猪源分离大肠埃希菌产ESBLs的基因型及耐药性分析

为了解上海地区规模化猪场分离的大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的分离率、耐药性和基因型,收集2010年9月-2011年3月从上海地区10个规模化养猪场分离的296株大肠埃希菌,采用微量肉汤稀释法进行药敏试验以及PCR技术分别检测TEM、CTX-M、OXA和SHV基因。在296株大肠埃希菌中,52株大肠埃希菌产ESBLs,产酶率为17．6％。在52株ESBLs菌株中,46株为TEM型,占88．5％;15株为CTX—M型,占28．8％;11株为同时携带TEM型和CTX—M型,占21．2％。大肠埃希菌产ESBLs株对10种常用抗菌药物的耐药性较为严重,而且存在多重耐药;上海地区猪源大肠埃希菌产ESBLs株流行的主要基因型为TEM型和CTX—M型。     

苦参碱和氧化苦参碱对奶牛子宫内膜炎致病菌体外抑制试验

为了确定苦参碱和氧化苦参碱对奶牛子宫内膜炎致病菌的体外抑菌活性,选取奶牛子宫内膜炎致病菌大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌为供试菌株,采用纸片扩散法、牛津杯法对2种生物碱进行了药敏试验,采用液体倍比稀释法测定了其最小抑菌浓度(MIC)。结果表明,苦参碱和氧化苦参碱对奶牛子宫中分离的耐药性大肠埃希菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)均有一定的抑制作用。苦参碱对耐药性大肠埃希菌和MRSA的MIC分别为12.5 mg/mL和25 mg/mL,氧化苦参碱对耐药性大肠埃希菌和MRSA的MIC分别为25mg/mL和50mg/mL。     

动物源大肠埃希菌gyrA基因突变与氟喹诺酮耐药相关性分析

为了解动物源大肠埃希菌对氟喹诺酮类药物的耐药情况及其与gyrA基因突变的联系,采用微量肉汤稀释法测定200株猪鸡源大肠埃希菌对恩诺沙星和氧氟沙星的最低抑菌浓度(MIC);对大肠埃希菌的gyrA基因片段进行PCR扩增,产物进行变性高效液相色谱(DHPLC)检测和序列测定。结果表明,200株动物源大肠埃希菌对恩诺沙星和氧氟沙星的耐药率分别为44.5%和41.0%;144株大肠埃希菌gyrA基因产物的DHPLC图谱有异常峰型,即核苷酸突变率为72.0%;测序证实gyrA基因存在5个突变位点,其中2个位点的突变可导致Ser83→Leu和Asp87→Asn/Tyr,突变率分别为54.0%和24.0%,其余3个位点为同义突变点;结合恩诺沙星耐药情况可知,敏感菌株gyrA基因的氨基酸突变率最低(18.5%),其次为中介菌株(56.5%),耐药菌株最高(78.6%),氧氟沙星测试结果与此趋势一致。由此可知动物源大肠埃希菌gyrA基因突变引起的氨基酸替代与氟喹诺酮耐药高度相关。     

宁夏地区犊牛腹泻型产ESBLs大肠埃希氏菌的筛选及相关基因型分析

旨在明确宁夏地区犊牛腹泻型产ESBLs大肠埃希氏菌的阳性率及相关基因型的携带情况。采集犊牛腹泻样本180份,采用麦康凯培养基和伊红美蓝培养基进行筛选,疑似大肠埃希氏菌的菌株进行PCR鉴定,用ESBLs表型检测方法进行产ESBLs菌株的筛选,用PCR进行相关基因的检测。结果显示,共鉴定出大肠埃希氏菌74份,51株为产ESBLs菌株,检出率为68.92%(51/74),其中bla-TEM、bla-CTX、bla-CTX-M-9基因阳性率均为100%,bla-OXA基因阳性率为50.98%,bla-SHV基因阳性率为23.53%。分离株携带CTX+CTX-M-1+CTX-M-9+TEM基因的菌株占比最高,为21.57%。结果表明,优势基因型为bla-TEM、bla-CTX和bla-CTX-M-9。     

羔羊源产ESBLs与非产ESBLs大肠埃希氏菌耐药性差异比较及基因型分析

为了明确宁夏地区羔羊源大肠埃希氏菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)与非产ESBLs大肠埃希氏菌的耐药性差异和相关基因携带情况差异,对实验室分离保存的87株羔羊源大肠埃希氏菌,采用ESBLs表型检测方法筛选产ESBLs的菌株和K-B纸片法进行药物敏感性试验,采用PCR法对分离株进行相关基因的检测。结果显示,87株大肠埃希氏菌中5株为产ESBLs菌株,检出率为5.75%。产ESBLs株对多数试验药物呈耐药性;而非产ESBLs菌株对多数试验药物敏感,仅对恩诺沙星、复方新诺明和红霉素耐药率超过50%。20种药物中,产ESBLs株大肠埃希氏菌对18种药物的耐药率极显著高于非产ESBLs菌株(P<0.01)。产ESBLs菌株携带blaCTX的阳性率极显著高于非产ESBLs菌株(P<0.01),产ESBLs菌株中的blaTEM和blaOXA基因的阳性率均高于非产ESBLs菌株,但差异不显著(P>0.05)。结果表明宁夏地区羔羊源大肠埃希氏菌产ESBLs菌株流行率低,产ESBLs菌株耐药性严重,且宁夏地区羔羊源ESBLs菌株优势基因型为blaCTX和blaTEM。     

鸡源大肠埃希菌的耐药性与分子分型研究

为了解规模化养殖厂鸡源大肠埃希菌的耐药性以及分子流行规律和特征,为该菌的分子溯源及风险评估提供依据,本研究收集2013-2014年上海地区养殖场分离的鸡源大肠埃希菌共计741株,采用微量稀释肉汤法分别对常用的9类13种抗菌药物进行药物敏感性测定,以了解大肠埃希菌的耐药表型。在筛选出多重耐药严重的菌株后,同时采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法及核糖体(RP)分型方法进行分子分型分析。结果显示,2013-2014年所分离的鸡源大肠埃希菌对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、大观霉素、四环素、多西环素、氟苯尼考、磺胺异噁唑、复方新诺明、氧氟沙星和恩诺沙星的耐药率较高,在50%以上,且主要为多重耐药菌株。用XbaⅠ酶切后进行PFGE分析,结果表明,29株鸡源大肠埃希菌可分为22个带型;EcoRⅠ酶切后的RP聚类分析结果表明,鸡源大肠埃希菌分为14个带型。鸡源大肠埃希菌耐药率较高,同一分型菌株的耐药谱型并非完全一致,菌株基因型呈多态性。     

广东水禽源大肠埃希菌耐药性及氨基糖苷类耐药基因研究

为了调查广东地区水禽源大肠埃希菌对氨基糖苷类药物耐药现状和耐药基因的流行情况,探索大肠埃希菌的氨基糖苷类耐药基因型与耐药表型之间的关系,本研究采用琼脂梯度稀释法测定251株广东地区水禽源大肠埃希菌对氨基糖苷类药物的耐药性和采用PCR方法检测耐药基因。药敏试验结果显示,大肠埃希菌对链霉素耐药较严重,鸭源和鹅源的耐药率分别为81.58%和75.43%,对庆大霉素和卡那霉素较敏感,耐药率分别为25%和54.86%,对阿米卡星最为敏感,其中鸭源的菌株耐药率仅为1.32%。PCR方法检测显示,aadA1和aph(3′)-1检出率较高,为84.6%和91.9%,表明携带aadA1和aph(3′)-1耐药基因的水禽源大肠埃希菌在广东地区呈流行趋势。耐药基因型与耐药表型相关性分析结果显示,耐药基因rmtB的携带与4种药物(庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素和壮观霉素)耐药株的产生具有显著相关性,表明耐药基因rmtB对大肠埃希菌耐药株的产生起重要的作用。本试验结果可为指导广东地区水禽大肠埃希菌病的临床用药提供理论基础和研究大肠埃希菌的耐药基因提供相关的数据。     

腹泻仔猪肠道致病性大肠埃希氏菌和沙门氏菌的分离鉴定与耐药性研究

为探明仔猪细菌性腹泻肠道致病性大肠埃希氏菌和沙门氏菌流行的血清型、耐药表型及耐药基因型,本试验采集了贵州省5个地（州）市7个规模化养猪场的128份腹泻仔猪肠道样本,并对采集的样本进行了大肠埃希氏菌和沙门氏菌分离与鉴定,通过动物试验鉴定菌株的致病性,利用血清学方法鉴定其血清型,并通过药敏纸片法对主要致病菌进行耐药性研究,采用PCR技术检测各致病菌株耐药相关基因,分析细菌耐药表型和耐药基因型相关性。结果显示,本研究共分离鉴定到78株致病性大肠埃希氏菌与21株沙门氏菌,致病性大肠埃希氏菌血清型以O138、O87为主,沙门氏菌血清型以鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌居多;药敏试验结果表明,本试验分离到的78株致病性大肠埃希氏菌对β-内酰胺类药物耐药率达80%以上,对其他种类的抗菌药耐药率均超过40%,分离鉴定的21株沙门氏菌对氨基糖苷类药物耐药率达50%以上,对其他种类的抗菌药耐药率均达20%以上;本试验分离鉴定的致病性大肠埃希氏菌共检出12种耐药相关基因,沙门氏菌共检出10种耐药相关基因,两种细菌耐药基因型与耐药表型符合率均达60%以上,且均为多重耐药。本研究为仔猪腹泻的综合防控提供了理论依据。     

牦牛源致病性大肠埃希菌PCR检测方法的建立

为快速诊断犊牦牛大肠埃希菌感染情况,本研究从100份腹泻犊牦牛粪便中分离致病性大肠埃希菌,根据已发表的致病性大肠埃希菌外膜蛋白紧密素eae基因序列,设计合成了1对特异性引物,建立了牦牛源致病性大肠埃希菌PCR检测方法,并经实验验证该方法特异性及敏感性均较好,检测下限为3.6×102 cfu/mL.     

狐狸源大肠埃希菌TEM1型耐药基因检测和耐药质粒消除研究

研究大肠埃希菌耐药性和耐药基因和十二烷基硫酸钠(SDS)对大肠埃希菌耐药质粒消除作用。以大肠埃希菌临床分离株为试验菌株,采用K-B药敏纸片法对6种抗菌药物进行药物敏感性检测,并对大肠埃希菌耐药质粒TEM1型耐药基因进行PCR检测,采用SDS消除大肠埃希菌临床分离菌株的耐药质粒,采用琼脂糖凝胶电泳检测质粒条带,药敏试验检测大肠埃希菌耐药质粒消除前后的药物敏感性。结果表明,大肠埃希菌对庆大霉素敏感,对大观霉素中敏,对氨苄西林、阿莫西林、头孢拉定、环丙沙星耐药;大肠埃希菌耐药质粒检测出TEM1型耐药基因;试验菌株经7.5g/L的SDS处理至第3代时,质粒条带有明显的减少,TEM1型耐药基因消失,并且恢复了对β内酰胺类抗生素的敏感性,说明耐药质粒已经成功消除。     

畜禽源耐黏菌素大肠埃希氏菌的分离鉴定与特性分析

我国从2017年4月30日起禁止将黏菌素作为动物促生长剂使用,为评估禁用政策效果,并了解畜禽源耐黏菌素大肠埃希氏菌对临床常用药物的耐药情况,在2017年和2020年分别从长春市3个畜禽养殖场采集373份粪便样品分离鉴定出546株耐黏菌素大肠埃希氏菌。分离菌株对黏菌素的MIC为0.25 mg/L～8 mg/L,2020年MIC≥2 mg/L菌株分离率(18.02%)低于2017年(26.24%);16种药物敏感性测定中,2017年和2020年均以耐4种抗生素占比最高,2020年多重耐药菌株占比(60.25%)低于2017年(80.85%);PCR鉴定出34株mcr-1基因阳性菌株,2020年mcr-1基因检出率(3.21%)低于2017年(14.89%);2017年mcr-1基因阳性大肠埃希氏菌中检测到12种类型质粒,2020年mcr-1基因阳性大肠埃希氏菌中检测到7种类型质粒,携带的质粒类型减少。结果表明,禁止黏菌素作为饲料添加剂使用后对大肠埃希氏菌的黏菌素耐药性有很大的影响,但多重耐药情况依然较严重,携带质粒复制子复杂多样,应当持续进行监测。     

藏系绵羊源沙门菌和产志贺毒素大肠埃希菌的分离与PCR鉴定

为研究外观健康藏系绵羊携带沙门菌和产志贺毒素大肠埃希菌情况,对采自外观健康藏系绵羊的19份肛门拭子进行大肠埃希菌和沙门菌分离鉴定.用选择性培养基及普通PCR方法共分离鉴定出1株沙门菌和13株大肠埃希菌,其中产志贺毒素大肠埃希菌4株,3株含有产志贺毒素基因Stx 1,1株含有产志贺毒素基因Stx 2,沙门菌invA基因和产志贺毒素大肠埃希菌Stx基因同源性分析表明,分离株沙门菌的invA与NCBI上已登录的5种血清型沙门菌核苷酸序列同源性为99.8％,4株产志贺毒素大肠埃希菌与NCBI上已登录菌株的核苷酸序列同源性都大于95％.本研究结果为高原地区藏系绵羊源沙门菌和产志贺毒素大肠埃希菌的流行病学调查奠定了基础.     

不同地区猪源大肠埃希菌磺胺类药物耐药性研究

对不同地区猪源大肠埃希菌磺胺药物耐药性进行系统性调查研究.对从山东、内蒙古、山西分离到的161株猪源大肠埃希菌测定磺胺药物对其最低抑菌浓度(MIC值),结果表明大肠埃希菌对磺胺药物高度耐药,对磺胺异恶唑(SF)和新诺明(SMZ)的耐药率分别为91.30%和90.06%.同时根据GenBank上已有的二氢叶酸合成酶基因S...     

动物源大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶与头孢菌素酶基因型分析

为了解重庆地区动物源大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)及头孢菌素酶(AmpC)基因型的分布,利用初筛及表型确认方法,从临床分离的192株仔猪白痢大肠杆菌、65株奶牛乳腺炎大肠杆菌、69株鸡大肠杆菌中筛选出19株产ESBLs、6株产ArnpC酶大肠杆菌,并应用PCR扩增及PCR产物测序方法进行ESBLs及AmpC基因型分析.结果显示,重庆地区动物源大肠杆菌携带TEM型、CTX-M型、DHA-1型和CMY-2型基因的阳性率分别为2.15%、5.21%、0.61%和0.61%.其中,有5株同时携带2种基因.而DHA-1型基因为国内兽医临床首次检出,获得GenBank登录号为FJ386455.结果提示,重庆地区以TEM型和CTX-M型β-内酰胺酶为主,且产ESBLs与AmpC酶大肠杆菌为多重耐药菌株,需引起兽医临床的高度重视.     

犬源大肠埃希菌对β-内酰胺类药物的耐药表型和耐药基因检测

为研究犬源大肠埃希菌的耐药情况,对成都地区采集的犬肛门拭子进行细菌分离鉴定,共分离156株大肠埃希菌,同时,进行5种抗生素耐药性检测和β-内酰胺类药物耐药基因的菌株筛选。结果显示,大肠埃希菌对β-内酰胺类耐药率较高,头孢喹肟100%,氨苄西林73.1%,但对美罗培南敏感率高达95.5%。采用PCR方法检测β-内酰胺类药物常见的3种耐药基因blaCTX-M、blaSHV和blaTEM,blaCTX-M检出率最高为89.74%,blaTEM为78.84%,blaSHV无检出。耐药性和耐药基因比较表明,犬源大肠埃希菌β-内酰胺类的耐药性与耐药基因型检出率基本呈正相关,为成都犬源大肠埃希菌β-内酰胺类药物的耐药现状和疾病治疗提供了理论依据。     

肉牛溶血性大肠埃希菌分离鉴定和毒力与耐药基因检测及药敏试验

为了解肉牛溶血性大肠埃希菌毒力基因和耐药基因分布情况及药物敏感性,从河北省围场县采集的健康肉牛鼻腔棉拭子中分离鉴定溶血性大肠埃希菌,采用PCR检测大肠埃希菌的4个毒力基因和12个耐药基因,并采用K-B法进行药敏试验。结果表明,从116份健康的肉牛鼻腔中分离鉴定出23株溶血性大肠埃希菌,分离率为19.8%;毒力基因检测结果显示,6株菌同时携带LEE(Ler、eaeA)毒力基因,携带率26.1%,18株同时携带高致病性毒力基因HPIirp2、fyuA,携带率78.3%,6株同时携带LEE和HPI毒力基因,携带率为26.1%;耐药基因检测结果显示,blaTEM、aadA1耐药基因的携带率最高,为100%;药敏试验结果显示,23株溶血性大肠埃希菌对头孢氨苄、复方新诺明、磺胺间甲氧嘧啶耐药。结果表明,溶血性大肠埃希菌普遍存在于健康肉牛鼻腔中,HPI毒力基因和β-内酰胺类和耐链霉素类耐药基因携带率高。对河北省围场县肉牛溶血性大肠埃希菌毒力基因和耐药基因进行了研究,并进行药物敏感性分析,结果提示溶血性大肠埃希菌对肉牛养殖存在潜在威胁。     

16S rRNA甲基化酶rmtB在猪肠道菌中的传播方式分析

为研究16S rRNA甲基化酶rmtB在猪肠道菌中的传播方式,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分别对来源于A、B猪场的48株rmtB阳性大肠埃希氏菌进行基因分型;用膜接合试验研究rmtB基因的水平传播方式;用微量稀释法对rmtB阳性菌及其接合子进行药敏试验。有45株rmtB阳性大肠埃希氏菌(45/48)能进行PFGE分型,可分为28种不同的PFGE基因型。其中来源于A猪场的20株菌可分为12种基因型,来源于B猪场的25株菌可分为16种基因型;46株rmtB阳性菌可以通过接合试验将rmtB基因及其介导的耐药性传递给受体菌E.coliC600和E.coli488 Rifr,接合频率从4.6×10-13~3.0×10-6不等,接合子对卡那霉素、阿米卡星、妥布霉素、西梭米星、萘替米星、庆大霉素6种二脱氧链霉胺类抗生素均高度耐药(MIC≥512μg/mL)。结果表明,rmtB基因位于接合性质粒上,该基因在两猪场的大肠埃希氏菌中既存在克隆传播,又存在水平传播,以水平传播为主。     

3株猪源大肠埃希氏菌耐药基因的初步定位

本试验旨在对临床分离的猪源大肠埃希氏菌耐药基因进行初步定位。采用常规细菌分离培养、16S rRNA PCR扩增和序列测定方法从江西省3个规模化猪场送检的子宫脓液中分离鉴定病原菌,并通过质粒提取、转化大肠埃希氏菌DH5α感受态细胞及药敏试验对临床分离株的耐药基因进行初步定位。结果显示,分离鉴定到3株大肠埃希氏菌,其中JX-22分离株仅对氧氟沙星、大观霉素敏感,JX-26分离株仅对链霉素、氧氟沙星等4种药物敏感,JX-28分离株仅对氧氟沙星等3种药物敏感,均为多重耐药菌;3株大肠埃希氏菌均可纯化到分子质量大小不一的质粒。分离株、质粒转化菌及大肠埃希氏菌DH5α感受态细胞药敏试验对比结果显示,3株大肠埃希氏菌的耐链霉素、林可霉素、甲硝唑、氨苄西林、阿莫西林、大观霉素、丁胺卡那基因,JX-22和JX-26分离株的耐多西环素、氟苯尼考和复方新诺明基因,JX-22分离株的耐头孢曲松基因,JX-28分离株的耐头孢曲松、头孢噻肟、诺氟沙星基因均定位于细菌质粒上;JX-28分离株的耐多西环素、氟苯尼考和复方新诺明基因,JX-22分离株的耐诺氟沙星基因和JX-26分离株的耐头孢曲松、头孢噻肟基因均定位于其染色体上;3株分离株均无氧氟沙星耐药基因。本试验初步确定3株多重耐药猪源大肠埃希氏菌的大部分耐药基因定位于质粒上,为进一步研究猪源大肠埃希氏菌的耐药机理和有效控制措施奠定基础。     

树鼩源大肠埃希氏菌耐药性分析与毒力因子鉴定

为了解树鼩源大肠埃希氏菌遗传进化同源性、对药物的敏感性以及所携带的毒力因子种类等,对广西南宁某大学人工驯化养殖的10只树鼩肠道内容物进行大肠埃希氏菌的分离纯化、生化分析及药敏试验等,并应用PCR技术对菌株进行16S rRNA同源性分析、毒力基因及耐药基因的检测.10份树鼩肠道内容物经分离纯化共分离出9株大肠埃希氏菌.同...     

磷霉素钠和硫酸阿米卡星体外联合抗大肠埃希菌试验

用磷霉素钠和硫酸阿米卡星单一药物和联合使用对大肠埃希菌进行药物敏感性试验。结果表明,磷霉素钠和硫酸阿米卡星对大肠埃希菌的MIC值分别为64μg/mL和22μg/mL。联合应用对大肠埃希菌FIC指数为0.45,小于0.5,表现为协同作用。