A型魏氏梭菌α毒素羧基端蛋白基因表达与结构分析

利用PCR技术将α毒素羧基端基因CPA251-370克隆到pET-32a载体上,构建了重组表达质粒pXETCPA-C,酶切鉴定和序列分析证实其含有CPA251-370基因且序列和阅读框架均正确。对重组菌株BL21(DE3)(pXETCPA-C)表达的蛋白质进行SDS-PAGE分析,结果表明CPA251-370蛋白表达量占菌体总蛋白质相对含量的16.43%。SOPMA法预测表明CPA251-370蛋白二级结构主要由β折叠和无规则卷曲组成,其3D结构与α毒素羧基端部分相似。CPA和CPA251-370蛋白的圆二色(CD)光谱分析发现两者的CD光谱仅有一些微小变化。免疫攻毒试验表明CPA251-370蛋白免疫的小鼠能抵抗最小致死剂量(MLD) 0.5 mL·只~(-1)(活菌数约为5×10~9 cfu)的A型魏氏梭菌标准株C57-1毒素攻击。该研究深入阐释了A型魏氏梭菌α毒素的分子结构,为揭示其作用的分子机制奠定了坚实基础。     

獭免A型魏氏梭菌病的诊治

魏氏梭菌又称魏氏梭菌性肠炎或兔肠毒血症，主要是由A型魏氏梭菌及其毒素引起的以急性水样腹泻和高死亡率为特征。     

头功铁药散对A型魏氏梭菌α毒素的mRNA表达及损伤小鼠免疫功能的影响

探讨自拟处方头功铁药散对A型魏氏梭菌α-毒素损伤小鼠免疫功能的影响,并检测了α毒素mRNA表达的情况.检测小鼠部分免疫功能;荧光定量RT-PCR法检测α毒素基因mRNA表达的变化.结果显示,与模型组相比,头功铁药散能拮抗α-毒素对小鼠的损伤,极显著提高小鼠免疫器官指数及巨噬细胞的吞噬能力(p0.01);与细菌模型组相比,头功铁药散能极显著降低α毒素基因表达(p0.01).推测头功铁药散可通过提高小鼠免疫功能,并下调α毒素基因表达,从而减少α-毒素对小鼠的损伤.     

C型魏氏梭菌外毒素产生的主要影响因素研究

从不同菌株、不同培养基、不同培养温度和不同培养时间对C型魏氏梭菌在培养过程中毒素产生的影响及不同菌株的交叉保护力方面进行了研究.结果表明,在3株C型魏氏梭菌中.C_(59-2)株在相同培养条件下产生的毒素最高,肉肝胃酶消化汤更有助于该菌株产生高滴度的致死性毒素,并且在35℃培养16-20 h后可产生较高滴度的致死性毒素,1μL魏氏梭菌培养物上清液即可致8/8小鼠死亡,不同菌株之间具有较好的交叉免疫力,这些结果为研制C型魏氏梭菌高效疫苗打下了基础.     

魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条的研制

【目的】研制魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条,为魏氏梭菌病的快速诊断提供新方法。【方法】采用分子生物学方法制备魏氏梭菌α毒素,将其免疫家兔制备多克隆抗体。用制备的抗魏氏梭菌α毒素多克隆抗体作为胶体金标记抗体和检测线上的捕获抗体,制备魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条,对其特异性、敏感性、稳定性和重复性进行检测。用制备的魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条对临床样品进行检测,比较其检测结果与PCR检测结果的符合率。【结果】成功制备了魏氏梭菌α毒素多克隆抗体。成功研制了α毒素快速诊断金标试纸条,其检测线上抗体的最适包被质量浓度为0.06 μg/mL。研制的试纸条仅与魏氏梭菌α毒素发生反应,且不同批次的试纸条重复检测结果无差异,表明试纸条具有较高的特异性和重复性;该试纸条最低可检测1.40 mg/mL的毒素量,与PCR方法测得结果符合率为80.77%,基本能满足实际应用要求。【结论】成功研制了魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条,该试纸条具有快速、特异、敏感、稳定等优点,适用于对魏氏梭菌病进行普查和检疫,具有良好的应用前景。     

头功铁药散对 A 型魏氏梭菌α毒素的 mRNA表达及损伤小鼠免疫功能的影响

探讨自拟处方头功铁药散对 A 型魏氏梭菌α毒素损伤小鼠免疫功能的影响,并检测了α毒素 mRNA 表达的情况．检测小鼠部分免疫功能;荧光定量 RT‐PCR 法检测α毒素基因 mRNA 表达的变化．结果显示,与模型组相比,头功铁药散能拮抗α毒素对小鼠的损伤,极显著提高小鼠免疫器官指数及巨噬细胞的吞噬能力（p ＜0.01）;与细菌模型组相比,头功铁药散能极显著降低α毒素基因表达（p ＜0.01）．推测头功铁药散可通过提高小鼠免疫功能,并下调α毒素基因表达,从而减少α毒素对小鼠的损伤．     

鹿魏氏梭菌灭活疫苗

鹿魏氏梭菌病又称鹿肠毒血症，是由魏氏梭菌感染引起的一种急性传染病。本病主要是由于饲养管理不当，胃肠正常消化功能失调，魏氏梭菌大量繁殖并产生毒素，导致鹿全身毒血症，其发病急、死亡快、病死率高，对养鹿业危害极大，使用疫苗进行预防接种是控制该病最有效的方法。中国农业科学院特产研究所的科研人员经过几年的研究证实，近些年来，鹿魏氏梭菌病主要由A型魏氏梭菌引起，并采用筛选出的2株A型强毒菌株研制氢氧化铝灭活疫苗，经现场应用，收到良好的效果。     

兔魏氏梭菌病的防治

兔魏氏梭菌病，又称兔魏氏梭菌性肠炎，是由A型魏氏梭菌所引起的肠毒血病，以家兔急性水泻为特征，发病兔致死率高，给养兔业带来严重的损失。     

獭兔A型魏氏梭菌下痢的诊治

A型魏氏梭菌下痢是由A型魏氏梭菌所产外毒素引起的肠毒血症,以急剧腹泻、排黑色水样或带血胶冻粪便,盲肠浆膜出血斑和胃粘膜出血、溃疡为特征。兔场一旦感染此病,其发病率可达90％以上,病死率高达100％,严重危害着养兔业的发展。     

仔猪口服魏氏梭菌C型人工感染试验—病理形态学观察

本文报道了用标准魏氏梭菌C型冻干菌株(菌号C59—3)肉肝汤培养物口服接种哺乳仔猪的人工感染试验及尸体剖检和病理组织学检查结果。试验结果表明:其病理变化特点是小肠呈现出血性或出血坏死性肠炎,以空肠段最为明显。并在肠壁浆膜下见到多个小空泡。认为魏氏梭菌C型引起仔猪肠毒血症的病理形态学与猪痢疾及新生仔猪大肠干菌病是有明显区别的。     

加强预防奶牛魏氏梭菌病

奶牛魏氏梭菌病是由牛A型魏氏梭菌所引起的一种急性传染病。发病率不高，但死亡率高：犊牛、孕牛和高产牛多发该病。近年来，奶牛魏氏梭菌病时有发生，给奶牛生产造成很大危害。     

兔魏氏梭菌病的防治

兔魏氏梭菌病,又称兔魏氏梭菌性肠炎,是由 A 型魏氏梭菌所产外毒引起的肠毒血病,引起家兔急性水泻的一种急性传染病,发病兔致死率很高,给养兔业带来严重的损失。㈠临床诊断2004 年4月上旬,在江西农业工程职业学院的特种经济动物养殖场内,所养的獭兔中发现一种以急性下痢为特征的病症。根据该病流行特点、临床症状、病因调查、实验室检查等诊断为兔 A 型魏氏梭菌病。㈡流行特点病原菌在自然界分布很广,存在于土壤、蔬菜、饲料、污水、动物的乳汁、粪便和健康动物的肠管中。病兔和带菌兔及其排泄物,含有病原菌的土壤和水源是主要的传染来源。…     

兔病毒性出血症与A型魏氏梭菌二联苗的研究

将兔病毒性出血症疫苗与浓缩的A型魏氏梭菌菌苗按1：1混合制成联苗。试验证明，此苗安全有效。联苗2ml／只免疫，兔病毒性出血症第4天可产生免疫力，保护率为100％；A型魏氏梭菌21天产生免疫力，保护率为82．14％。     

家兔A型魏氏梭菌病病因及防治报告

本文通过对河北省A、B两兔场暴发家兔A型魏氏梭菌病病因的调查分析和治疗试验,得出如下结论:(1)该病诱因是饲料营养失调,高能量、高蛋白、低纤维,速成后肠碳水化合物过度负荷所致。长途运输、饲料更换、冷潮刺激等也是该病的诱因。(2)该病死因主要是由于魏氏梭菌外毒素导致神经系统中毒、肠道粘膜严重损伤和极度脱水所致。(3)该病主要症状是急性水样腹泻,体温正常或偏低。病变主要是肓肠出血和胃粘膜溃疡。(4)采取大剂量口服青、链霉素、补液、解毒和收敛等综合措施,可控制病情发展,并使轻症群治愈率76.67%,重症群52.63%,病危群9.38%。     

C型产气荚膜梭菌α毒素基因核苷酸序列的测定与分析

[目的]研究C型产气荚膜梭菌α毒素基因核苷酸序列的遗传变异特点。[方法]设计产气荚膜梭菌α毒素基因特异性引物进行PCR扩增,扩增产物纯化后测定核苷酸序列并与NCBI登录的参考序列通过DNAStar软件进行同源比对。[结果]序列分析表明,所测菌株α毒素基因核苷酸组成中腺苷酸含量较高,胞苷酸含量较低。所测菌株与13、C57-1、CER 89L43、S01、S08、T01以及T16菌株的核苷酸序列同源性分别为98.7%、98.7%、98.6%、98.8%、98.7%、97.0%、98.6%,推导的氨基酸序列同源性分别为98.6%、98.6%、98.9%、98.9%、98.9%、98.6%、98.6%。[结论]所测C型产气荚膜梭菌α毒素基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列与参考序列同源性均较高。     

家畜魏氏梭菌病的免疫预防试验

家畜魏氏梭菌病的免疫预防试验陈洪科侯安祖李玉兰吴志明靳冬（河南省兽医防治站，郑州４５０００３）１９８５年，周口、商丘等地的黄牛零星发生了一种发病快、死亡急、致死率高、剖检病理变化以实质器官出血为特征的“猝死症”，尤以犊牛多发此病，其他家畜没有发病死亡...     

魏氏梭菌贵州分离株α-毒素基因的克隆与表达

提取已鉴定的A型魏氏梭菌Clostridium welchii贵州分离株的染色体DNA，经酶切回收分子长2～4kb的DNA片段混合物，将其插入质粒载体pUCl9中，并转化至E．coli JMl09，通过Amp抗药性和显色反应的选择，再提取阳性重组细菌质粒进行探针检测、酶切分析和PCR鉴定，筛选出含魏氏梭菌α-毒素基因的重组大肠杆菌；经溶血与溶血抑制试验及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳证实，重组E．coli的表达产物符合α-毒素的生物学特性。     

A型产气荚膜梭菌α毒素的基因扩增和提纯鉴定

为了对A型产气荚膜梭菌α毒素快速准确地做出检测,本实验利用厌氧肉肝汤培养A型产气荚膜梭菌,经革兰染色观察以及含铁牛奶培养基观察其生化特性.然后使用饱和度为60％的硫酸铵粗提其α毒素蛋白,进行透析纯化并应用SDS - PAGE方法鉴定A型产气荚膜梭菌的α毒素,鉴定之后将纯化的α毒素给小鼠腹腔注射来检测其活性.结果表明,厌氧肉肝汤培养基变浑浊且产生大量气体,含铁牛奶培养基发生爆烈发酵现象,SDS - PAGE检测结果,α毒素分子量为43.6kDa,小白鼠出现梭菌病的典型临床症状.本实验为α毒素的鉴定及大量快速提取提供了一种参考方法,为进一步开展梭菌毒素的致病机理及制备类毒素疫苗奠定重要的实验基础.     

新生仔猪红黄痢二联灭活疫苗的研制与应用Ⅰ——C型魏氏梭菌生物学特性研究

[目的]研究C型魏氏梭菌C59-2菌株的生物学特性。[方法]将该菌株接种于适宜培养基,进行毒素致死性试验和免疫原性试验。[结果]C型魏氏梭菌C59-2菌株在厌气肉肝汤和血液琼脂平板上生长良好,生化特性与魏氏梭菌一致;该菌在厌气肉肝汤中培养物的上清液0.0001ml静脉注射可致小鼠100%死亡,0.2ml静脉注射可使家兔全部死亡;免疫原性试验表明,该菌株制备成疫苗后免疫家兔,攻毒保护率可达75%。[结论]C型魏氏梭菌C59-2毒株适合于疫苗生产。