沙门菌多重PCR检测方法的建立及其应用

为鉴定临床上常见的3种沙门菌血清型,针对特异性基因invA(沙门菌属)、sdfl(肠炎沙门菌)、Stm4495(鼠伤寒沙门菌)和SPUL-2693(鸡白痢沙门菌)设计引物,利用标准菌株通过优化体系成功建立了沙门菌的四重PCR检测方法.结果 显示:该方法特异性好,敏感性高(检测下限:基因组为500 pg/mL,菌液为10...     

鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌PCR-RFLP鉴别

根据鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌flic基因可变区两端的保守序列设计1对引物,PCR扩增出约866 bp的产物,用HinplI对PCR产物进行酶切,经RFLP分析区分鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌.利用该技术对1株鸡白痢沙门菌标准株及2株鸡伤寒沙门菌标准株进行分子鉴别,结果与预计的RFLP模式相符,证明该方法可行.在此基础上...     

鸡白痢沙门菌基因组差异片段的筛选与分析

采用抑制性消减杂交技术（SSH）对鸡白痢沙门菌C79-13株与鸡伤寒沙门菌Sg9株进行了基因组差异片段分析.结果,从C79-13株中共检出13个特异性差异片段.经同源分析,这些序列可分为3类：噬菌体相关序列、质粒相关序列和已知功能序列.这些差异片段包含一些重要的沙门菌毒力相关基因,如编码大肠杆菌素、IpaJ蛋白、尾突蛋白、切除酶的基因.结果表明,鸡白痢沙门菌C79-13株与鸡伤寒沙门茵Sg9株基因组问存在较多差异基因,这些差异片段为确定鸡白痢沙门菌特异性遗传标志,建立分子鉴别新体系提供了基础.     

鸡白痢与鸡伤寒沙门菌双重PCR方法的建立和初步应用

分析不同血清型/生物型沙门菌全基因组序列筛选出鸡白痢和鸡伤寒沙门菌特异性基因组序列,设计两对引物,建立双重PCR方法鉴别检测鸡白痢和鸡伤寒沙门菌不同生物型,并进行初步的临床应用。双重PCR方法结果显示,鸡白痢沙门菌显示417 bp条带,鸡伤寒沙门菌显示417 bp和636 bp两个条带,而阴性对照未出现条带,与预期设计相符。双重PCR体系对56株不同血清型沙门菌鉴定结果与细菌学分离的血清型鉴定结果完全一致,说明本试验建立的双重PCR体系特异性良好,应用上述方法检测鸡场疑似20份临床样本,结果发现8株鸡白痢沙门菌阳性,1株鸡伤寒沙门菌阳性。上述结果表明,已建立双重PCR方法特异性检测鸡白痢和鸡伤寒沙门菌。本试验为鸡白痢和鸡伤寒不同生物型沙门菌的检测提供了一种简洁、敏感、特异的新方法。     

鸡白痢沙门菌研究进展

鸡白痢沙门菌是鸡白痢的病原,具有高度适应专一宿主的特点。它可引起雏鸡的急性全身性感染,发病率和病死率极高;成年鸡被感染后可引起体质量下降、产蛋率和孵化率降低、组织病变、白痢和生殖道畸形等,给很多国家的养鸡业带来巨大危害,并引起严重的经济损失。为了更好的预防和控制、甚至最终净化该病,需要对鸡白痢沙门菌进行深入的研究。本文从病原学及其基因组特征、流行病学、致病性及毒力基因、检测方法和防控措施等方面介绍了鸡白痢沙门菌的研究进展,并对其研究趋势进行了展望。     

2018年河南省规模化鸡场鸡白痢血清学调查

为了解河南省规模化鸡场鸡白痢流行情况,对河南省106个规模化鸡场进行了鸡白痢血清学检测,并对检测结果进行空间和群间分布分析。结果显示:河南省规模化鸡场鸡白痢场群阳性率为16.98%,个体阳性率为3.60%;豫西地区场群阳性率和个体阳性率均最高,分别为53.85%和7.47%;种鸡场场群阳性率和个体阳性率分别为35.71%和4.90%,商品代鸡场场群阳性率和个体阳性率分别为10.26%和2.98%,种鸡场场群阳性率和个体阳性率均高于商品代鸡场。调查结果表明,河南省规模化鸡场鸡白痢流行情况较为严重,不同区域、不同类别场点流行情况并不一致,需加强监测,制定相应的防控净化措施。     

禽沙门氏杆菌病的防治

禽沙门氏杆菌病是由沙门氏菌属中一种或几种沙门氏菌引起的禽类一种急性或慢性疾病。鸡沙门氏菌病包括鸡白痢、禽伤寒和禽副伤寒。其中前两者是由单一沙门氏菌引起的,如鸡白痢为鸡白痢沙门氏菌引起,禽伤寒为禽伤寒沙门氏菌引起。而禽副伤寒则由多种沙门氏菌引起,凡不属于前两种沙门氏菌引起的禽沙门氏菌病统称为禽副伤寒病。本病遍市于世界各地,不仅严重危害养禽业的发展,而且还威胁到人类的健康,是一种人畜共患的传染病。     

农村禽散养户禽沙门氏菌病的防治

禽沙门氏菌病是由禽沙门氏菌属中的一种或多种沙门氏菌所引起的急性或慢性疾病总称,依病原体不同可分3种,由鸡白痢沙门氏杆菌引起的鸡白痢,由鸡伤寒沙门氏杆菌引起的禽伤寒和以鼠伤寒沙门氏杆菌为主的多种沙门氏杆菌引起的禽副伤寒。其中鸡白痢为最常见,危害也最大,笔者曾深入农村,走访调查了许多养殖户,发现养殖环境卫生较差,此病发病率,死亡率都较高。     

基于鸡白痢沙门菌LPS的D群沙门菌抗体间接ELISA检测方法的建立

通过热酚水法提取并纯化鸡白痢沙门菌的脂多糖(lipopolysaccharide, LPS),以LPS作为包被抗原,建立D群沙门菌抗体间接ELISA检测方法。结果显示,通过方阵滴定法等确定抗原包被质量浓度为2.233 mg/L;血清最佳稀释度为1∶200,最佳作用时间为60 min;最适封闭条件为5%脱脂乳封闭60 min;酶标二抗最适工作质量浓度为1∶8 000,作用60 min;底物显色时间为15 min;阴阳性判定标准为S/P值≥0.5。特异性、敏感性和重复性验证表明,该方法可特异性检测鸡白痢沙门菌等D群沙门菌的阳性血清,与鼠伤寒沙门菌、大肠杆菌等家禽病原菌的阳性血清无交叉反应,其检测灵敏度是鸡白痢平板凝集的400倍,批间重复和批内重复变异系数均小于10%。对临床血清的检测结果表明,该方法与Biochek公司的D群抗体检测试剂盒的阳性符合率为94.67%,阴性符合率为98.11%,总符合率为98.59%。结果表明,该检测方法可用于临床鸡白痢沙门菌等D群沙门菌感染的抗体检测。     

白痢沙门菌CpxR的生物信息学分析和原核表达

对白痢沙门菌二元调控系统响应蛋白CpxR进行生物信息学分析,提示CpxR可能发挥了重要的生理功能。同时,构建了重组表达载体pET32a-CpxR,转化表达菌株BL21后,对其进行诱导表达,SDS-PAGE和Western blot结果表明CpxR获得了正确表达。纯化蛋白免疫小鼠制备了多抗血清,Western blot验证其有一定的免疫原性。为深入研究其生理功能和调控机制奠定了理论基础。     

鸡白痢、鸡伤寒沙门菌分子分型方法的验证

为验证鸡白痢、鸡伤寒沙门菌分子分型方法的准确性,本研究以3株鸡白痢、鸡伤寒沙门菌国际参考菌株和306株国内分离株为研究对象,采用5种已知的分子分型方法开展验证性实验。结果发现,基于特定基因可变区的2种分型方法具有良好的特异性,其检测结果与生化分型结果一致,而3种基于特定基因单核苷酸多态性的分型方法则出现假阳性或假阴性的结果。上述结果表明,鸡白痢、鸡伤寒沙门菌分子分型方法的准确性仍需进一步验证。     

玉林市部分规模化鸡场鸡白痢血清学调查

2020年对玉林市玉州区4个镇街96个规模化养鸡场进行了鸡白痢血清检测,并进行空间和群间分布分析。发现鸡白痢流行情况较为严重,不同地区不同类型养殖场的流行情况存在差异性,种鸡场的阳性率高于商品鸡场。这就需当地动物防疫部门加强监测,并制定针对性的预防净化措施,确保在短时间内控制鸡白痢的发生流行,保证鸡业养殖的安全。     

禽沙门氏菌的分离和鉴定

禽沙门氏菌病是由沙门氏菌属中的某一种或多种沙门氏菌引起的禽类急性或慢性疾病的总称。沙门氏菌是肠杆菌科中一大属,有2000多个血清型,广泛存在于人和各种动物的肠道内。在自然界中,家禽是其最主要的贮存宿主,沙门氏菌依病原体抗原结构的不同分为鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌和其他有鞭毛能运动的沙门氏菌,鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌主要引起鸡和火鸡发病,其他有鞭毛能运动的沙门氏菌广泛感染各种动物和人。它不但会对畜牧业生产造成严重的经济损失,而且会严重威胁人类的健康。     

禽沙门氏菌的分离和鉴定

禽沙门氏菌病是由沙门氏菌属中的某一种或多种沙门氏菌引起的禽类急性或慢性疾病的总称。沙门氏菌是肠杆菌科中一大属,有2000多个血清型,广泛存在于人和各种动物的肠道内。在自然界中,家禽是其最主要的贮存宿主,沙门氏菌依病原体抗原结构的不同分为鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌和其他有鞭毛能运动的沙门氏菌,鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌主要引起鸡和火鸡发病,其他有鞭毛能运动的沙门氏菌广泛感染各种动物和人。它不但会对畜牧业生产造成严重的经济损失,而且会严重威胁人类的健康。     

贵州省部分规模化鸡场鸡白痢血清学调查

为了解贵州省规模化鸡场鸡白痢流行现状,2017—2019年选取31个规模化鸡场抽检1340份鸡血清样品,采用鸡白痢抗体平板凝集试验,结合鸡场生物安全措施及净化情况,开展了鸡白痢血清学调查.结果显示:鸡白痢平均场群阳性率为83.87％,个体阳性率为13.43％;商品场(15.24％)鸡白痢个体阳性率最高,与父母代鸡场差异...     

碳量子点应用于鼠伤寒沙门菌检测的初步研究

旨在制备基于碳量子点(carbon quantum dots,CDs)的免疫荧光探针,初步建立鼠伤寒沙门菌的快速检测方法,以柠檬酸和尿素作为碳源,利用微波法对碳量子点制备的微波时间、透析袋规格等条件进行了优化,再使用化学偶联法将碳量子点与鼠伤寒沙门菌抗体结合制备免疫荧光探针C-IgG,使之借助抗原抗体特异性结合和荧光实...     

鸡白痢沙门菌等位基因特异性PCR检测方法的建立

根据鸡白痢沙门菌与鸡伤寒沙门菌的rfbS基因在第237和第598位碱基的不同，设计和合成了等位基因特异性PCR引物，建立了快速检测鸡白痢沙门菌的PCR方法，并应用该方法对鸡白痢沙门菌临床分离样品进行了PCR鉴定。结果显示，该PCR方法能够特异性地鉴定鸡白痢沙门菌，检测灵敏度达100PgDNA。对35个经常规方法鉴定的鸡白痢沙门菌分离株应用等位基因特异性PCR方法进行鉴定，鉴定出33株鸡白痢沙门菌，符合率为94．3％。表明，建立的等位基因特异性PCR方法能够准确而快速地鉴定鸡白痢沙门菌。     

双重放大酶免疫传感器检测鸡白痢鸡伤寒沙门菌

为探求新型鸡白痢鸡伤寒沙门菌快速检测技术,本研究首次利用多壁碳纳米管与离子液体[BMIM] PF6修饰四通道丝网印刷碳电极,制成双重放大信号检测鸡白痢鸡伤寒沙门菌的酶免疫传感器.用原子力显微镜表征其表观形态,循环伏安法监测其电化学特性.结果表明,在优化的检测条件下,免疫电极对目标菌的线性响应范围为103～109 cfu· mL-1,检出限为3.93×102 cfu·mL-1(S/N=3),4℃放置28 d后,响应电流为初始值的90.15％,具有良好的稳定性、特异性、重现性和准确性.多壁碳纳米管与离子液体结合制备的鸡白痢鸡伤寒沙门菌酶免疫传感器实现了检测信号的双重放大,检测灵敏度高,离子液体有助于保持酶标抗体的活性,延长免疫电极的有效时间.依据该方法构建的酶免疫传感器为快速检测其它致病菌酶免疫传感器的研究提供了良好的参照模型.