蚕豆萎蔫病毒两个分离物的比较研究

作对蚕豆萎蔫病毒的两个分离物Ｂ９３５和Ｐ１５８的部分特征作了比较研究，从病毒粒子形态、血清学关系，病毒衣壳蛋白组分和分子量以及病毒且分和分子量这些特征看，Ｂ９３５和Ｐ１５８葳相似，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ结果表明，Ｂ９３５和Ｐ１５８基因组具有同源性，但其同源性不高，这意味着蚕豆萎蔫病毒种内基因组上可能存在着较大的差异。     

侵染豌豆和蚕豆的蚕豆萎蔫病毒研究

从浙江省豌豆和蚕豆病株上获得两个病毒分离物，编号为Ｐ－９３５和Ｂ－９３４．人工摩擦接种６科１９种植物，Ｐ－９３５能侵染４科１３种植物，Ｂ－９３４能侵染４科１４种植物，除菜豆外，它们在这些植物上的症状十分相似。Ｐ－９３５和Ｂ－９３４的钝化温度为５０－５５℃，稀释限点为１０￣（－３）－１０￣（－４），体外保毒期分别为５天和４天。两个分离物均能由桃蚜以非持久性方式传毒，用昆诺藜作繁殖寄主均提取到了大量病毒粒子，提纯病毒粒子球形，平均直径２５ｎｍ。病毒外壳蛋白均由两种亚基组成，分子量分别为４２．５ｋＤ和２１．２ｋＤ，感病叶片组织中观察到了无定形的泡状内含体，在琼脂双扩散试验中，Ｐ－９３５和Ｂ－９３４均能与蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）抗血清（血清型Ⅱ）形成清晰沉淀线。根据以上特性，Ｐ－９３５和Ｂ－９３４均被鉴定为蚕豆萎蔫病毒，且都属血清型Ⅱ．初步调查表明杭州郊区豌豆病毒病均由ＢＢＷＶ引起，蚕豆病毒病主要有ＢＢＷＶ和黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）。     

侵染豌豆和蚕豆的蚕豆萎蔫病毒研究

从浙江省豌豆和蚕豆病株上获得两个病毒分离物，编号为Ｐ－９３５和Ｂ－９３４，人工摩擦接种６科１９种植物，Ｐ－９３５能侵染４科１３种植物，Ｂ－９３４能侵染４科１４种植物，除菜豆外，它们在这些植物上的症状十分相似，Ｐ－９３５和Ｂ－９３４的钝化温度为５０－５５℃，稀释限点为１０＾－３－１０＾－４，体外保毒期分别为５天和４天，两个分离物均能由桃蚜以非持久性方式传毒，用昆诺藜作繁殖寄主均提取到了大量病毒粒子，     

蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制

用蚕豆萎蔫病毒提纯病毒粒子免疫ＢＡＬ Ｂ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,用纯化的ＢＢＷＶ病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有稀释法克隆,成功获得了２株ＢＢＷＶ特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为４Ｄ１１,３Ｇ１２．２株单抗腹水间接ＥＬＩＳＡ效价高达１：６４００００,抗体类型均为ＩｇＧ１,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析表明,２株单抗均是针对ＢＢＷＶ ４４．７ｋＤ的外壳蛋白     

江苏蚕豆三叶草黄脉病毒的分子鉴定及全基因组结构特征分析

三叶草黄脉病毒(Clover yellow vein virus, ClYVV)是马铃薯Y病毒属的重要成员,侵染多种豆科作物并造成严重危害。为明确从江苏省盐城市采集的蚕豆样品中检测出的ClYVV全基因组序列以及基因组结构特征,通过分段扩增的策略对ClYVV全基因组序列进行克隆,序列测定后拼接获得江苏蚕豆三叶草黄脉病毒(ClYVV-JS)全基因组序列。基因组序列分析结果显示该分离物基因组序列全长9 585 bp,编码11个蛋白质。NCBI序列比对结果表明该分离物与已报道的日本ClYVV No.30分离物(AB011819)核苷酸序列同源性最高,达96.37%,其中编码的氨基酸序列同源性高达99.06%,而与中国合肥ClYVV分离物(KU922565)核苷酸序列同源性相对较低(94.74%)。聚类分析结果也显示ClYVV-JS归入三叶草黄脉病毒分支,与马铃薯Y病毒属其他成员分别归入不同分支。     

新疆辣椒上蚕豆萎蔫病毒的鉴定

从新疆五家渠辣椒上采到的一株病毒,病株症状为矮化、落叶、茎部有坏死条斑。在3科18种寄主植物上接种结果,它可系统侵染苋色藜、蚕豆、心叶烟等10种植物,局部侵染绿豆、豇豆、蔓陀罗、首蓿等5种植物,不侵染三叶草、鹰嘴豆、普通烟。其致死温度为65—70℃,体外存活期为4—5天,稀释限点为5000倍。它可由桃蚜传播,其粒体为球形,其核酸有两个组分,外壳蛋白有两个亚基,分子量分别为43500及26000Dalton,与蚕豆萎蔫病毒抗血清呈阳性反应。     

蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制

用蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）提纯病毒粒子免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,用纯化的ＢＢＷＶ病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有限稀释法克隆,成功获得２株ＢＢ－ＷＶ特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为４Ｄ１１,３Ｇ１２．２株单抗腹水间接ＥＬＩＳＡ效价高达１∶６４００００,抗体类型均为ＩｇＧ１,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ分析表明,２株单抗均是针对ＢＢＷＶ４４．７ｋＤ的外壳蛋白大亚基的特异性抗体．单抗抗原结合位点分析表明４Ｄ１１和３Ｇ１２两单抗作用于同一抗原决定簇     

马传染性贫血病病毒L株前病毒全基因组核苷酸序列分析

 本实验所用的马传染性贫血病毒（ＥＩＡＶ）Ｌ株（ＥＩＡＶ－Ｌ）是我国研制成功的ＥＩＡＶ弱毒疫苗的原始强毒株。以ＥＩＡＶ－Ｌ感染马外周血液白细胞中ＤＮＡ为模板，利用ＰＣＲ技术，分４个片段扩增ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒ＤＮＡ，并分别克隆到载体质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ中，得到 ４个重组质粒ｐ２．８、ｐ２．４、ｐ３．１和 ｐ１．２，经酶切鉴定后测序。对测序结果分析、拼接，得到 ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒基因组全序列。ＥＩＡＶ－Ｌ前病毒基因组全长 ８２３５ｂｐ，其中 Ｇ＋Ｃ含量为 ３８％。通过使用计算机软件ＤＮＡＳＩＳ分析，ＥＩＡＶ－Ｌ与马传贫驴强毒和马传贫驴白细胞疫苗毒序列同源性分别为９８．４％和９６．９％。同源性如此接近反映了它们之间的亲缘关系，另外 ＥＩＡＶ－Ｌ与驴强毒的同源性高于其与驴白细胞弱毒疫苗株的同源性，这符合驴白细胞弱毒疫苗株的衍生过程。基因组两端是长为３１６ｂｐ的ＬＴＲ，其中Ｕ３为１９７ｂｐ，Ｒ为８０ＢＰ，Ｕ５为３９ｂｐ。前病毒基因组有 ３个较大的开放阅读框架（ＯＲＦ），分别编码 ｇａｇ、ｐｏｌ和 ｅｎｖ基因。ｇａｇ基因位于 ７１３～１９１２位碱基之间，全长１２００ｂｐ；ｐｏｌ基因位于 １７０８～５１０９位碱基之间，全长     

单克隆抗体夹心ELISA检测蚕豆萎蔫病毒研究

利用 ２ 株特异性单抗,建立了检测蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）的灵敏度高、特异性好的单抗夹心ＥＬＩＳＡ 方法⒚经测定,ＭｃＡｂ 最适包被浓度为０４ μｇ／ｍ Ｌ,ＨＲＰＭｃＡｂ 最佳工作浓度为１∶２ ０００,该方法最小检出浓度为０１６ μｇ／ｍ Ｌ,与几种常见的病毒无交叉反应⒚对杭州地区的 １４０ 多个样本进行了检测,发现蚕豆、豌豆中ＢＢＷ Ｖ 的阳性率达 ８０％ ⒚     

大麦黄花叶病毒外壳蛋白及基因组RNA的性状研究

分析了大麦黄花叶病毒的外壳蛋白及基因组ＲＮＡ的性状。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳表明，该病毒的外壳蛋白由单种亚基组成，其分子量为３４．９ＫＤａ，在常规提纯过程中，该病毒的外壳蛋白较不稳定，部分易降解为２８．０ＫＤａ和２６．６ＫＤａ的组分；不同毒源病毒的外壳蛋白分子量无明显差异，但其稳定性差异较大，１．２％变性琼脂糖凝胶电泳的测定结果表明，大麦黄花叶病毒的基因组ＲＮＡ由二组分组成，其大小分别为７．７８     

水稻细菌性条斑病菌DNA多态性与致病性研究

利用６０个随机引物对来自我国不同稻区的水稻细菌性条斑病菌株基因组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增,其中２０个引物均出现清晰和重复性的ＤＮＡ扩增片段,扩增片段大小在０．５ｋｂ至３．５ｋｂ;应用Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ软件ＵＰＧＭＡ程序进行树状聚类分析,聚类结果表明,我国水稻细菌性条斑病菌具有明显的遗传分化,在遗传距离为０．３０时,供试菌株可划分为７个遗传相似组（谱系）。其中第１、第２和第５组为优势组群,分别由７、８、６个菌株组成。根据菌株在１２个已知基因品种上的抗感反应,将供试菌株分为１３个致病型,在遗传距离为０．５０水平上聚类归属于６个簇。菌株的致病类群与其ＤＮＡ的遗传变异具有弱相关性。     

小西葫芦黄花叶病毒辽宁分离物的鉴定与序列分析

从辽宁省沈阳市和盖州市分别采集表现花叶的南瓜样品,经透射电镜负染色实验,观察到典型的马铃薯Y病毒属(Potyvirus)线状病毒粒子.利用Potyvirus通用引物Legpoty F/LegpotyR分别对3个沈阳样品和3个盖州样品进行RT-PCR扩增,得到预期片段,克隆并测序.Blast显示6个病毒样本与小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)同源性最高,均大于99%.利用已经报道的特异引物ZYMV-F/ZYMV-R,从6个样本中扩增到约1.2 kb的ZYMV片段,片段包含完整的外壳蛋白(CP)基因.基于CP的核苷酸序列同源性分析,发现2个ZYMV辽宁分离物与山西分离物ZYMV-[CN:SX:Chrysanthemum:14](KP742962)同源性最高,达99.1%和99.4%.系统进化树分析表明,2个ZYMV辽宁分离物与山西分离物ZYMV-[CN:SX:Chrysanthemum:14]聚集在一个分支,推测ZYMV辽宁分离物与山西分离物亲缘关系最近.     

枣疯病植原体新疆分离物16S rDNA基因克隆与序列分析

利用植原体16SrDNA基因保守序列通用引物对新疆阿克苏地区和喀什地区的疑似枣疯病植株总DNA进行常规PCR和巢式PCR检测,分别扩增出1.5kb和1.2kb的特异性片段。对片段进行克隆、序列测定分析及系统发育树构建,结果表明,新疆枣疯病阿克苏分离物和喀什分离物的16SrDNA基因序列同源性极高,达到100%,与16SrⅤ组植原体的同源性达到98.4%以上,并且与16SrⅤ-B亚组中的枣疯病山东莱芜株系、山东龙口株系同源性最高,达到99.5%,因此归属于榆树黄化组16SrⅤ-B亚组。首次报道新疆枣疯病植原体16SrDNA的序列,确定新疆枣疯病植原体的分类地位,为枣疯病的早期诊断和检测提供依据。     

紫云英根瘤菌7653R基因文库的5个互补结瘤菌株的重组质粒分析

对紫云英根瘤菌７６５３Ｒ基因文库的５个重组质粒，即ｐＮＲ１０２，ｐＮＲ１０３，ｐＮＲ１０８、ｐＮＲ２０３，ｐＮＲ２１３进行各种内切酶的酶切分析。结果证实它们均含有１．７ｋｂ的ＥｃｏＲⅠ－ＢｇｌⅡ双酶切片段和１．９ｋｂ的ＥｃｏＲⅠ－ＳａｃⅠ双酶切片段，而ｐＮＲ２１３的外源片段最大，包含有其余质粒所具有的各种片段。以ｐＮＲ１０８的外源片段作探针，进行ＤＩＧ杂交，发现探针与其余４个重组质粒的外源片段有强     

POR6与MGR586同源性及其所揭示的稻瘟病菌DNA指纹特征之比较(英文)

Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析明确了稻瘟病菌重复序列ＰＯＲ６与ＭＧＲ５８６没有同源性．进一步以ＰＯＲ６与ＭＧＲ５８６为探针,比较分析了稻瘟病菌基因组ＤＮＡ指纹,表明两者所揭示的ＤＮＡ指纹特征不同,但依据其指纹相似性所进行的谱系分析结果却有相同的趋势,而且ＰＯＲ６－ＥｃｏＲＩ组合在５．１～１４．９ｋｂ之间比ＭＧＲ５８６－ＥｃｏＲＩ揭示的ＤＮＡ指纹更丰富,说明除了ＭＧＲ５８６外,ＰＯＲ６也是稻瘟病菌群体遗传结构研究的理想标记．     

不同类型水稻鉴别品种对四川稻瘟病菌生理小种的鉴定与评价研究

用中国鉴别品种、日本清泽粳型单基因系鉴别品种、国际水稻所CO39籼型近等基因系鉴别品种对105个四川稻瘟病菌株进行鉴定,结果表明:①中国鉴别品种将105个菌株划分为7群18个小种;②CO39NILs鉴别品种将105个菌株分成19个小种,鉴别作用优于中国统一的7个鉴别品种;③日本清泽单基因系鉴别品种将105个菌株被划分成103个小种,鉴别作用明显;④用CO39NILs和日本清泽单基因系混合鉴别品种进行鉴定,105个菌株被划分成104个小种,鉴别作用明显;④聚类分析表明,中国鉴别品种划分的小种致病型与其它2套鉴别品种划分的种群比较,不存在一一对应的关系。     

桂糖00/122和粤糖91/976等几个新亲本及其组合的应用研究

[目的]为改善甘蔗品种的产量和品质提供理论依据。[方法]以桂糖92/66×ROC22（X1）、ROC22×桂糖92/66（X2）、桂糖00/122×K86/110（X3）、粤糖91/976×CP94/1100（X4）、粤糖91/976×桂糖00/122（X5）、粤糖91/976×HOCP95/988（X6）、川糖89/103×CP93/163（X7）、粤83/257×CP57/614＋崖84/153（X8）8个组合为材料,研究其F1代主要农艺性状的表现。[结果]X7的F1代高糖高产,为较优良的组合;X5的F1代产量性状较好,但糖分含量较低,这2个组合亲本优良性状的遗传效应较大,综合性状较好,可根据育种目标重点配置使用;X1、X2、X3、X4组合亲本优良性状的遗传效应较小,综合性状一般,可适当配置;X6、X8组合亲本优良性状的遗传效应较小,综合性状较差,不宜使用。[结论]该研究明确了几个甘蔗亲本在新品种选育中的应用价值。     

吉林省部分水稻品种稻瘟病菌Pot2指纹分析

采用Pot2-rep-PCR指纹图谱法分析了吉林省部分水稻品种稻瘟病组织,发现所有病组织都能扩增出条带,扩增的片段长度为0．5～3．0kb,扩增的DNA片段数为1～6,而且各病组织在约600bp处共有1条带。经聚类分析,在80％遗传相似水平下,可将供试的15个样品分为7个谱系。不同地域同一水稻品种上的稻瘟病菌生理小种指纹不同。     

草莓抗炭疽病的新种质资源筛选

草莓炭疽病是草莓生长的主要病害之一。其病原在上海有2种,分别为胶孢炭疽病菌（ColletotrichumgZ0eosporioidPs）和尖孢炭疽病（C．acutatum）。本文通过叶柄接种法测定了50个不同的草莓种质材料分别对2种病原菌的抗性。结果表明,在测试的不同草莓种质资源中,对2种不同的炭疽病菌均存在明显的抗性差异,103、117对C．acutatum有较强的抗性,104对C．gzoeospor如i如5有较强的抗性,而76对C．acutaturn和C．gloeosporioides均表现出较强的感病性。草莓组合／品种对2种炭疽病菌的抗性水平又可分成2种不同类型：第1种类型是对2种不同的炭疽病菌的抗性表现一致,如103、99、组合89×103P14、117等对2种病原菌的抗性都很高,76对2种病原菌抗性都很低;第2种类型是对2种炭疽病菌抗性表现不一致,104对C．acutatuln抗性较低而对C．gloeoesporioides 抗性较高,组合1x103P39对Cacutalum抗性较高而对（C．gloeosporioides抗性较低。     

RAPD Patterns Characteristic for VCGs of Cotton Verticillium Wilt Pathogen, Verticillium dahliae

Nine primers were employed to detect molecular polymorphisms in 103 Verticillium dahliae isolates that represent diverse groups of Vegetative Compatibility (VC). Our results showed that these isolates confer two distinctive RAPD groups (RPGs). RPG1, consists of isolates belonging to vegetative compatibility group Ⅰ (VCG Ⅰ), while RPG2 encompasses VCGⅡ and VCGⅣ. The genetic diversity associated with VCGⅢ was greater than that associated with VCG1. Five RAPD fragments, with frequencies more than 0.96 in VCG Ⅰ but less than 0.1 in VCGⅢ, produced characteristic fragments for VCG Ⅰ (defoliating type), suggesting strong correlation between RPGs and VCGs.