猪β2-肾上腺素能受体基因的克隆与鉴定

β2－肾上腺素能受体（β2－adrenergic receptor,β2-AR)是β－AR的一种亚型。本研究根据猪的β2－AR cDNA序列设计了1对引物，以肝脏基因组DNA为模板，经PCR获取了一约1．3kb目的基因片段。将该片段克隆入pMD18-T载体，构建猪β2－AR基因重组质粒pMDAR。经PCR反应、酶切鉴定和序列分析证实β2－AR基因已成功克隆。为进一步研究β2－AR的功能、调控β2－AR和研制β2－AR型基因工程疫苗奠定了基础。     

动物脂肪代谢与控制

脂肪代谢受多种因素影响，体内的某些代谢途径介入脂肪组织合成与分解的调控。众多研究表明，高密度脂蛋白－胆固醇在高密度脂蛋白－受体的介导下使细胞内源性胆固醇合成下降，具有清除细胞内脂肪的作用；同时在β－肾上腺素能受体和Ca^2 的参与下，加快脂肪进入β－氧化和三羧酸循环的速度，最终使脂肪分解代谢增强；上述整修过程都有神经和内分泌系统的参与，如肾上腺素能受体、生长激素、胰岛素。     

睾丸肾上腺素能受体和胆碱能受体的分布及神经递质对睾丸间质细胞增殖的影响

试验旨在研究不同发育时期小鼠睾丸肾上腺素能受体(β1AR、β2AR、β3AR、α1A、α1B和α1D)和胆碱能受体(M1、M2、M3、M4和M5)mRNA的表达,以及神经递质去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)和乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)对发育期小鼠睾丸间质细胞增殖的影响。RT-PCR结果表明,β1AR和β2AR mRNA在睾丸发育的3个时期都表达,β3AR、α1A和α1B mRNA在小鼠发育早期的睾丸表达,在成年期睾丸不表达,α1D mRNA在睾丸发育的早期不表达,成年期表达;胆碱能受体M1R、M2R、M3R和M5R mRNA在睾丸发育的3个时期都表达,而M4R mRNA主要在成年期表达。另外通过NE和Ach处理体外培养的发育期睾丸间质细胞,发现Ach处理组BrdU阳性细胞的数量明显增加(P＜0.01)。结果表明,肾上腺素能受体和胆碱能受体在小鼠睾丸的整个发育时期都表达,Ach可促进发育期小鼠睾丸间质细胞的增殖。     

β2肾上腺素能受体的研究进展及其在兴奋剂残留检测中的应用

β肾上腺素能受体属于G蛋白偶联受体的1种,能够与一系列内源或外源性肾上腺素能物质相互作用,激活受体并引起信号转导从而引发机体的生理化学反应。目前已经研究了β2肾上腺素能受体的结构活性、蛋白表达和检测应用,但是仍然因为7次跨膜结构的蛋白表达量低等特点,造成该受体的发展进程缓慢。本文重点叙述了β2肾上腺素能受体的结构以及活性氨基酸残基,分析目前该受体蛋白在真核和原核细胞表达的现状以及在β兴奋剂药物的残留检测中的应用,总结在β2肾上腺素能受体研究方面存在的问题和发展趋势。     

阿替美唑药理特性及其在动物麻醉中的应用

阿替关唑是一种α2-肾上腺素能受体颉颃剂,可快速逆转α2-肾上腺素能受体激动剂引起的镇静和麻醉,普遍地被国外兽医应用于α2-肾上腺素能受体激动剂诱导动物镇静和麻醉后的苏醒,或与多种麻醉剂联合应用。本文从阿替美唑的药理特性及在动物麻醉方面的应用进行阐述,旨在为该药物在国内兽医临床的合理应用提供参考。     

动物脂肪代谢与控制

脂肪代谢受多种因素影响,体内的某些代谢途径介入脂肪组织合成与分解的调控.众多研究表明,高密度脂蛋白-胆固醇在高密度脂蛋白-受体的介导下使细胞内源性胆固醇合成下降,具有清除细胞内脂肪的作用;同时在β-肾上腺素能受体和Ca2+的参与下,加快脂肪进入β-氧化和三羧酸循环的速度,最终使脂肪分解代谢增强;上述整个过程都有神经和内分泌系统的参与,如肾上腺素能受体、生长激素、胰岛素.     

猪瘟病毒E2基因抗原结构域A、B、C、D区在大肠杆菌中的表达

采用PCR技术扩增出猪瘟病毒E2基因抗原结构域A、B、C、D区并克隆于PGEM-T easy载体上，测序结果表明插入的为猪瘟病毒E2基因抗原结构域，切出目的基因，将目的基因克隆到表达质粒pProEX—HTb中，获得重组质粒经PCR、酶切和序列分析鉴定E2基因抗原结构域插入的位置、大小和读码框均正确，SDS—PAGE检测表明受体菌经IPTG诱导后能表达E2基因抗原结构域蛋白，Westernblot检测表明受体菌诱导表达E2基因抗原结构域蛋白可与猪瘟阳性血清发生特异性反应。     

β——兴奋剂在动物饲养中的负效应

β—兴奋剂全称β—肾上腺素能兴奋剂(BAA),又称β—激活剂,是一种化学结构和生理功能类似肾上腺素和去甲肾上腺素的苯乙醇类衍生物,它能与动物体内大多数组织胞膜上的β—肾上腺素受体相结合,激活β—肾上腺激导性受体,导致整个细胞改变代谢过程。根据与不同β—受体结合特并性的差异,β—兴奋剂可分为β_1型和β_2型两大类。早期β—兴奋剂在医学上属交感神经作用药,能兴奋支气管平滑肌的β—受体,使得平滑肌松弛,支气管扩张,可用来治疗支气管     

鸡MHCⅠα和β2m的原核表达与多克隆抗体的制备

为制备MHCⅠ基因工程疫苗的基础材料,构建了鸡MHCⅠ分子重组质粒并进行原核表达,进而制备鸡MHCⅠ分子的多克隆抗体。应用PCR方法,克隆鸡MHCⅠα和β2m基因,构建重组载体pETMHCⅠα和pET-MHCⅠβ2m,经PCR、双酶切和测序鉴定后,将重组质粒在大肠埃希菌Rosetta中进行诱导表达,融合蛋白纯化后,接种昆明小鼠制备多克隆抗体,血清稀释后用免疫印迹法(Western blot)分析。结果表明,鸡MHCⅠα和β2m基因在大肠埃希菌中成功表达,融合蛋白分子质量分别约为52.1ku和33.0ku;制备的鼠抗鸡MHCⅠα和β2m链多克隆抗体,经Western blot检测证实抗体特异性较强,可进一步用于鸡MHCⅠ分子的研究。     

猪β_2-肾上腺素能受体初级克隆质粒的改造与鉴定

猪 β2 肾上腺素能受体 (beta2 adrenergicreceptor,β2 AR)基因初级克隆质粒 (pMDAR)在 β2 AR基因 5′端外侧含有 2个EcoRⅠ酶切位点。用EcoRⅠ酶切消化和T4DNA连接酶连接后 ,获得了具有EcoRⅠ单一酶切位点的改造质粒。对经过修饰后的质粒进行了多酶切和 β2 AR基因片段回切等方法鉴定。     

产气荚膜梭菌α—β融合基因的构建

用PCR从含产气荚膜松菌β毒素基因的质粒pXETB2中扩增出β毒素基因，NcoⅠ和BamHⅠ双酶切该β毒素基因，回收0.93kb的β毒素基因片段，再用NcoⅠ和BamHⅠ双酶切含产气荚膜梭菌α毒素基因质粒pXETA1,与上述回收的β毒素基因片段连接，转化至受体菌BL21（DE3）中，经NcoⅠ，NotⅠ酶切反应鉴定和苷酸序列分析证实，获得的重组质粒pXCPAB1含有α－β融合基因，重组菌株BL21（CD3）（pXCPAB1)表达产物经ELISA检测和SDS－PAGE分析，表明重组菌株可以表达α－β融合蛋白。     

生长激素释放因子肝脏定向表达复合物在家兔体内的表达

外源基因在体内的转染及表达存在转染效率低、表达时间短等缺点，利用受体介导基因转移技术，可以将基因定向转入到特定组织，并且能提高转染效率和表达时间。在本试验中，利用肝脏去唾液酸糖蛋白受体(ASGR)将生长激素释放因子(GRF)基因定向转入到家兔肝脏组织并得到了表达。首先通过DNA阻滞试验确定质粒DNA与多聚赖氨酸(poly—L—lysine，PLL)的结合比例及反应液的最佳NaCl浓度，然后将PLL与α—D-吡喃半乳糖苯基异硫氰酸盐(α—D—galactopyranosylphenyl isotlhiocyanate)(物质的量之比为8：1)在pH9．0的Na2CO3溶液中进行糖基化反应，得到糖基化的PLL(galPLL)后透析除去未反应的糖并测定反应物糖含量。将糖基化的PLL与克隆有GRF基因的pcDNA3-GRF质粒(质量比为3．16：1)在1．031mol／L的NaCl溶液中进行连接，最终得到DNA—galPLL复合物，电镜观察其结构。耳缘静脉注射质粒复合物到家兔体内(1．5mg／只)，用RT—PCR和ELISA检测不同组织的表达情况。结果注射后7d家兔的肝脏RT—PCR结果呈阳性，27d仍能检测到GRF蛋白，但同时在其他的组织也检测到表达。并且进行了增重试验，发现定向转移GRF基因到家兔的肝脏对家兔的生长有一定的促进作用。     

从A型产气荚膜梭菌C57-1中发现β2毒素基因

为了进一步研究A型产气荚膜梭菌C57-1株的遗传学背景,应用聚合酶链式反应(PCR)技术,从该菌株中扩增出大小为726 bp的β2毒素基因(cpb2基因)的部分序列,并将其克隆入pMD18-T载体中.转化至受体菌DH5α后,经Amp/IPTG/X-Gal选择培养,提取质粒,筛选阳性重组克隆.核苷酸序列分析证实,该基因片段与文献报道的β2毒素基因序列一致.     

大鼠输尿管中α_1肾上腺素能受体亚型的分布特征

采用放射配基结合法,利用GraphPad PRISM5.01软件计算出受体及其亚型的密度,从而比较α1肾上腺素能受体(α1-AR)亚型在大鼠输尿管各段中的分布情况。α1-AR在大鼠输尿管各段的结合位点是非均匀分布的,下段输尿管的Bmax为(14911±1253)pmol/g,明显高于上段(9077±211)pmol/g及中段(9164±158)pmol/g,上段与中段的分布差别不显著。粗制膜标本经过CEC预温育后,α1-AR与[125I]-HEAT的最大结合容量Bmax比对照组下降约64%。在有α1-AR亚型高特异性拮抗剂(5-MU,Cyclazosin,BMY7378)存在时α1-AR与[125I]-HEAT的最大结合容量Bmax均有不同程度的下降。放射性配基结合试验结果显示,α1-AR在输尿管下段的密度要高于上段及中段,但Kd值及Hill系数并没有区别。通过单点竞争抑制反应表明,大鼠输尿管中存在3种α1-AR亚型,即α1A-AR、α1B-AR和α1D-AR亚型,但是α1D-AR亚型与α1A-AR亚型的分布要明显多于α1B-AR亚型,而α1D-AR亚型分布略高于α1A-AR亚型。     

绵羊生殖道中ghrelin基因的克隆及其表达

从雌性绵羊输卵管、子宫体、子宫颈、阴道组织中提取总RNA，根据已获得的绵羊ghrelin基因cDNA序列设计特异性引物，采用RT—PCR方法扩增出了绵羊ghrelin基因；将扩增产物克隆于pMD19-T载体后进行测序。以β-肌动蛋白（β-actin）基因作为内参，采用半定量RT—PCR法扩增ghrelin基因，经琼脂糖凝胶电泳后，应用凝胶成像分析系统计算雌性绵羊不同生殖道组织中ghrelin基因的表达量。结果显示，从雌性绵羊生殖道各组织均扩增出了233bp的ghrelin基因片段；ghrelin基因在子宫体的表达量最高，输卵管内次之，子宫颈和阴道内最低。表明，ghrelin对雌性绵羊生殖系统的调节及生殖激素的分泌等具有重要作用。     

肾上腺素能α2受体对二花脸猪生长激素分泌的作用

给 6头去势二花脸公猪一次注射肾上腺素能α2 受体激动剂可乐宁 ( Clonidine,6μg/ kg)后 ,GH总体水平、基础水平、峰强度明显升高 ,分别增加 10 4 .10 % ( P<0 .0 1)、113.4 0 % ( P<0 .0 1)和 5 4 .5 0 % ( P<0 .0 1) ,并保持脉冲式分泌 ,但峰值出现在注射后 6 0 min左右 ,明显提前。饲喂半胱胺 ( CS)后第 4天静脉注射 Clonidine,则 GH分泌比对照组显著提高 ,但与单独注射 Clonidine和单独口服 CS相比较未见有显著差异 ( P>0 .0 5 )。结果表明 ,α2 受体激动剂 Cloni-dine可促进 GH分泌 ,且峰值出现时间明显提前     

沙丁胺醇单克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立

沙丁胺醇（Salbutamol，Sal）又名舒喘宁，化学名为4-羟基-5-羟甲基-α（叔丁胺）甲基苯乙醇胺，是人工合成的具有β2-受体激动剂样作用的肾上腺素能药物。此类药物常用于临床治疗如哮喘等呼吸系统疾病。试验证实沙丁胺醇对动物具有促进骨骼肌生长，减少脂肪蓄积等作用。因而国内外不少养殖场都非法使用本类药物。     

β—兴奋剂的应用探讨

β－兴奋剂全称β－肾上腺素能兴奋剂,或肝肾上腺素能受体激动剂,英文名卜Athene（常熟饲料添加剂厂215500）哈cgrist。它是一类能与动物体内大多数肝肾上腺素能受体结合,激发肝肾上腺素能受体兴奋的药物,其基本结构为苯乙醇胺及其衍生物。目前常用的p一兴奋剂有：沙丁胺醇     

肾上腺素能受体及其调控的研究进展

肾上腺素能受体及其调控的研究进展陈刚周光宏刘清（南京农业大学动物科技学院２１００９５）肾上腺髓质能够分泌具有生物学活性的儿茶酚胺类物质，包括肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺等，作为激素或神经传导递质，参与体内多数器官功能的调节。这些物质具有相似的结构...     

产气荚膜梭菌α—β融合基因的高效表达

用PCR从含产气荚膜俊菌α毒素基因的质粒pXETA1中扩增出α毒素基因，用NcoⅠ和BamHI双酶切该α毒素基因，回收0．95kb的α毒素基因片段，再用NcoⅠ和BamHI双酶切含产气荚膜梭菌β毒素基因质粒pXCPAB2，与 回收的α毒素基因片段连接，转化至受菌BL21（DE3）中。经NcoI,BamHI,NcoI酶反应鉴定和核苷酸序列分析证实，获得了理想重组质粒pXCPAB2，该重组质粒含有α-β融合基因。重组菌株BL21（DE）3（pXCPAB2)经IPTG诱导后，其表达产物经ELISA检测和SDSPAGE分析，结果表明重组菌株可以高效表达α-β融合基因，该融合蛋白占菌体总蛋白的22．14％。