交叉反应率均很小。     

辣椒病毒的酶联免疫吸附法检测

辣椒病毒的酶联免疫吸附法检测程秉铨，周俊，孙晓陆，肖英，彭湘儒，刘文朴（新疆农科院中心实验室，乌鲁木齐，８３００００）（乌鲁木齐市蔬菜研究所）酶联免疫吸附试验技术（ＥＬＩＳＡ）是７０年代发展起来的用于检测抗原或抗体的新方法。１９７１年由瑞典的Ｅｎｇｖ...     

脱落酸间接酶联免疫吸附测定法的建立

报道了一种利用兔抗 IAA-N-BSA 抗血清和辣根过氧化物酶标记的羊抗兔 IgG 建立的IAA 固相抗原型(或称间接)酶联免疫吸附测定法;该法的线性测定范围在0.8～200ng 之间;本文研究了合成包被抗原的适宜方法;并在植物样品测定冲对该法做了一系列的质量控制试验。     

吲哚乙酸间接酶联免疫法的建立

植物激素酶联免疫检测法(ELISA)可对微量、大批样品进行测定,其灵敏度远远高于生物测试法,高于或相当于当今先进的理化测定法。它具有快速、精确、价廉、无放射性污染等优点。植物激素的 ELISA 多用直接法,至今未见 IAA 间接 ELISA 的报道.作者运用卵清蛋白(OA)与 IAA 形成的蛋白复合物(IAA-OA)包板,建立了 IAA 间接 ELISA,并对烟草愈伤组织再生植株中的 IAA 进行了测定.     

酶联免疫吸附法在水产品安全检测中的应用

酶联免疫吸附法 (ｅｎｚｙｍｅ ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ ,ＥＬＩＳＡ)是把抗原和抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化作用有机结合起来的检测技术 ,它始于 1 971年Ｅｎｇｖａｌｌ和Ｐｅｒｌｍａｎｎ用碱性磷酸酶标记的ＩｇＧ定量测定ＩｇＧ[1 ] 。随着单克隆抗体技术的发展应用及免疫试剂盒的商业化 ,ＥＬＳＩＡ已广泛应用于临床医学、生物学、分析化学、食品 (乳制品、畜产品 )分析等领域。但在水产品安全检测方面的应用 ,国内目前刚刚起步 ,本文通过对ＥＬＩＳＡ方法及应用的介绍 ,旨在促进该技术在水产品安全…     

酶联免疫吸附法在水产品安全检测中的应用

酶联免疫吸附法 (ｅｎｚｙｍｅ ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙ ,ＥＬＩＳＡ)是把抗原和抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化作用有机结合起来的检测技术 ,它始于 1 971年Ｅｎｇｖａｌｌ和Ｐｅｒｌｍａｎｎ用碱性磷酸酶标记的ＩｇＧ定量测定ＩｇＧ[1 ] 。随着单克隆抗体技术的发展应用及免疫试剂盒的商业化 ,ＥＬＳＩＡ已广泛应用于临床医学、生物学、分析化学、食品 (乳制品、畜产品 )分析等领域。但在水产品安全检测方面的应用 ,国内目前刚刚起步 ,本文通过对ＥＬＩＳＡ方法及应用的介绍 ,旨在促进该技术在水产品安全…     

己烯雌酚人工抗原的合成和酶免疫检测方法的建立

通过化学方法合成己烯雌酚单羧甲基醚,并通过核磁共振和质谱进行鉴定;分别用混合酸酐法和碳二亚胺法将其与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)偶联,合成己烯雌酚人工抗原,经紫外扫描、聚丙烯酰胺凝胶电泳和动物免疫试验证实人工抗原合成成功,并制备了抗己烯雌酚的特异性多克隆抗体,同时建立了己烯雌酚的酶免疫检测方法,这对动物性食品中己烯雌酚的残留检测有重要意义。     

氯霉素对大型溞的急性和慢性毒性效应

[目的]评价氯霉素对水生生物的生态风险。[方法]以大型溞为研究对象,探讨不同浓度氯霉素对大型溞急性和慢性毒性。[结果]急性毒性试验结果表明,氯霉素对大型溞的48 h-EC50值为175.846 mg/L,属于低等毒性。21 d慢性毒性试验中各浓度处理对大型溞生长繁殖相关指标有不同程度的影响,且子代出现了不同程度的畸形现象。[结论]该研究结果为氯霉素水生生态毒性评价提供理论依据。     

大型溞对栅藻摄食行为及影响因素的研究

了解浮游动物与周围浮游植物的相互关系,对探讨富营养化的生态调控机制,促进水域生态环境的改善具有理论上的指导意义。为此,利用显微镜直接计数法研究了大型溞对栅藻的摄食率及一些影响因素?峁砻鳎?在全暗条件下,大型溞的摄食率要高于全光照条件。不同时刻,大型溞的摄食率也不同,在最初的4h内,大型溞对栅藻的摄食率和滤水速度明显较高,随后的时间内摄食率和滤水速度将显著降低并趋于稳定。随栅藻藻液密度增大,大型溞摄食率增大,但滤水速度减慢。盐度对大型溞的摄食率有一定的影响,在水体盐度为0.1%～0.2%时,大型溞摄食率增加,盐度进一步增大,则对大型溞的摄食产生抑制作用。     

温度、盐度对大型溞生长和生殖的影响

大型溲一般５个幼龄和１２￣１７个成龄,幼龄龄期各１ｄ左右,各成龄平均龄期在水温１５℃、１８℃、２１℃、２５℃下分别为３．５ｄ、２．６ｄ、２．５ｄ、２．１ｄ,龄期随温度降低和龄数增加而呈延长趋势。随温度升高大型溲生长加快,生长率在Ⅳ￣Ⅴ龄 达到高峰,随后Ⅴ￣Ⅵ龄的生长率显著下降了约６０％￣７０％。低温下生长率变化较高温相对平缓,后期低温下大型溲的生长与体长超过了高温。随温度升高,大型溲性成熟、产卵提前,生殖率加快,但生殖量显著下降。２１℃是大型溲繁殖的最适温度,其总生殖量最高,达５９１．９个,未经低盐度驯化的大型溲其２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ的半致死盐度（ＬＳ５０）分别为９．６５、９．４５、８．９８,生殖上限盐度为９．３左右。经低盐度短期驯化至８．５ｄ,其ＬＳ５０分别提高到１２．５４、１２．０５、１１．３,生殖上限盐     

抗麦草畏多克隆抗体的制备及其间接竞争ELISA检测方法的建立

为建立麦草畏的免疫分析方法,采用碳化二亚胺法将麦草畏(DIC)与卵清蛋白(OVA)和牛血清蛋白(BSA)偶联,分别合成免疫原与包被原;用合成的免疫原免疫新西兰大白兔获得抗麦草畏多克隆抗体,该抗体效价为1∶1.28×105,且该抗体与麦草畏的结构类似物2,3,5-三氯苯甲酸、2,3,6-三氯苯甲酸、2-氨基-3,5-二氯苯甲酸的交叉反应率均小于0.1%。以包被原1∶8 000和多抗溶液1∶80 000的稀释倍数为工作浓度,建立麦草畏间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法,此方法检测麦草畏的线性范围为1～100ng.mL-1,线性回归方程为y=8.684 4ln x+15.001,R2=0.994 4,最低检测限为IC20=1.779ng.mL-1;玉米粉和面粉空白样品的麦草畏添加回收实验表明,麦草畏添加值为5～30μg.kg-1时,玉米粉中的麦草畏回收率为53.08%～92.37%,面粉的回收率则分别为66.5%～94.63%。     

取代芳烃对大型蚤急性毒性的定量构效关系研究

[目的]建立具有良好相关性和稳定性的取代芳烃对大型蚤定量结构-活性关系（QSAR）模型。[方法]采用Gaussian03程序包中密度泛函理论（DFT）B3LYP方法计算取代芳烃的部分结构参数和毒性参数。[结果]-lgEC50的回归方程为-lgEC50=4.496＋1.5×10-2MM＋9.958×EHOMO＋0.677×ΔQR;方程中各自变量的变异膨胀因子（VIF）分别为：1.508、1.364和1.157。取代芳烃对大型蚤急性毒性的主要影响因子为分子量MM、分子最高占有轨道能EHOMO和苯环上净电荷增量ΔQR,且这3个结构参数与-lgEC50正相关,其标准系数分别为0.986、0.289和0.175。分子量越大,分子总能量（能量为负值）越低,化合物越稳定,毒性越大;分子量越大,lgP越大,化合物的脂溶性越大,毒性越大。[结论]该试验建立的模型具有良好的稳定性和很强的预测能力。     

温度、盐度对大型溞生长和生殖的影响

大型溲一般５个幼龄和１２￣１７个成龄,幼龄龄期各１ｄ左右,各成龄平均龄期在水温１５℃、１８℃、２１℃、２５℃下分别为３．５ｄ、２．６ｄ、２．５ｄ、２．１ｄ,龄期随温度降低和龄数增加而呈延长趋势。随温度升高大型溲生长加快,生长率在Ⅳ￣Ⅴ龄 达到高峰,随后Ⅴ￣Ⅵ龄的生长率显著下降了约６０％￣７０％。低温下生长率变化较高温相对平缓,后期低温下大型溲的生长与体长超过了高温。随温度升高,大型溲性成熟、产卵提前,生殖率加快,但生殖量显著下降。２１℃是大型溲繁殖的最适温度,其总生殖量最高,达５９１．９个,未经低盐度驯化的大型溲其２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ的半致死盐度（ＬＳ５０）分别为９．６５、９．４５、８．９８,生殖上限盐度为９．３左右。经低盐度短期驯化至８．５ｄ,其ＬＳ５０分别提高到１２．５４、１２．０５、１１．３,生殖上限盐     

灭多威对日本青鳉和大型溞乙酰胆碱酯酶的效应研究

[目的]研究不同浓度的灭多威对大型溞和日本青鳉乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的影响。[方法]通过测定灭多威对大型溞和日本青鳉的24 h LC50评价其毒性大小,并采用Ellman方法检测灭多威对生物体AChE活性的影响。[结果]灭多威对大型溞幼溞和日本青鳉的24 h LC50分别为9.83和185μg/L。随着灭多威暴露浓度的增加,对大型溞幼溞和日本青鳉AChE活性的抑制作用增强。在体内试验中,在灭多威连续暴露下乙酰胆碱酯酶的相对酶活总体呈下降趋势。在体外试验中,在一定的时间范围内灭多威对AChE活性的抑制率与暴露时间呈一定的线性关系,且随着暴露时间的延长而增大。[结论]体内和体外试验的结果表现出明显的差异性,因此在研究污染物对生物体酶活的影响时,应分别进行体内和体外试验。     

丁氟螨酯及其代谢物对大型溞的毒性效应

为评价丁氟螨酯及其代谢物[A-2、AB-1 dimer、AB-1、AB-11、B-1、B-3、Target 1(B-2)、Met-1]对水生生物的生态风险,采用半静态法测定丁氟螨酯及其8种代谢物对大型溞48 h暴露的急性毒性效应,以及丁氟螨酯对大型溞的21 d慢性毒性效应.结果表明:丁氟螨酯、Target 1(B-2)...