不同萌发温度下红花大金元种子引发温度的筛选研究

以红花大金元种子为试验材料,研究不同温度下引发的种子在不同萌发温度下的发芽情况,为优化烟草种子引发工艺提供技术支持.结果表明,引发处理可以促进烟草种子发芽:发芽温度为25℃时,15℃下引发的所有处理平均发芽时间最短、平均发芽指数最大,处理间离散度最小,种子发芽最集中,该引发温度下最佳引发组合为水引发24 h;发芽温度为20℃时,5℃下引发的所有处理平均发芽时间较短、平均发芽指数最大,处理间离散度较小,种子发芽较集中,该引发温度下最佳引发组合为25 mg/L GA3溶液引发20 h;发芽温度为15℃时,10℃下引发的大部分处理平均发芽时间最短、平均发芽指数最大,处理间离散度较小,种子发芽较集中,该引发温度下最佳引发组合为100 mg/L GA3溶液引发16h.     

烟草青枯菌特异性引物筛选及其应用

为解决快速诊断烟田土壤中是否含有烟草青枯菌这一问题,基于已公布的5个青枯菌基因组全基因组比对结果,设计9对青枯菌特异性引物,筛选并验证得到3对引物能对青枯菌进行特异性扩增。应用筛选得到的引物能对土壤中烟草青枯菌进行特异性检测,初步认为本方法对土壤青枯菌最低检出率为2×106/g,为土壤中快速检测烟草青枯菌提供了快速、准确诊断的新方法。     

红花大金元品种最佳成熟度及烘烤技术

红花大金元品种,因其香气、吃味独特,香型风格特点突出,作为生产中式卷烟的优质原料,倍受国内卷烟工业的欢迎。贵州省威宁县于1968年引进试种成功,70～80年代曾一度成为威宁县烤烟生产上的主要品种,90年代又有所下降,但近年来,种植面积又有所扩大。占威宁县烤烟种植面积的30％。     

红花草莓红花基因RAPD标记转化为SCAR标记

红花草莓不但具有经济价值,还具有很高的观赏价值。本研究将3个与红花基因连锁的RAPD标记即AW65679（1031bp）、S484（620bp）与S1383（500bp）进行了克隆与核苷酸测序,并根据测序结果设计4对SCAR引物,将这4对引物对红花草莓品种粉红熊猫、白花草莓品种鬼怒甘及它们的杂交后代进行PCR扩增程序优化和鉴定,筛选出一对SCAR引物可扩增出与红花基因连锁的特异片段AW65679（1038bp）,这就是与红花基因连锁的SCAR标记。SCAR标记因其稳定性好,重复性高将为草莓分子育种开辟一条新的有效途径。     

不同采收成熟度对红花大金元烟叶质量的影响

摘要：成熟度是烟叶质量的核心要素,明确红大适宜成熟度采收对提高红大烟叶质量具有重要意义。本研究采用烤后烟叶质量评价的方法,对红大不同采收成熟度的烤后烟叶进行了分析和评价,结果表明,不同采收成熟度间外观质量差异不显著;内在化学成分上,随采收成熟度的增加,下部叶氮代谢趋于合理,碳代谢逐步加深,以6-7成黄采收碳氮代谢比较平衡,化学成分相对最协调;中部叶碳氮代谢及各品质指标主要呈抛物线变化,化学成分以8-9成黄采收最为协调;上部叶碳氮代谢加剧,主要化学成分向有利于烟叶品质的更深层次的代谢进行,化学成分以9-10成黄采收最为协调;感官评吸的结果与化学成分结果一致。     

不同牛粪施用量对‘红花大金元’烟叶产质量的影响

研究不同牛粪施用量处理对红花大金元烟叶产质量的影响。试验结果表明,在农艺性状方面,每公顷施牛粪2250kg处理组烟株生长发育最好,其次是每公顷施1500kg处理组;在外观质量方面,随牛粪用量的增加,外观质量表现趋好;在化学成分方面,每公顷施1500kg处理组较为协调,主要品质指标含量均在适宜范围内;经济性状方面,每公顷施牛粪1500kg、2250Kg表现较好。     

光照、温度和盐胁迫对红花大金元种子萌发的影响

从光照、温度、NaCl胁迫等方面对红花大金元种子萌发特性进行了探讨.结果表明:光照对红花大金元种子萌发有显著促进作用;种子萌发的适宜温度为25～30℃,以25℃的发芽势、发芽率、发芽指数和活力指数最高且萌发后的幼苗生长良好;NaCl胁迫对红花大金元种子萌发和幼苗生长均有抑制作用:随NaCl浓度升高,种子发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数和幼苗生长量均下降,发芽的高峰期推迟且峰值变小,相对盐害率升高;浓度大于0.20 mol/L时对种子萌发和幼苗生长的抑制作用明显,浓度达到0.50mol/L时种子不再发芽,但低浓度(0.01 mol/L和0.05mol/L)下种子发芽势、发芽率与对照差异不显著.     

不同有机肥对‘红花大金元’生长及产量产值的影响

为给保山‘红花大金元’合理施用有机肥提供理论依据,研究了菜籽饼、农家肥、秸秆3种有机肥不同施用量对‘红花大金元’生长发育和产质量的影响。结果表明：从烟株长势上看,农家肥处理随着用量的增加长势减弱;秸秆处理在前期生长长势较差,但随着生育期推进,现蕾期以后随着秸秆施用量的增加,烟株长势增强;菜籽饼处理不同用量之间烟株长势在各生育期差别不明显。从经济性状比较,处理间产量差异显著,而产值、均价和上等烟比率差异不显著。农家肥处理随着施用量的增加,产量产值有降低的趋势,但上等烟比率和均价呈增加趋势;而菜籽饼处理的经济性状随施肥量的增加,先增加后降低;秸秆处理产量较低,但均价较高,产值收益明显低于对照处理。综上所述,在保山地区‘红花大金元’品种每公顷施菜籽饼150~300 kg,或农家肥7500~15000 kg,产值产量收益较好。     

大赖草ISSR-PCR反应体系的优化及引物筛选

本试验的目的在于建立大赖草最佳的ISSR-PCR反应体系。以大赖草基因组DNA为模板,利用单因子实验相结合正交试验设计的方法,对PCR体系的各因素(d NTPs,DNA及引物等)进行优化试验,同时筛选出扩增条带清晰、稳定性好的ISSR引物并确定其退火温度。试验表明,经优化后的PCR体系:在25μL体系中,DNA用量为50 ng、Taq DNA聚合酶用量为1.0 U、引物的浓度为0.4μmol/L、d NTPs的浓度为0.3 mmol/L、和Mg2+的浓度为2.5 mmol/L。体系验证试验表明该体系稳定、可靠,另外筛选出10条较好的引物,可用于后续的大赖草遗传多样性分析及亲缘关系分析、基因定位与克隆、连锁图谱构建等方面的研究,并对其它近缘作物有指导意义。     

花椰菜RAPD随机引物的筛选

【研究目的】为了解37份花椰菜种质资源的遗传多样性和亲缘关系,为花椰菜育种提供理论基础,本研究以其中7份来自不同产地的花椰菜品种为模板对80条随机引物进行了初步筛选。【结果】48条随机引物能获得多态性扩增,25条引物的RAPD分析结果无多态性,7条引物的未获得扩增条带;【结论】 引物 S11、S15、S16、S17、S18和 S65 扩增条带比较稳定、清晰且具有多态性,多态性比例在 16.7% - 75.0% 之间,可作为花椰菜RAPD分析的随机引物。     

甜菜SCoT核心引物的筛选

【研究目的】为了筛选出适合甜菜品种遗传多样性分析的SCoT引物,为SCoT引物得以在甜菜中进行深入应用奠定基础,本研究甜菜以8个来自不同国家的甜菜品种为材料对80条SCoT引物进行扩增【方法】扩增方法采用SCoT-PCR最优反应体系包含2.0 μL的10×PCR buffer（含Mg2+）、10 ng的DNA、0.5 U的Taq DNA聚合酶、10 μmol/L的引物2 μL以及0.1 μL的dNTPs (2.5 mmol/L each)。【结果】结果从80条SCoT引物中筛选出20条多态性高的引物,这20条引物最多扩增出16条多态性条带,最少扩增出2条多态性条带,扩增总条带155条,其中多态性条带为134条,多态性条带的百分比为86.5%。【结论】通过对核心引物的有效性验证,表明筛选出的20个核心引物非常适合用于甜菜指纹图谱的构建。     

贮藏时间对烟草品种红花大金元种子萌发和生理特性的影响

探讨烟草种子萌发和生理生化特性在不同贮藏时间的变化情况,为烟草种质资源保存和田间生产提供参考。以常温贮藏0~12个月的烟草品种“红花大金元”种子为试验材料,研究其萌发特性、抗氧化酶活性、渗透调节物质（脯氨酸、可溶性糖）、丙二醛（MDA）含量和相对电导率在贮藏过程中的变化。结果表明,种子的活力指数、发芽势、发芽率和发芽指数均随着贮藏时间的延长呈先升高后降低的趋势,贮藏6个月的种子发芽率最高,达到93.21%,贮藏12个月的种子基本失去萌发活性;随着贮藏时间的延长,超氧化物歧化酶、过氧化物酶和过氧化氢酶活性以及脯氨酸和可溶性糖含量整体上呈不断下降的趋势,MDA含量和相对电导率整体上呈不断提高的趋势。可见,烟草种子老化过程中,萌发能力先升高后降低,抗氧化酶活性整体下降,渗透调节物质消耗减少,细胞膜损伤加剧,在实际生产中,建议选择常温贮藏6个月内的种子。     

甜菜EST-SSR引物的快速筛选

为了快速从甜菜EST-SSR引物中筛选出适合甜菜分子生物学的引物,利用12个不同的甜菜品种对80对甜菜EST-SSR引物进行扩增,同时设置12个不同的退火温度,利用8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶对PCR产物进行分离。结果表明：80对EST-SSR引物虽然均能够扩增出产物,但绝大部分引物扩增的条带由于没有多态性或者条带难以辨别而不能够使用,只有13对引物扩增出了清晰、易于识别的条带,有4对引物多态性较高,其余9对引物多态性均较低,而梯度退火温度则表明,退火温度对EST-SSR引物影响不大,只有个别引物会在较低退火温度条件下产生非特异性的条带,因此将所有引物的退火温度均设定为60℃。利用不同品种以及梯度退火温度可以实现EST-SSR引物的快速筛选,但要想筛选出多态性高的引物还需要对更多的EST-SSR引物进行筛选。     

喷施腐植酸钾对烤烟品种‘红花大金元’烟叶品质的影响

为探索叶面喷施腐植酸钾对烟草品种‘红花大金元’(以下简称‘红大’)产量、品质的影响,改善‘红大’的烤性和可用性,以烟草品种‘红大’为材料,采用随机区组设计,在团棵期、旺长期、现蕾期各喷施腐植酸钾1次,并比较成熟期烟叶农艺性状和烤后烟叶产量、产值。结果表明:喷施腐植酸钾后‘红大’处理的相关农艺性状与对照相比没有显著差异;而烤后烟叶产量、产值、上等烟比例、中上等烟比例较对照分别提高了7.25%、9.22%、6.23%和8.49%;主要化学成分组成较对照更加协调,其中还原糖、总糖含量、氯含量较对照分别降低了10.09%、17.54%、53.85%,差异达到显著水平;总氮、钾含量较对照分别提高了13.58%、21.09%,差异达到极显著水平;总植物碱含量差异在两者间不显著。‘红大’处理评吸质量保持了‘红大’优异的质量风格,两者等级均为较好,‘红大’处理的评分稍高,但不明显。腐植酸钾作为一种环保的绿色有机钾肥,可在烟叶生产中用于改善其产量和品质。     

不同移栽期下打顶方式对红花大金元上部叶风格特色的影响

为研究不同移栽期下打顶方式对烤烟‘红花大金元’上部烟叶分割特色的影响,采用田间随机区组试验进行研究。结果表明,3月25日移栽采用中心红花开放打顶和盛花打顶,4月1日移栽采用中心花开放打顶,4月5日采用中心花开放打顶可以降低上部烟叶烟碱含量,同时有助于提高下部烟叶烟碱含量,提高烟叶整体质量。综合可知,烟叶适时提早移栽,搭配中心花开放或者盛花开放搭配的打顶方式,可以有效降低上部烟碱含量。     

冬瓜SSR-PCR体系优化及引物筛选

本研究利用L16(54)正交试验设计研究了影响冬瓜SSR-PCR的五个因子(10×Buffer(含Mg2+),d NTP,DNA,引物,r Taq),研究结果表明Buffer(含Mg2+)和r Taq对PCR影响最明显,最终筛选出最佳反应体系:10×Buffer 2.0μL(1×Buffer),d NTP 2.0μL(200μmol/μL),DNA 0.6μL(6 ng/μL),引物0.4μL(0.2μmol/L)。体系体积为20μL,循环数为35。引物筛选程序为:94℃预变性3 min,94℃变性45 s,58℃~68℃复性30 s,5个循环,每个循环退火温度降2℃,72℃延伸1 min,94℃变性30 s,50℃~58℃复性1 min,8个循环,每个循环退火温度降低1℃,72℃延伸1 min,94℃变性30 s,50℃复性30 s,72℃延伸1 min,共30个循环,72℃延伸7 min。本研究建立了适合冬瓜的SSR反应体系和引物多态性筛选程序。     

不同移栽期打顶方式对‘红花大金元’上部叶风格特色的影响

为研究不同移栽期的打顶方式对烤烟‘红花大金元’上部烟叶分割特色的影响,采用田间随机区组试验进行研究。结果表明,3月25日移栽采用中心红花开放打顶和盛花打顶,4月1日移栽采用中心花开放打顶,4月5日采用中心花开放打顶可以降低上部烟叶烟碱含量,同时有助于提高下部烟叶烟碱含量,提高烟叶整体质量。综合可知,烟叶适时提早移栽,搭配中心花开放或者盛花开放搭配的打顶方式,可以有效降低上部烟碱含量。     

甜菜CDDP核心引物的筛选及利用CDDP引物鉴别甜菜品种

为了研究CDDP引物在甜菜育种上的应用,选用12个甜菜品种对35条CDDP引物进行筛选。随后,利用筛选的引物对43个甜菜登记品种进行鉴别。结果显示35条CDDP引物中有10条引物可以作为甜菜品种真实性鉴定的核心引物。这些引物扩增的条带具有清晰、易于识别、多态性高的特点,普遍分布在50~400 bp之间。其中,引物KNOX-3就可以鉴别全部43个甜菜品种。引物MADS-1和F3’H4的组合也可以鉴别全部的43个品种。甜菜CDDP核心引物的筛选,对于将来利用CDDP引物鉴别甜菜品种、对甜菜种质资源进行分类,为有效维护农民、育种家以及糖厂的利益提供了理论和技术上的支持。     

桉树SSR-PCR体系优化及引物筛选应用

以尾叶桉、细叶桉、粗皮桉为材料,采用L16(45)正交设计对SSR-PCR反应体系中的引物浓度、DNA浓度、Mg2+浓度、d NTP浓度和Taq酶含量5种因素的4个水平进行优化实验,确立了适合细叶桉、粗皮桉、尾叶桉SSR-PCR最佳反应体系,最终优化的SSR-PCR反应体系为:0.25μmol/L引物、5 ng模板DNA、3.75 mmol/L Mg2+、0.4 mmol/L d NTP、1.5 U Taq酶、1 m L 10×PCR Buffer,双蒸水补齐10μL;并利用优化的体系从74对SSR引物中筛选出12对多态性较高的引物,12对引物在3种桉树中均能扩增出条带,在尾叶桉、细叶桉、粗皮桉中的多态率分别为100%、92.86%、64.29%,为尾叶桉、细叶桉、粗皮桉的遗传多样性分析、品种鉴定、亲缘关系分析等提供了分子技术基础。     

鸭茅SSR-PCR反应体系优化及引物筛选

应用L16(44)正交设计对影响鸭茅SSR-PCR的主要参数进行优化,建立适于鸭茅的SSR反应体系和扩增程序.在15μL体系中各反应的最适合含量为:50ng模板DNA,240μmol/L dNTP,0.4μmol/L SSR引物,1.0 U Taq DNA聚合酶,1.5μL 10×PCR Buffer,2.5mmol/L MgC12.PCR适宜扩增程序为:94℃预变性4min,94℃变性30 s,52℃复性30 s,72℃延伸1 min,共35个循环,72℃延伸10 min,4℃保存.并对引物最适合退火温度进行优化,最终确定引物退火温度为48～52℃.同时选用100对鸭茅引物对4份材料进行扩增,筛选出条带清晰,多态性好的引物30对.用于鸭茅SSR标记的进一步研究.