检测冻肉中大肠杆菌O157∶H7的两种方法比较

大肠杆菌O157∶H7属于肠出血性大肠杆菌(en-terohemorrhagic E.coli,EHEC),是EHEC的主要血清型。感染大肠杆菌O157∶H7可使人患腹泻、出血性结肠炎,也可引发溶血性尿毒综合征及血栓形成性血小板减少性紫癜等严重并发征。笔者运用胶体金免疫(Colloidal gold immunoassay,GIA)检测卡和荧光PCR技术,对东莞市108份冻肉中的大肠杆菌O157∶H7进行了检测,并对2种方法的检测效果进行了分析比较。1材料与方法1.1材料东莞市各镇(区)冻肉库中的冻肉,共108份。大肠杆菌O157∶H7、O1、O48、沙门菌等菌株,由华南农业大学兽医学院郭霄峰教授惠赠…     

肉类大肠杆菌O157∶H7污染情况调查

大肠杆菌O157∶H7是一种重要的人兽共患病原微生物,人感染大肠杆菌O157∶H7可出现腹泻、出血性结肠炎、溶血性尿毒综合征及血栓性血小板减少紫癜等严重并发征,严重者可导致死亡[1].1983年,Riley LW等[2]首先报道了一种罕见的可引起食物中毒的大肠杆菌,该菌即为大肠杆菌O157∶H7.目前,大肠杆菌O15...     

上海地区猪场饲养环境中大肠杆菌O157∶H7的监测

大肠杆菌O157：H7出血性肠炎是近年引起世界广泛关注的肠道传染病。自1983年美国Riley等首次报道大肠杆菌O157：H7出血性肠炎以来,相继在英国、加拿大、日本等国出现暴发性流行病例。大肠杆菌O157：H7是肠出血性大肠杆菌（EHEC）的一个主要血清型,牛、羊、     

进口冻肉大肠杆菌O157∶H7的污染状况调查及鉴定

肠道出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic E.coli, EHEC)是出血性肠炎(haemorrhagic colitis, HC)的病原体,其主要血清型为O157∶H7.     

家兔出血性大肠杆菌O157：H7的感染试验研究

以出血性大肠杆菌O157：H7对家兔进行试验感染,观察了大肠杆菌O157：H7对家兔的影响,通过玻片凝集试验分析了粪中大肠杆菌O157：H7的变化,结果表明,大肠杆菌O157：H7可导致兔的肠道反应和腹泻,在腹泻期排出的菌体最高,并可维护较长时间的带菌,说明家兔依然是志贺样毒素大肠杆菌的易感性动物、应引起高度重视。     

肠出血性大肠杆菌强定殖株中新的双组份系统的鉴定

为了比较7株肠出血性大肠杆菌O157∶H7的定殖能力,采用灌胃感染的方式,将7株肠出血性大肠杆菌分别感染小鼠。对粪便中的细菌以及盲肠内定殖的细菌进行分离、计数,发现牛源菌株C1的定殖能力最强,且定殖维持时间最长。对C1菌株的基因组序列分析得到1对功能未知的双组份调节系统(TCS),N5512/N5520。PCR检测显示N5512/N5520存在于绝大多数肠出血性大肠杆菌O157∶H7临床分离株(98.5%),而在其他致病型的大肠杆菌中没有检测到。本研究为大肠杆菌O157∶H7的定殖和致病机制研究奠定了基础。     

饲料中肠出血性大肠杆菌O157∶H7双重PCR检测方法的建立

根据肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic E.coli,EHEC)O157∶H7的O抗原编码基因rfb E和H抗原编码基因fli C分别设计引物,建立双重PCR方法。饲料样品人工污染EHEC O157∶H7后进行增菌培养,利用双重PCR进行检测EHEC O157∶H7。结果表明:建立的PCR方法能够特异性扩增出目的条带,敏感性可达到100 cfu细菌。双重PCR方法可以有效地检测出饲料中人工污染的EHEC O157∶H7,人工污染饲料样品经4 h预增菌处理后,该方法的检测下限为20 cfu细菌。本研究建立的双重PCR方法可快速、特异地检测出饲料中污染的EHEC O157∶H7,可用于饲料中EHEC O157∶H7的检测及流行病学调查。     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7 EMA-PCR检测技术的建立

肠出血性大肠杆菌O157∶H7是一种重要的人畜共患传染病病原菌。为建立一种特异、灵敏的O157∶H7新型检测技术,以O157抗原基因(rfbE基因)为模板设计特异性引物,利用叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)处理菌液,沸水浴法制备细菌裂解液,优化PCR条件,建立一种快速、有效的O157∶H7活菌EMA-PCR检测方法。结果显示:EMA-PCR可从rfbE基因阳性菌株CVCC248和两株临床分离菌株cd0912、cd0803中扩增出大小为495 bp的特异性条带,检测灵敏度可达12 CFU/mL。经EMA处理,从含有1%～100%O157∶H7 CVCC248活菌混合悬液制备的DNA中均可扩增出目的片段。因此,成功建立了肠出血性大肠杆菌O157∶H7的EMA-PCR检测方法;该方法可避免因分析的样品中含有死细菌而造成的假阳性检测结果,检测的准确性和真实性较传统PCR大大提高。O157∶H7 EMA-PCR技术的建立为O157∶H7的临床诊断提供了新的方法,具有重要的实际应用价值和良好的应用前景。     

检测冻肉中大肠杆菌O157：H7的两种方法比较

大肠杆菌O157：H7属于肠出血性大肠杆菌（enterohemorrhagic E．coli，EHEC），是EHEC的主要血清型。感染大肠杆菌0157：H7可使人息腹泻、出血性结肠炎，也可引发溶血性尿毒综合征及血栓形成性血小板减少性紫癜等严重并发征。笔者运用胶体金免疫（Colloidal gold immunoassay，GIA）检测卡和荧光PCR技术，对东莞市108份冻肉中的大肠杆菌O157：H7进行了检测，并对2种方法的检测效果进行了分析比较。     

控制大肠杆菌O157∶H7对食品、水源等的污染

大肠埃希菌O157∶H7感染性腹泻是人类新发生的传染病,已成为世界关注的公共卫生问题[1-2]。大量研究证实,家禽、家畜是大肠埃希菌O157∶H7的重要宿主[3-4]。近年来,由肠出血性大肠杆菌O157∶H7引起的食源性疾病的暴发、流行呈逐年上升的趋势。它能引起出血性肠炎、溶血性尿毒综合症、血栓性血小板减少性紫癫等临床症状,致病性强、死亡率高,对人体的健康造成很大的威胁[5]。要从源头控制大肠杆菌O157:H7对食品、水源等的污染需从食品生产、加工、贮藏、销售以及消费的各个环节着手,即控制农场到餐桌等的全部过程,可以采取以下几项措施[6]…     

大肠杆菌O157∶H7检测技术的概况

大肠埃希氏杆菌简称大肠杆菌是寄居肠道的优势菌群之一,某些血清型毒力较强为致病性大肠杆菌,可引起人类腹泻。致腹泻性大肠杆菌根据致病机制不同可分为5种类型:肠出血性大肠杆菌,肠侵袭性大肠杆菌,肠致病性大肠杆菌,肠产毒性大肠杆菌,肠集聚性大肠杆菌。大肠杆菌O157∶H7是最常见类型,O表示其抗原类型,H7表示血清型。大肠杆菌O157∶H7的感染剂量极低,有人认为食入不足10个细菌就可致病,且病死率相对较高,发病后服用抗生素有无效果尚无定论,目前还没有特效疫苗生产。以上这些因素决定了大     

大肠杆菌O157∶H7实时定量PCR检测方法的建立

根据GenBank公布的大肠杆菌O157∶H7的Flic(H7)基因序列进行同源性比较分析,选择保守序列设计一对特异性扩增引物,通过优化反应条件,建立一个用于大肠杆菌O157∶H7快速定量检测的实时定量PCR方法。该方法的最低检测极限是103CFU/mL,敏感性比常规PCR提高10倍。方法重复性好、特异性强,重复性检测的变异系数均小于2%;只能检测大肠杆菌O157∶H7,对非大肠杆菌O157∶H7血清型细菌、猪链球菌2型、副猪嗜血杆菌无反应。利用此方法对模拟样本进行定量检测,其结果与平板细菌计数基本一致,表明此方法可作为大肠杆菌O157∶H7快速诊断和疫情监测的一种快速、准确、简便的检测工具。     

几种新的动物及动物与人共患病简介（三）

（接上期）3 O157大肠杆菌病（肠出血性大肠杆菌病） 90年代曾在一些媒体上大量报导的，曾在日本、非洲等地引起恐慌的病菌--O157，实际上是一种“肠出血性大肠杆菌”（EHEC），它是80年代初发现的一种新病。目前已知引起此病的大肠杆菌有50多个血清型，其中90％以上为O157，O157又是有两种亚型：O157∶H7和O157∶Nm。 临床危害：O157除能引起人的严重腹泻外，常导致三种严重并发症：1．出血性结肠炎（HC）；2．溶血性尿毒综合症（HUS）；3．血栓形成血小板减少性紫癜（TTP）。因此，该菌对人的危害严重。 诊断方法：常采用血清学…     

进口冻肉大肠杆菌O157：H7的污染状况调查及鉴定

肠道出血性大肠杆菌 ( enterohemorrhagic E.coli,EHEC)是出血性肠炎 ( haemorrhagic colitis,HC)的病原体 ,其主要血清型为 O157∶H7。自 1 982年被首次确认为一种重要的人类肠道致病菌以来 ,该菌在美国、加拿大、英国、日本及南美某些国家出现严重的公共卫生问题 ,发生多次暴发流行及散发大量腹泻、出血性肠炎及溶血性尿毒综合征 ( HUS)等病例 ,成为新的凶险传染病之一。据 Reily报道 ,大肠杆菌 O157∶ H7基本上是一种食源性疾病 ,5 2 %是动物性食品引起 ,1 6%是人与人接触引起 ,1 4%是水果与蔬菜引起 ,1 2 %是水引起 ,因此加强进出…     

大肠杆菌O157:H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制

为建立快速检测鼠感染大肠杆菌O157∶H7后的抗体,本研究采用颗粒为20nm的胶体金溶液标记纯化的羊抗鼠IgG,制备金标探针,喷涂于玻璃纤维膜上;将大肠杆菌O157∶H7抗原和抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体F1分别包被于硝酸纤维素膜上作为检测线和质控线,组装成鼠血清O157∶H7抗体胶体金免疫层析检测试纸条。实验结果表明,该试纸条仅与O157∶H7阳性鼠血清发生特异性反应,用该试纸条与常规间接ELISA平行比较检测O157∶H7免疫鼠血清,抗体效价分别为1×106和1×105,两者的敏感度相当。该试纸条操作简便,10min可出结果,适用于调查与追溯鼠O157∶H7感染状况时的现场检测。     

大肠杆菌O_(157)多重PCR快速检测方法的建立

E. coli O157∶H7是肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)最有代表性的血清型,感染后能够导致人的出血性结肠炎(HC)、溶血性尿毒综合征(HUS)和血小板减少性紫癜(TTP)[1].     

大肠杆菌O_(157)∶H)7荧光PCR检测方法的建立与初步应用

为了建立大肠杆菌O157∶H7荧光PCR检测方法,试验参照Gen Bank中已发表的大肠杆菌O157∶H7的O抗原RFBE基因序列,针对保守区序列设计了特异性引物和探针,优化了反应体系和反应程序,评价了该方法的特异性、敏感性、重复性,并进行了临床样品检测。结果表明:该方法的特异性和重复性好,具有较高的敏感性,最低检测浓度为5 cfu/mL;用该方法检测60份冻肉样品,得到的结果与传统的细菌分离鉴定法一致。说明建立的大肠杆菌O157∶H7荧光PCR方法是快速鉴定大肠杆菌O157∶H7的有效方法,具有较大的应用价值。     

肠出血性大肠杆菌O157 ler基因缺失突变株的构建及其特性

以肠出血性大肠杆菌O157∶H786～24为始发菌株,利用自杀性载体pCVD442,根据同源重组的原理敲除了染色体上的ler基因,构建了O157∶H7 ler基因缺失突变菌株,并对其生物学特性进行了初步研究。荧光定量PCR试验结果表明,始发菌株对HEp-2细胞的平均黏附数量是突变菌株的17倍。试验也证实了ler基因对LEE致病岛毒力基因的正调控作用,这为O157∶H7基因缺失突变弱毒疫苗株的建立奠定了基础。     

大肠杆菌O157：H7的生物学特性

O157:H7大肠埃希氏菌是一种新发现病原微生物,感染大肠杆菌O157:H7主要引起婴幼儿腹泻,出血性结肠炎(haemorrhagic colitis,HC)、溶血性尿毒综合症(Haemolytic Uraemic Syndrome,HUS)、血栓性血小板减少性紫癜(thrombocytopenlc purpura,rrP)及死亡等[1-4].     

双抗夹心ELISA检测肠出血性大肠杆菌O157方法的建立

以前期建立并纯化的肠出血性大肠杆菌O157：H7单克隆抗体3D6,建立一种适宜食品样品检测的双抗夹心ELISA检测方法。该方法只对O157菌株有特异性反应,对非O157型肠出血性大肠杆菌及其他菌株无交叉反应。敏感性试验结果表明,对大肠杆菌O157纯培养菌液检出限为1.2×105 CFU/mL。选择性增菌培养后,对牛肉、猪肉和鸡肉与模拟样品中的大肠杆菌O157的检出限为0.4～4CFU/g。