农杆菌介导水稻sbeIIb基因转化体系的建立

本文对水稻愈伤组织再生体系及其转化影响因子进行了研究。以水稻品种秀水11的幼胚和成熟胚为外植体,以M S 肌醇0.1g/L 2,4-D 2mg/L 6-BA 0.2mg/L 脯胺酸2.8g/L 水解酪蛋白0.3g/L作诱导培养基,愈伤组织诱导率最高为73.45%,愈伤组织在M S 6-BA2 mg/L NAA 0.5mg/L的分化培养基上,分化频率达53.33%;在此基础上对农杆菌介导水稻愈伤组织转化的因子进行了优化,获得较高转化频率的条件为:预培养时间3d,在OD600值为0.6农杆菌菌液中感染10m in,共培养3d。     

高留胚率水稻辽粳294成熟胚组织培养条件的优化

以高留胚率水稻辽粳294成熟胚为外植体,对影响高留胚率水稻愈伤组织诱导、分化的接种方式、培养基中激素水平进行研究。结果表明,用解剖刀在胚上纵切1刀后再将种子接在培养基上,种子灭菌彻底,愈伤组织诱导率高且质量较好。诱导培养基中激素6-BA和KT的浓度对愈伤组织的诱导率有极显著的影响,诱导培养基为N6+2 mg/L 2,4-D+0.3 mg/L 6-BA+0.1 mg/L KT时,诱导率较高,可达90.0%;分化培养基为MS+0.8 mg/L NAA+2 mg/L 6-BA时,绿苗分化效果好,分化率为73.0%。     

苜蓿胚性愈伤组织诱导及植株再生研究

以苜蓿5～7 d苗龄无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,研究培养基中不同激素和浓度配比对苜蓿愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明,MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L愈伤组织诱导率达100%,且愈伤组织状态良好,增殖速度快。MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L为苜蓿胚性愈伤组织诱导的适宜培养基,诱导率为37.8%。胚性愈伤组织分化成苗培养基为MS+6-BA0.2 mg/L+NAA 0.01 mg/L,生根培养基为1/2MS+NAA 0.02 mg/L+蔗糖10.0 g/L。     

全粉加工兼早熟菜用马铃薯品种LK99再生体系的建立

以马铃薯品种LK99试管苗茎段为外植体,分别在6种培养基上进行愈伤组织的诱导,比较接种28 d时的出愈率及愈伤组织的形态,并将胚性愈伤接到8种不同分化培养基上进行再生苗的分化。结果表明,在接种28 d后,6种培养基均可诱导出大量的愈伤组织,以MS+2.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+3 mg/L GA3+0.5 mg/L 2,4-D培养基上胚性愈伤诱导率最高,生长状态最好。胚性愈伤在MS+2.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L ZT+3.5 mg/L GA3培养基上分化率最高,并且分化苗键壮。     

桃遗传转化再生体系的建立与优化

以桃不同胚龄胚为外植体,建立桃遗传转化再生体系.结果表明:花后50 d的胚均能诱导出愈伤组织,并可分化出不定芽.胚愈伤组织诱导培养基以MS+6-BA0.25 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L的效果最好,平均诱导率可达99.8%.将胚愈伤组织接种在培养基MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L上,愈伤组织转变为致密型,不定芽分化率为37.5%.将不定芽用100 mg/LIBA浸蘸其基部转移到不含激素的1/2 MS培养基中诱导生根,生根率为82.0%.花后75d的成熟胚不定芽的直接诱导率达到96.1%.     

植物抗病基因snc1在超级杂交稻父本0293中的遗传转化

以超级杂交稻父本0293为材料,利用农杆菌介导基因转化法研究植物抗病基因snc1在超级杂交稻父本中的遗传转化。结果表明:0293成熟胚愈伤组织的最适诱导培养基为NMB诱导培养基,2,4–D和6–BA的最适质量浓度分别为3.0和0.2 mg/L;以LB液体培养的农杆菌转化能力最强,抽真空转化方式获得的抗性愈伤率较高,最适共培养时间为2 d;麦芽糖为抗性愈伤组织分化的最适碳源,NMB+KT 0.4 mg/L+6–BA 2.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+IAA 0.5 mg/L为较适合的分化培养基;通过优化农杆菌介导的遗传转化条件,共获得6株含目的基因snc1的转化植株。     

马铃薯‘华颂66号’遗传转化体系的建立

为探究马铃薯的最佳遗传转化体系,以紫色马铃薯‘华颂66号’无菌组培苗茎段为外植体,用农杆菌介导法将含有植物沉默载体质粒pBWA(V)KS-miR8019转化马铃薯外植体,测定不同预培养时间、不同激素组合及抗生素对马铃薯愈伤再生转化体系的影响。结果表明：1)茎段预培养时间为2 d时,愈伤组织诱导率最高;2)最适的外植体愈伤组织诱导的培养基配方为：MS干粉式培养基+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D,愈伤组织的诱导率为96.7%。最适愈伤组织分化的培养基为：MS干粉式培养基+4.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+1.0 mg/L GA₃;3)植株再生及生根的抗生素最适筛选浓度为75 mg/L的卡那霉素;4)农杆菌抑制剂的最适浓度为300 mg/L的特美汀,且在愈伤组织诱导、分化及生根阶段都需要加入。综上,通过对农杆菌介导的愈伤再生转化过程中各个影响因素进行试验,初步建立了马铃薯‘华颂66号’的遗传转化体系。     

宁夏玉米高效再生体系的建立及其影响因素

以4个宁夏玉米品种幼胚为材料,采用组织培养法,研究培养基类型、基因型、外源激素、头孢霉素(Cef)对玉米幼胚培养及再生的影响。结果表明,在愈伤组织诱导过程中,Ⅰ号和Ⅱ号培养基诱导率较高,宁玉12号和宁0816的胚性愈伤组织诱导率相对较高,达到85.3%和82.1%;6-BA对不同基因型愈伤组织分化率的影响不同,添加6-BA对愈伤组织的分化均有促进作用;此外,当Cef质量浓度高于500 mg/L时,愈伤组织分化明显受到抑制。最佳诱导培养基为基本元素N6+水解酪蛋白200 mg/L+脯氨酸690 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L+蔗糖30 g/L+肌醇100 mg/L+AgNO310 mg/L,最佳分化培养基为基本培养基N6+6-BA1.0 mg/L+蔗糖50 g/L。     

‘克新13号’马铃薯植株再生和转化技术

为研究马铃薯植株再生和转化技术,以‘克新13号’的茎段、叶片和微型薯为外植体,接种到不同激素配比的培养集中进行愈伤组织诱导和分化,再采用农杆菌转化法,初步建立了马铃薯遗传转化再生体系。结果表明：茎段是‘克新13号’马铃薯比较理想的外植体材料,最佳的愈伤组织诱导培养基为4.4 g/L MS+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂+2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D+0.4 mg/L KT,愈伤组织诱导率在95%以上;最佳的分化培养基为4.4 g/L MS+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂+2 mg/L 6-BA+3 mg/L KT+0.5 mg/L GA₃+0.1 g/L肌醇,出苗率为56.25%;外植体预培养2 d后,用OD₆₀₀=0.5的农杆菌菌悬液侵染7 min,再共培养3 d,以50 mg/L Kan和200 mg/L Tim为抗生素进行筛选,能成功获得含目的基因Cas9p的转化植株。     

玉米湘农3号幼胚愈伤组织诱导及再生体系建立

以玉米品种湘农3号幼胚为外植体,以MS为基本培养基,研究2,4-D与NAA浓度配比对愈伤组织诱导、KT与IBA浓度配比对愈伤组织分化、NAA与6-BA浓度配比对试管苗生根的影响。结果表明:愈伤组织诱导的最适培养基为MS+2,4-D 2.0 mg/L+NAA 0.5mg/L;愈伤组织分化的最适培养基为MS+KT 1 mg/L+IBA 0.5 mg/L;生根的最适培养基为MS+6-BA 0.1 mg/L+NAA 0.6 mg/L。     

根癌农杆菌介导的籼稻蜀恢527遗传转化方法的探究

籼稻（Indica rice）组织培养过程中愈伤组织转化率较低,尤其是对优良品种成熟胚愈伤高频再生体系的建立和影响转化的主要因素还缺乏研究。在一定程度上制约着籼稻基因工程的进展。以籼稻品种重穗型恢复系蜀恢527成熟种子为材料,研究了不同温度和光照条件对其成熟胚愈伤诱导及生理状态的影响;并在分化培养基中添加不同的激素和调整激素间浓度配比从而筛选出蜀恢527最佳分化培养基。结果表明：在32℃光照条件下,蜀恢527成熟种子在N6D诱导培养基上诱导愈伤组织效果最佳,继代2次后胚性愈伤质量状态最好。以基本培养基NBS中添加0.02 mg/L NAA+2 mg/L KT+3 mg/L 6 BA+50 mg/L VC+0.5 mg/L IAA为蜀恢527成熟胚遗传转化的最佳分化培养基,分化频率较高,分化率达到36.42%。利用优化的籼稻遗传转化体系,通过根癌农杆菌介导法将水稻转录因子OsbZIP39转入籼稻基因组中,经PCR分子初步检测得到了抗性植株。     

孜然芹下胚轴胚性愈伤组织的诱导及再生植株的研究

以孜然芹下胚轴为外值体,研究了在不同种类和浓度激素处理下产生愈伤组织,经继代增殖成胚性愈伤组织,在分化培养基上,胚性愈伤组织进一步分化,得到了再生植株.结果表明:下胚轴在光照时间16 h/d,MS+2,4-D 0.5 mg/L的愈伤组织诱导启动培养基中,20 d愈伤诱导率达100;,继代培养基为MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 2 mg/L培养基中,增殖率达80;,在MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L培养基中光照16 h/d培养30 d,可见再生植株,再生率为18.75;.     

不同基因型水稻再分化培养的比较研究

采用水稻Ac/Ds插入突变株系及野生水稻种子为外植体,从成熟胚盾片诱导愈伤组织.通过用不同培养基、不同植物生长调节物质浓度配比对愈伤组织进行诱导及再分化试验.结果表明:NMB培养基有利于愈伤组织的诱导;在诱导培养基中添加2,4-D 2 mg/L+6-BA 0.2 mg/L能明显提高出愈率;再分化率最高的培养基配方为NMB+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L,野生型和含Ac/Ds的突变体的种子表现一致.     

川芎快繁体系的建立及愈伤组织诱导影响因子

通过对川芎快繁体系及愈伤组织诱导过程的影响因子进行了研究,结果表明:川芎组织培养最佳的取材季节为春季的4月份,最佳的外植体为茎节;NAA诱导愈伤组织的效果优于2,4-D;茎节愈伤组织诱导和分化的主要影响因子分别是蔗糖和6-BA;愈伤组织诱导的最佳培养基为:MS +NAA1.5 mg/L +6-BA0.5 mg/L+蔗糖40 g/L;愈伤组织分化的最佳培养基为MS+ 6-BA2.0mg/L+ NAA0.2 mg/L+蔗糖20 g/L;碳源中蔗糖的效果优于葡萄糖;对茎节愈伤组织诱导和分化具有促进作用的最佳有机附加物质是浓度为450 mg/L的CH;生根的最佳培养基为1/2 MS+ NAA0.5 mg/L+蔗糖30g/L.     

甜荞高效离体再生与GUS基因瞬时表达分析

以晋荞1号叶片为外植体,研究了不同类型(2,4-D,6-BA和NAA)及不同剂量的生长调节剂对愈伤组织诱导、幼苗分化及植株再生的影响;利用Ca MV35S启动子驱动GUS基因PBI121质粒转化EHA105农杆菌侵染愈伤组织,进行GUS染色鉴定。结果表明,愈伤组织诱导培养基中加入3.0 mg/L 2,4-D和1.0 mg/L 6-BA诱导愈伤组织的效果最好,出愈率达到69.5%;再分化培养基中加入1.0 mg/L的6-BA和1.0 mg/L的NAA分化率最高(47.0%);农杆菌侵染愈伤组织经过GUS染色鉴定证明为阳性。晋荞1号高效离体再生体系的建立为下一步转基因选育优良品种提供了理论依据和技术指导。     

农杆菌介导的籼型水稻恢复系R752成熟胚转基因技术体系的优化

采用农杆菌介导法,对籼型晚稻恢复系R752成熟胚的遗传转化体系进行了优化。结果表明:在MSS培养基上的愈伤诱导率要高于在CCS培养基上的;碳源麦芽糖对提高胚性愈伤诱导率的效果优于蔗糖的;在4种诱导培养基(MSM、MSS、CCM、CCS)与2种分化培养基(MSB、MSK)的8种组合中,以MSM-MSB组合获得的绿苗分化率最高,达28.97%;不同激素对绿苗分化率的影响大小表现为NAAKT6-BA,分化培养基的最佳激素配比为2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+1 mg/L KT;3种农杆菌菌株的侵染效率表现为EHA105LBA4404GV3101。最终建立了R752的高效转基因技术体系,其平均转化效率达到10.98%。     

农杆菌介导的籼型水稻恢复系R752成熟胚转基因技术体系的优化

采用农杆菌介导法,对籼型晚稻恢复系R752成熟胚的遗传转化体系进行了优化。结果表明:在MSS培养基上的愈伤诱导率要高于在CCS培养基上的;碳源麦芽糖对提高胚性愈伤诱导率的效果优于蔗糖的;在4种诱导培养基(MSM、MSS、CCM、CCS)与2种分化培养基(MSB、MSK)的8种组合中,以MSM-MSB组合获得的绿苗分化率最高,达28.97%;不同激素对绿苗分化率的影响大小表现为NAA>KT>6-BA,分化培养基的最佳激素配比为2 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+1 mg/L KT;3种农杆菌菌株的侵染效率表现为EHA105>LBA4404>GV3101。最终建立了R752的高效转基因技术体系,其平均转化效率达到10.98%。     

提高根癌农杆菌介导水稻遗传转化频率的研究

以15个籼、粳稻栽培品种作材料,研究了农杆菌转化水稻幼胚愈伤组织频率的一些影响因素。结果表明:NB培养基适用于各种基因型的水稻幼胚培养,愈伤组织与农杆菌共培养时间以3d为宜,而CCS培养基则适合于水稻转化愈伤组织的筛选培养。用羧苄青霉素抑制农杆菌效果优于头孢霉素,其适宜浓度为250～400mg/L,而潮霉素的筛选压以25～50mg/L较为合适。此研究通过优化各种转化因子,已从供试的15个品种中获得了14个品种的水稻转基因植株。     

杂交构树体细胞胚诱导研究

以杂交构树叶片为材料,建立通过愈伤组织制备体细胞胚的技术途径。结果表明,光照强度750 lx、构树幼叶面积4~5 cm~2有利于诱导愈伤组织。最佳诱导培养基为MS+0.2 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D,pH值6.0,其愈伤组织诱导率达94.6%。构树愈伤组织最佳继代培养基为MS+0.2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L KT,p H值6.2,愈伤组织增殖速度快。选择表面颗粒多、质地松软、浅黄色或白色的愈伤组织进行体细胞胚诱导,最佳诱导培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA,p H值6.4,体细胞胚的发生频率达到96.0%。     

结缕草组织培养及转化因子的初步研究

以破除休眠的结缕草种子为试材，对其愈伤组织的诱导、分化及农杆菌介导转化的关键因子作了探索，结果表明：结缕草种子愈伤组织的诱导以含2，4-D 1mg/L NAA 3mg/L 6-BA0．2mg/L、分化以KT 3mg/L 6-BA 3．5mg/L NAA 0．1mg/L、生根培养以含0．2mg/L NAA的MS培养基效果最佳。通过瞬间表达的研究表明，以继代培养2周的愈伤组织为材料，农杆菌介导感染10min进行转化为佳。