银鲫与普通鲫群体遗传结构的比较分析

利用15个微卫星多态性分子标记,对黑龙江省方正县双龙水库和双凤水库两个水体的雌核发育银鲫(Car-assius auratus gibelio)和二倍体普通鲫(Carassius auratus(L))的群体遗传多样性进行比较分析。结果显示:平均每个多态性位点获得银鲫10.39个有效等位基因,普通鲫11.82个有效等位基因;双龙水库三倍体银鲫和二倍体普通鲫的平均观测杂合度分别为0.6035和0.6300,双凤水库中的三倍体银鲫和二倍体普通鲫的平均观测杂合度为0.5311和0.5885;相似性与遗传距离分析结果显示:相似性最大的是双凤水体内的银鲫和普通鲫(0.8127),远大于两个水体间的银鲫群体间的相似性。结果表明,银鲫与普通鲫存在着明显的遗传物质交流,较高的遗传相似性不仅与传统的银鲫起源于普通鲫的观点一致,也暗示银鲫与普通鲫存在经常性地遗传物质交流。     

磁珠富集法筛选西施舌微卫星序列

采用生物素-磁珠吸附微卫星富集法（FIASCO）筛选西施舌（Coelomactra antiquata）微卫星分子标记。结果获得含有重复次数不少于5次的微卫星序列38个,其中完美型占68.4%,非完美型26.3%,混合型5.3%。除探针中使用的CA和GA 2种重复外,还得到ATTG、CGTG和TGTTG的重复序列。微卫星重复次数主要集中在5～46次,最高为70次。利用这些微卫星序列设计了14对引物。该研究筛选出的微卫星标记为进一步研究西施舌的遗传多样性提供帮助。     

银鲫多核苷酸重复微卫星的序列同源性分析

应用磁珠富集法开发银鲫的三、四核苷酸重复的微卫星。生物素探针分别为Probe-(TGA)8,Probe-(AGAC)8,Probe-(GATT)8,结果得到4740个菌落。结合同位素放射法进行二次筛选,获得652个阳性克隆(阳性克隆率13.76%),利用PRIMER3PLUS在线软件设计引物163对,采用in silico方法,对微卫星序列进行BLASTN和BLASTX在线搜索。运用BLASTN搜索,首先将设计引物后的微卫星序列(侧翼序列长度大于50bp)与GEN-BANK中的斑马鱼的EST数据库进行比对,共匹配上44个同源序列。然后利用BLASTX搜索非冗余蛋白数据库,有31个微卫星位点成功的进行了功能注释,5个微卫星位点匹配上假设蛋白。本文利用模式生物斑马鱼的基因组资源对银鲫的的基因组进行比较研究,为以后银鲫种质资源的开发打下了良好的基础。     

磁珠富集法筛选虾夷扇贝微卫星序列

采用生物素-磁珠吸附微卫星富集法，筛选虾夷扇贝（Patinopecten yessoensis）微卫星分子标记，并用同位素法进行二次筛选。结果在筛选的192个菌落中获得136个阳性克隆，经测序分析，获得微卫星序列179个，其中完美型占50.8％，非完美型43.0％，混合型占6.1％。除探针中使用的CA重复外，还得到TC、AG、ACA、CTAT的重复序列。用引物设计软件Primer Premier5.0设计引物85对，挑选其中的40对合成并进行筛选。     

额尔齐斯河银鲫对饲料蛋白质需要量的研究

为了解额尔齐斯河银鲫(Carassius auratus gibelio Bloch)对饲料蛋白质的适宜需要量,本试验配制了6种不同蛋白质水平(27％、31％、35％、39％、43％、47％)的实用配合饲料,饲养初始体质量(52.95±3.22)g额河银鲫8周,分析了饲料蛋白质水平对其生长性能、饲料利用、体成分及血清生...     

额尔齐斯河银鲫形态学及COI基因序列分析

采用传统形态学方法和线粒体COI基因序列分析对额尔齐斯河银鲫(Carassius auratus gibelio)两个群体的形态和遗传差异进行了比较。结果显示:通过对8个可量性状和20个框架数据的主成分分析可以看出,两个群体分别占据两个不相重叠的区域,两个群体在形态上存在明显分化。COI基因序列分析显示,两群体之间遗传距离为0.012,群体间遗传距离是群体内最大遗传距离的4倍,两群体间在编码的氨基酸序列上出现了一处替换,群体遗分化指数值为0.96078,基因流值为0.01,表明群体间缺乏基因交流,群体间有明显的遗传分化。     

磁珠富集法制备大口鲶的微卫星分子标记

通过磁珠富集的方法分离大口鲶（Silurus meriaionalis）的微卫星分子标记。将基因组DNA酶切,梯度离心收集400～900bp片段并纯化,连接Brown接头,用生物素标记的寡核苷酸（CA）15作探针与其杂交,杂交复合物结合到包被有链霉亲和素的磁珠上,然后将这些片段洗脱,PCR扩增,进行克隆构建“基因组文库”,再通过同位素标记的探针（CA）15进行2次杂交筛选,所得到的阳性克隆测序。从所获得593个阳性克隆中选取178个经测序,97．19％（173个）含有微卫星序列,90．60％重复数在10以上,75．98％为完美型。除探针中使用的CA重复单元外,还观察到Cr、GA、ATG的重复序列。设计获得120对微卫星引物,合成40对经PCR筛选,结果31对引物扩增出多态性条带。显示出,磁珠富集法是获得微卫星分子标记的一种有效的方法,可成为今后发展该标记的主要方法。同时,制备出的微卫星标记可为今后研究大口鲶的分子遗传育种提供有用的遗传标记。     

草鱼和银鲫肠道产消化酶细菌的研究

检测了分别从草鱼(Ctenopharyngodon idellus)和银鲫(Carassius auratus gibelio)肠道中分离的180株细菌的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶的产酶能力。结果显示,两种鱼肠道内可分泌胞外消化酶的细菌包括Aero-monas(气单胞菌属,Aer.)、Vibrio(弧菌属,Vib.)、Bacillus(芽孢杆菌属,Bac.)、Pseudomonas(假单胞菌属,Pse.)四个种属的细菌,Aer.在其中占主要优势,45.71%的Aer.可分泌胞外消化酶。草鱼可分泌上述四种胞外消化酶的菌株共有33株,占肠道菌总数的36.67%;银鲫43株,占47.78%。产酶菌的分布上,草鱼中肠内产消化酶细菌数量显著多于前肠和后肠(P<0.05),前、中、后肠分别是6株、20株和7株;银鲫中肠和后肠数量差异不显著,前肠分布最少。草鱼分泌蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶的菌株分别有21株(23.33%)、10株(11.11%)、30株(33.33%)和16株(17.78%)。银鲫肠道内未检测到可分泌纤维素酶的细菌,蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶菌株的数量分别是21株、37株和17株。可见鱼类肠道细菌对食饵消化有重要作用。     

磁珠富集法与小片段克隆法筛选鲤微卫星的比较研究

用2种方法克隆黑龙江鲤(Cyprinus(Cyprinus)carpio haonatopterus)的微卫星序列。这2种方法分别是：①经典的小片段DNA克隆库,用末端标记的[γ^-32]ATP的CA重复序列为探针筛选;②将酶切获得的小片段DNA用结合有磁珠的并连接有15个CA重复序列的生物素进行富集,获得的含有CA重复的DNA片段并经过两次PCR扩增再克隆的方法获得富集微卫星片段的克隆库。从前一个方法的克隆库中筛选2000个菌落,获得阳性克隆45个,有22个含有微卫星,完美型的占63．6％,非完美型的占22．7％,混合型的占13．7％,重复次数超过10的有9个,占40．9％;从方法②的克隆库中筛选2600个菌落,获得阳性克隆1300个,测序其中的390个克隆,微卫星314个,完美型的占79．0％;非完美型的占14．3％;混合型的占6．7％,重复次数超过10的有293个,占93．3％。结果表明,用生物素结合磁珠富集法克隆微卫星效率高,成本低,所获微卫星质量高,是一种值得推荐的微卫星制备方法。     

磁珠富集法分离草鱼微卫星分子标记

磁珠富集法是一种快速、高效的分离微卫星分子标记的方法。本研究通过该方法分离草鱼的微卫星分子标记。将草鱼（Ctenopharyngodon idella）基因组DNA经Sau3AI酶切,同收纯化400～900bp片段,连上接头,构建“基因组PCR文库”。用生物素标记的简单重复序列（CA）15作探针与其杂交,杂交复合物结合到包被有链霉亲和素的磁珠上,经一系列的洗涤过程,去除磁珠表面不含有微卫星的片段。将吸附在磁珠上的片段洗脱,PCR扩增放大,再进行克隆和测序,根据微卫星两端的保守序列设计引物,即可得到微卫星分子标记。本研究义通过同位素标记的探针（CA）15进行二次杂交筛选,获得阳性克隆132个,所得到的阳性克隆经测序,86．36％含有微卫星序列,共获得130个微卫星DNA序列。用引物设计软件Primer Premier5．0没计引物83对。     

方正银鲫微卫星序列的筛选及PCR扩增产物的初步检测

采用小片段克隆法构建了方正银鲫[（Carassius auratus gibelio（Block）]部分基因组文库，并采用非影印的方法将转化子转移到硝酸纤维素滤膜上。用人工合成、并经放射性同位素[γ-^32P]ATP标记的（CA）15探针对构建的基因组文库进行筛选，获得137个阳性克隆，经测序得到微卫星序列130个，其中完美型、非完美型、混合型分别占64．3％、16．9％和18.8％。应用引物设计软件Primer Prmmer5．0进行引物设计，得到引物103对。合成30对引物，随机选取其中5对进行PCR扩增。结果表明，这5对引物均可以稳定扩增，并且观测杂合度均较高。     

浅山区塘坝养殖方正银鲫试验研究

2002年4月10日～2002年10月15日在方正县选择浅山区塘坝进行方正银鲫养殖试验研究。结果表明：在低温浅山区塘坝进行方正银鲫为主的养殖是可行的，经：170d的养殖，方正银鲫由放养时的l00g到出池时250g，亩利润为1233．4元，同时，搭配大规格鲢鳙鱼，可取得高产高效的养殖效果。     

同源雌核发育银鲫子代微卫星杂合位点的分离

使用14对银鲫（Carassius autatus gibelio Bloch）微卫星引物对同源雌核发育的银鲫子代及其亲本进行多态性研究，探讨雌核发育银鲫的母本微卫星杂合位点在同源传代中是否有分离的情况发生。在所选用的14对微卫星引物中，有8对在父母本间检测出不同的多态性，在所检测的第1组银鲫自交的子代中，只有1个个体在所检测的8个微卫星位点均存在变异，有明显的父本特异性条带出现，表现出了大量父本遗传信息，出现率为4．55％；在第2组检测到1个个体只在SCM13位点上出现母本部分特异性条带的缺失、弱化，而在其他位点上没有发现变异，出现率为1．52％。此结果表明，雌核发育银鲫卵子大部分在配子发生过程中没有发生减数分裂，即使用同源精子刺激，也行雌核发育生殖；但是，有极少数卵子在配子发生过程中，可能发生了部分减数分裂，具有部分融合同源精子的能力，从而在子代中检测到父本以及在融合过程中重组来的特异条带，用微卫星分于标记证实了银鲫两种生殖方式的存在，即雌核发育生殖和两性融合生殖。     

氟甲喹对异育银鲫细胞色素CYP450主要药酶的影响

在分析了氟甲喹腹腔注射后对异育银鲫(Carassius auratus gibelio)主要药酶活性影响的基础上,从蛋白表达和mRNA转录水平探究了氟甲喹对CYP1A(EROD)的诱导机制.以氟甲喹剂量35 mg/kg一次性腹腔注射异育银鲫24 h后,肝微粒体的7-乙氧基异吩唑酮-O-脱乙基酶(EROD)活性为54.33 pmol/(mg·min).显著高于对照组的34.00pmol/(mg·min)(P<0.01),而红霉索-N-脱甲基酶(ERND)[177.98 pmol/(mg·min)]、氨基比林-N-脱甲基酶(APD)[934.40 pmol/(mg·min)]及7-乙氧基香豆素-O-脱乙基酶(ECOD)[9.84 pmol/(mg·min)]与对照组[分别为140.90pmol/(mg·min)]、850.71 pmol/(mg·min)和8.93 pmol/(mg·min)]相比无显著性差异;除肾组织中ERND活性高于肝脏外,其他CYP亚型药酶活性(APD、EROD和ECOD)均以肝组织中最高.Western-blotting印迹表明,实验组肝脏中CYP1A蛋白含量明显高于对照组,与酶活(EROD)相符合;而肾、肠中没有检测到特异性条带.半定量RT-PCR结果显示,CYPiAmRNA在肝、肾和肠均有表达,但实验组与对照组并无明显差异.体外实验中,不同浓度的氟甲喹与微粒体共孵育,未见EROD活性与浓度、时间的依赖关系.综上推测,氟甲喹对鲫鱼肝CYP1A的诱导是在翻译后水平,可能是加强蛋白的稳定性.本研究旨在为氟甲喹在鱼类中的合理应用提供科学依据.     

Evaluation of rendered animal protein ingredients for replacement of fish meal in practical diets for gibel carp,Carassius auratus gibelio (Bloch)

A 12‐week feeding trial was carried out in fibreglass tanks to examine partial replacement of fish meal (FM) with poultry by‐product meal (PBM), meat and bone meal (MBM) and blood meal (BM) in practical diets for gibel carp Carassius auratus gibelio (Bloch). Triplicate groups of fish (initial body weight 15.3 g fish^?1) were fed eight isonitrogenous (crude protein: 37.5%) and isolipidic diets (crude lipid: 7%). The control diet is the commercial diet of gibel carp, which used 18% of FM as the sole animal protein source. In the other seven diets (Diet 2–Diet 8), 17–83% of FM protein was substituted by a blend of PBM and BM or a blend of PBM, MBM and BM. The final body weight and thermal‐unit growth coefficient of fish fed the feeds in Diet 8 in which 83% of FM protein was replaced by the blend of 3% BM, 10% PBM and 5% MBM is significantly lower than Diet 1 (the control). The feed efficiency ratio in Diet 8 group is significantly lower than Diet 1, 2, 4 and 7 groups. The results of the present study indicated that a combination of PBM, BM and MBM can replace most of the FM protein and the FM level can be reduced to about 6% with satisfactory growth and feed utilization in practical diets for gibel carp.     

三倍体和二倍体银鲫精巢组织学的比较

通过光学显微镜对染色体数为150±的三倍体和染色体数为100的二倍体银鲫(Carassius ouratus gibclio Bloch)的精巢组织学结构进行了比较观察.三倍体和二倍体银鲫的精巢组织学结构基本相同,属于小叶型,都是由外膜和实质构成,各精小叶呈辐射状分布,一个小叶由数个精小囊组成.其精原细胞存在于精小叶内壁上,精母细胞和未成熟的精子细胞位于精小囊中,精子成熟后从精小囊进入小叶腔.三倍体银鲫成熟精子的体积为(11.8±2.8)μm3,二倍体平均为(6.8±1.8)μm3,二者的比例接近3:2.结果表明三倍体银鲫的精巢能够发育成熟,其精子发生过程正常,经过减数分裂,能产生正常的精子;因此三倍体的黑龙江银鲫是具有双倍性特征的多倍体群体.     

额尔齐斯河2种类型雌性银鲫的形态特征及D-loop基因序列比较

2008年5月调查发现,在额尔齐斯河主河道(185团)的雌性银鲫(Carassius auratus gibelio)群体中存在2种形态类型,按照体长比体高的形态学性状区分,分别为高背型(1.78~2.14)和低背型(2.18~2.39)。形态学分析表明,高背型和低背型的侧线鳞分别为31和30,侧线上(下)鳞为分别7和6,两者在体高、头高、尾柄高、体宽、头宽等性状上存在显著差异(P<0.01),高背型比低背型具有明显的体型优势。生长特性分析表明,在相同体长或年龄的雌性群体中,高背型的平均体质量约为低背型的1.3~1.9倍,而表现出更为优越的生长性能。线粒体控制区序列分析表明,高背型和低背型群体各自独享1个单倍型(分别为EG1和ED1),为2个不同的遗传谱系类群,遗传分化仅为0.004,远低于属内种间的0.020~0.045,两者尚属群体内变异;在分子系统关系中,高背型和低背型分别与方正银鲫的2个单倍型(FZ1和FZ13)共享并聚为单系,推测额尔齐斯河银鲫源自于黑龙江(方正银鲫)。与国内其他地方群体或品种比较表明,额尔齐斯河2种类型雌性银鲫,特别是高背型具有更为突出的生长优势,可作为优良的开发养殖品种和更具潜力的鱼类育种材料。