麋鹿产气荚膜梭菌分离鉴定方法的建立与初步应用

探索了产气荚膜梭菌在营养琼脂、甘露醇卵黄琼脂和血琼脂平板上的菌落形态和培养特点,优化了产气荚膜梭菌的分离方法,并对分离菌株进行生化鉴定;在此基础上对北京南海子麋鹿苑和江苏大丰麋鹿国家级自然保护区的麋鹿自然感染情况进行了调查。结果发现,粪样中的产气荚膜梭菌在营养琼脂上生长呈半透明边缘不整的白色菌落,接种甘露醇卵黄琼脂和血琼脂平板,分别出现伴有卵磷脂酶乳光浑浊带的粉红色火山口状菌落和伴有双溶血环的灰绿色勋章样菌落。生化试验结果确认这些分离株均为产气荚膜梭菌。对北京南海子麋鹿苑和江苏大丰麋鹿国家级自然保护区麋鹿粪样检测发现,阳性率分别为13.04%(3/23)和19.51%(8/41)。说明本研究建立的麋鹿产气荚膜梭菌分离鉴定方法简便快速,确实可行;麋鹿产气荚膜梭菌自然感染率较高,应加强麋鹿产气荚膜梭菌病的防控。     

一株鸡大肠杆菌的分离鉴定与耐药性研究

无菌采集病死鸡的肝脏、肾脏、脾脏、肺脏等组织,接种于麦康凯平板和普通琼脂,进行细菌分离与培养,并对分离菌进行生化试验和16s rDNA基因序列分析,同时用14种抗菌药物对分离菌株进行药敏试验。结果显示,分离菌在麦康凯平板上呈红色圆形菌落;镜检结果为革兰氏阴性杆菌;分离菌株能够发酵葡萄糖、棉籽糖、乳糖、木糖等糖类并产酸产气,鸟氨酸及赖氨酸试验阳性,苯丙氨酸脱氨酶及硫化氢阴性,符合大肠杆菌的生化特性;16s rDNA基因序列测定结果显示分离菌株为大肠杆菌;分离菌株对菌必治、美洛西林、恩诺沙星、诺氟沙星的敏感率较高,而对萘啶酸、青霉素等耐药。本研究为鸡大肠杆菌的诊断和防治提供了依据。     

邻菲咯啉浓度对瘤胃微生物体外发酵的影响

邻菲咯啉是一种二肽酶抑制剂。本试验用体外法测定了不同浓度邻菲咯啉对瘤胃微生物发酵产气量、氨氮浓度、真蛋白含量及饲料干物质降解率的影响。结果表明 ,邻菲咯啉浓度与产气量呈直线负相关(Y=-16.75X +29.52 ,r=0.7976,P<0.05);与发酵液氨氮浓度呈直线负相关(Y= -0.5757X +3.3036,r=0.8384,P<0.05) ;与发酵管内容物真蛋白含量呈直线正相关(Y=1.35X +11.45,r=0.8423,P<0.05) ;与内容物饲料干物质降解率呈直线负相关(Y= -10.14X +55.08,r=0.9275,P<0.01)。     

家兔产气荚膜梭菌的分离、鉴定及致病性分析

为对疑似家兔产气荚膜梭菌病感染死亡的肉兔病例进行病原菌的分离鉴定,并分析其对家兔的致病性,试验采集死亡病例的肠道内容物,划线接种于兔鲜血平板和TSC选择鉴别培养基中,对病原菌进行分离纯化,利用细菌16SrDNA通用引物进行分子鉴定,分析其同源性,构建系统进化发育树,同时,对病原菌进行生化鉴定,并将病原菌腹腔接种30日龄肉兔,分析其致病性。结果表明,从病料中分离纯化到1株革兰氏阳性菌;通过对细菌16S rDNA基因测序分析及生化鉴定确定为产气荚膜梭菌,且在系统进化树中也与其聚为一簇;致病性分析发现,该菌对家兔具有较强的致死性,可使试验组肉兔在攻毒16h后全部死亡。综上所述,本研究成功获得1株具有较强毒性的兔源产气荚膜梭菌,为产气荚膜梭菌致病机制的研究奠定了基础,同时也为疫病诊断和防控提供了理论依据。     

体外产气法评定不同蛋白饲料原料间的组合效应

本试验旨在应用体外产气法探究相同精粗比（C:R）下棉籽粕、菜籽粕及大豆粕等不同植物蛋白饲料原料间的组合效应，以期更大程度地利用杂粕，减少大豆粕的用量。本试验按C:R=60:40配制7种不同组合的饲粮，各组合精料均为玉米:麸皮:蛋白饲料原料组合:预混料=60:15:15:10，其中蛋白饲料原料组合分别为单一大豆粕、单一棉籽粕、1/2棉籽粕+1/2菜籽粕、1/2棉籽粕+1/2玉米酒精糟（DDGS）、1/3棉籽粕+1/3菜籽粕+1/3DDGS、1/3大豆粕+1/3棉籽粕+1/3菜籽粕、1/4大豆粕+1/4棉籽粕+1/4菜籽粕+1/4DDGS；粗料组合均为苜蓿:全株青贮玉米=10:30。通过Menke体外产气法测定其0、2、4、8、12、16、24、32、40、48、56、64 h及72 h的产气量、产气速度和24 h发酵液pH、氨态氮（NH3-N）浓度及微生物蛋白（MCP）产量。结果表明：棉籽粕+菜籽粕+DDGS组72 h时的产气量、产气速度均为各组最高（P <0.05），大豆粕+棉籽粕+菜籽粕组最低（P <0.05）;pH和NH3-N浓度最高的饲粮组合分别为单一大豆粕组和棉籽粕...     

不同酶制剂组合对水稻秸秆青贮品质和体外瘤胃发酵特性的影响

本试验旨在探究不同酶制剂组合对水稻秸秆青贮品质和体外瘤胃发酵特性的影响。试验以水稻秸秆为青贮原料，添加不同酶制剂组合，共设4个组：对照组（CK组，不添加任何酶制剂）、C组（添加1.0 g/kg纤维素酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶复合酶制剂）、PL组（添加0.5 g/kg果胶酶+1.0 g/kg漆酶）、CPL组（添加1.0 g/kg纤维素酶、木聚糖酶、β-葡聚糖酶复合酶制剂+0.5 g/kg果胶酶+1.0 g/kg漆酶），每组5个重复。青贮60 d后开包取样，分析其青贮品质和体外瘤胃发酵特性。结果表明：1）水稻秸秆青贮后，PL组的干物质含量显著高于CK、C、CPL组（P<0.05）;CPL组的粗脂肪含量、相对饲用价值、总可消化养分显著高于CK组（P<0.05），中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量显著低于CK组（P<0.05）。2）体外发酵24 h后，C、PL、CPL组24 h累积产气量、慢速降解部分产气量和潜在产气量显著高于CK组（P<0.05），快速部分产气量显著低于CK组（P<0.05）;PL、CPL组的慢速降解部分的产气速率显著高于CK、C组（P<0.0...     

一株番鸭源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定

为了对疑似禽霍乱病死番鸭进行病原诊断,为该病的诊断和防治提供参考依据,取病死番鸭的肝脏接种于血琼脂平板进行分离培养,挑取单个菌落染色镜检并进行生化试验,然后提取核酸,进行16S rRNA和荚膜血清型特异性基因的PCR扩增和测序分析。结果表明:从病死番鸭的肝脏中成功分离到一株革兰阴性且两极浓染的短杆菌,在血琼脂平板上长出灰白色、圆形、光滑、湿润、不透明的露滴样菌落;该菌分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖,只产酸不产气,不分解乳糖和鼠李糖,吲哚试验阳性,甲基红试验和V-P试验阴性;16S rRNA的测序结果经BLAST比对分析发现,其与多杀性巴氏杆菌同源性达100%,荚膜血清型的PCR鉴定结果为A型。说明病死番鸭为荚膜血清A型的多杀性巴氏杆菌感染。     

微生物制剂和糖蜜对木薯渣营养价值的影响

为合理利用广西当地工业副产品木薯渣和糖蜜,试验以木薯渣为原料,观察微生物制剂和糖蜜添加水平及发酵时间对木薯渣营养成分的影响,结果显示,从慢速产气部分(b)来看,较佳组合出现在10 mL+10 g(74.6 mL)发酵3 d后、10mL+20 g(75.88 mL)发酵3 d后和20 mL+40 g(73.17 mL)发酵2 d后;从可消化有机物含量(DOM)来看,最高组出现在20 mL+40 g(877.31 g/kg)发酵3 d后.从不同发酵时间的体外累积产气量来看,发酵1 d后,各组的产气曲线重叠,即各组样品的可消化性相似,发酵2 d后,除了10mL+10 g和40 mL+20 g组合在体外产气的前48 h累积产气量较低外,其余各组差异不明显,发酵3 d后20 mL+40 g组的产气速率最大.结果表明:以20 mL+40 g组在发酵2或3 d后较优.     

几种分离产气荚膜梭菌培养基的比较

产气荚膜梭菌又名魏氏梭菌,是广泛分布于自然界中的一种条件致病菌,也是动物肠道正常菌群的成员之一,它既可引起多种畜禽疾病如鸡坏死性肠炎、兔出血性下痢、羔羊痢疾、仔猪红痢、羊肠毒血症等,也能导致人的创伤性气性坏疽和食物中毒等.资料[1～3]表明,近年来在我国流行的家畜猝死症多与产气荚膜梭菌感染有关.在实验室中分离产气荚膜梭菌常用的培养基有1%葡萄糖鲜血琼脂平板(简称1%葡萄糖血平板)、亚硫酸盐多粘菌素磺胺嘧啶琼脂平板(SPS平板)、胰蛋白胨亚硫酸盐环丝氨酸琼脂平板(TSC平板)及卡那霉素加卵黄CW琼脂平板(CW平板)等,但对上述4种培养基分离效果的比较,尚未见资料报道.本文试图对上述4种培养基进行产气荚膜梭菌分离效果的比较,以筛选出最佳分离培养基.     

羊源A型产气荚膜梭菌的分离鉴定与进化树分析

无菌采取内蒙古通辽市某羊场病死羊肠道内容物、肝脏和肺脏,进行细菌的分离培养。将从十二指肠内分离到的1株疑似致病菌株进行生化试验、小鼠致病性试验,再将其通过魏氏梭菌多重PCR试验、魏氏梭菌ELISA试验及16S rRNA PCR试验进行鉴定。将PCR产物进行测序并进行了16S rRNA基因的进化树分析。结果显示,经细菌生化试验、多重PCR试验、ELISA试验和16S rRNA试验均证实此分离株为A型产气荚膜梭菌;进化树分析显示该菌与序列号为HQ808749.1(美国)的A型产气荚膜梭菌遗传距离最近。结果表明,该羊病例所分离的致病菌为A型产气荚膜梭菌。     

A型产气荚膜梭菌致奶牛腹泻的诊断与防制

20 0 1年 8～ 9月 ,江苏某奶牛场奶牛陆续发生腹泻 ,采用氟哌酸治疗一段时间之后 ,收效甚微 ,因而怀疑为由产气荚膜梭菌所致的腹泻 ,遂对其进行了实验室诊断和药敏试验 ,并采取了相应的措施 ,取得了较好的效果。现将内容报告如下。1　病料采集与细菌分离从发病奶牛群中随机采集病牛新鲜排粪 1 2份 ,用灭菌生理盐水做 1∶ 1稀释后 ,用酪蛋白 -硫酸亚铁 -环丝氨酸琼脂 ( TSC,购自德国 Merck公司 )平板划线分离 ,置厌氧培养罐 (购自 Merck公司 ) 37℃培养 2 4 h,TSC琼脂平板上长出多量疑似菌落 ,菌落形态为圆形、突起、边缘整齐、表面湿润…     

几种中草药提取物对感染产气梭菌肉鸡生长性、血液生化指标及肠道组织学的影响

本试验将560只Ross 308肉鸡随机分为7组,每组8个重复,每个重复10只鸡。各组日粮处理如下:对照组饲喂基础日粮,未感染产气梭菌,T1组感染产气梭菌,T2组感染产气梭菌+0.2 g/kg阿维霉素,T3组感染产气梭菌+0.40 g/kg百里香酚,T4组感染产气梭菌+0.2 g/kg血根碱,T5组感染产气梭菌+0.5 g/kg香芹酚、肉桂醛和辣椒素混合物,T6组感染产气梭菌+0.2 g/kg百里香酚和茴香混合物。结果显示:T2组第3周料重比显著高于对照组(P<0.05)。T1组屠宰率显著下降(P<0.05),小肠重量显著增加(P<0.05)。第4周时,T6组血液总蛋白和球蛋白含量显著升高(P<0.05),T5组肝脏谷丙转氨酶活力显著升高(P<0.05)。T5和T6组硫代巴比妥酸反应物含量均显著升高(P<0.05)。同样,T5和T6组绒毛高度和隐窝深度也显著增加(P<0.05)。综上所述,与抗生素相比,肉鸡日粮添加中草药制剂在维持产气荚膜梭菌感染肉鸡生长性能和血液生化特性方面具有应用的优势。     

商品肉鸡梭菌性肠炎的试验诊断

为了对商品肉鸡梭菌性肠炎的发病情况进行调查,本试验对收集的不同养殖模式的具有肠炎症状的肉鸡肠道内容物进行了产气荚膜梭菌的分离鉴定、活菌计数、菌株毒素类型鉴定以及动物试验,并对其中的43株分离株进行了药敏试验,同时也对不同宿主来源的14株产气荚膜梭菌进行了16S rRNA基因的同源性分析。结果显示,患病鸡肠道分离到的产气荚膜梭菌均为A型且肠道内容物活菌数量达10~6CFU/g以上;动物试验结果显示,攻毒菌液上清的小鼠在观察期内死亡并表现出明显的坏死性肠炎症状;药敏试验结果表明,不同来源菌株耐药性存在差异;同源性分析发现,不同宿主来源的14株产气荚膜梭菌无明显宿主特异性。本试验结果可为临床肉鸡梭菌性肠炎的了解及防治提供一定的参考价值。     

产气荚膜梭菌cpe~+菌株的筛选与鉴定

参考相关资料,针对产气荚膜梭菌肠毒素基因(cpe)设计合成1对特异性引物,对34株贵州分离株进行PCR扩增,并将扩增产物连接到pMD18-T载体,转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,提取质粒进行PCR和双酶切鉴定后测序和分析。结果在34株产气荚膜梭菌贵州分离株中有1株C型菌株扩增出与预期大小相一致的目的片段,经克隆测序后,该片段大小为233 bp,其与产气荚膜梭菌参考株肠毒素基因序列的核苷酸同源性为99.6%~100%,推导氨基酸同源性为98.7%~100%,表明所扩增产物为产气荚膜梭菌的肠毒素基因片段。本试验筛选鉴定出1株产气荚膜梭菌cpe+菌株,为今后进一步探讨产气荚膜梭菌性食物中毒机制奠定了基础。     

蛋氨酸羟基类似物和有机酸化剂对主要肠道病原菌体外抑菌效果的比较

本文旨在采用平板法和试管法测定蛋氨酸羟基类似物(HMTBA)体外抑菌效果,并与常见有机酸,如乳酸(LA)、甲酸(FA)以及二甲酸钾(KDF)进行比较.试验结果表明,HMTBA对鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、产气荚膜梭菌和空肠弯曲菌的抑菌效果与等摩尔甲酸、二甲酸钾相当,优于等摩尔乳酸.     

E型产气荚膜梭菌的外毒素致病性及其类毒素疫苗免疫效果

检测E型产气荚膜梭菌外毒素对小鼠的半数致死量(LD_(50))以及肠道和肝脏的病理变化。结果显示,E型产气荚膜梭菌外毒素对小鼠的LD_(50)为56.8mg/L,并可对小鼠的肠道、肝脏造成严重的损害。同时本试验制备了针对该毒素的氢氧化铝胶类毒素疫苗,并肌肉接种小鼠21d后,采用血常规检查、流式细胞术和间接ELISA方法检测了小鼠外周血的白细胞、淋巴细胞数目、淋巴细胞比例、T淋巴细胞亚群比例与抗体滴度。结果显示,试验组的白细胞数目显著高于对照组白细胞数目(P0.05),另外淋巴细胞数目、淋巴细胞比例、T淋巴细胞亚群的CD3~+细胞百分数、CD4~+细胞百分数、CD8~+细胞百分数、CD4~+/CD8~+细胞在试验组和对照组之间无显著差异(P0.05)。然而,除CD8~+细胞外,试验组淋巴细胞数目、淋巴细胞比例、CD3~+细胞百分数、CD4~+细胞百分数、CD4~+/CD8~+细胞的均值皆高于对照组,且抗体滴度为1∶(1 510±129)。在免疫接种21d后,进行小鼠的攻毒试验,结果表明,该疫苗可以较好的保护试验组小鼠(n=5)。为深入认识E型产气荚膜梭菌外毒素的致病机制并探究预防该菌外毒素所导致的幼畜疾病提供了依据。     

番鸭巴氏杆菌的分离鉴定及体外抑菌实验

为了对番鸭巴氏杆菌病的防治提供科学方法,对疑似番鸭巴氏杆菌病例进行细菌分离鉴定及体外抑菌试验。从病变部位划线接种血平板进行细菌分离培养;用微量生化法结合分子生物法对分离菌进行种属鉴定;用纸片扩散法和牛津杯扩散法检测分离菌抑菌活性;用腹腔注射分离菌来复制病例。结果:获得菌株Y-X-1、Y-X-2、Y-G-1、Y-G-2,在血平板上半透明、不溶血;对蔗糖产酸不产气,对乳糖不产酸也不产气;于1800bp处出现分离菌PCR电泳条带,分离菌16S rRNA基因序列与多杀性巴氏杆菌高度吻合,Y-G-1与MG597107.1菌株,Y-X-1与KX579748.1菌株的亲缘关系最近,进化树上处于同一分支;头孢曲松高度抑制分离菌生长,青霉素不影响分离菌生长;鸡唾液乳酸杆菌、猪小肠乳酸杆菌对分离菌均表现较强的抑菌性能;复制病例的试验动物,均死于攻菌后的12h之内,死亡动物呈现典型症状。结论:Y-X-1、Y-X-2、YG-1、Y-G-2为多杀性巴氏杆菌,该病例确诊为番鸭巴氏杆菌病。该病防治首选抗生素为头孢曲松,头孢曲松结合乳酸杆菌治疗效果更好。     

溴氯甲烷与尿素对奶牛瘤胃微生物体外发酵特性的影响

本试验以尿素和溴氯甲烷(Bromochloromethane,BCM)作为两个试验因子,采用2×2因子试验设计,应用体外发酵法,模拟瘤胃内发酵过程,探究尿素和BCM对奶牛瘤胃液体外发酵的影响。试验分为对照组,尿素组,对照+BCM组,尿素+BCM组,其中尿素组中尿素代替培养基中所有含氮物质作为唯一氮源,BCM组添加BCM处理。结果表明:(1)尿素显著降低了发酵各时间点产气量、初期产气速率、甲烷产量、乙酸、丙酸、丁酸、总挥发性脂肪酸以及MCP含量(P0.05);显著增加了发酵产气速率、达1/2理论最大产气量时间、乙丙比、NH3-N(P0.05)。(2)BCM能有效抑制甲烷产生,降低了48 h发酵产气量(P0.05),显著影响初期产气速率(P0.05);降低乙酸,丁酸,总挥发性脂肪酸含量以及乙丙比(P0.05),显著提高了丙酸含量(P0.05);对NH3-N及MCP含量没有显著影响(P0.05)。(3)交互作用对发酵影响不显著;但显著影响理论最大产气量、发酵产气速率和初期产气速率(P0.05)。     

C型产气荚膜梭菌病单价和二价混合灭活苗与三价灭活苗免疫效力比较

为了比较C型产气荚膜梭菌病单价和二价混合灭活苗与三价灭活苗的免疫效力,试验制备了单价和二价混合灭活苗与三价灭活苗,并接种奶牛及ICR小鼠,分别进行静脉采血,观察抗血清中和C型产气荚膜梭菌强毒株C59-2毒素粗提物的情况.结果表明:制备的抗血清可以中和C型产气荚膜梭菌强毒株C59-2的剂量为1LD100,ICR小鼠血清毒...     

牦牛源A型产气荚膜梭菌的分离鉴定及生物学特性研究

【目的】2023年4月至2023年5月，西藏拉萨市多地出现牦牛严重腹泻、便血甚至死亡的现象。试验旨在确定牦牛腹泻的病原菌并研究其生物学特性，以期为该地区牦牛腹泻病的防治提供参考。【方法】采集新鲜牦牛腹泻粪便样品进行厌氧培养，通过培养特性及染色镜检进行初步鉴定；对可疑阳性菌株进行生化特性、多重PCR毒素基因分型及cpe、netB、cpb2毒素鉴定，并进行cpa、cpb2、16S rRNA基因的遗传进化分析、部分分离株生长曲线测定及动物致病性试验；采用K-B法测定分离株的体外药物敏感性，统计不同分离株的多重耐药结果。【结果】从样品中分离纯化得到8株分离菌，在厌氧培养基中生长旺盛，在TSC培养基、5%脱纤维绵羊血平板、卵黄琼脂培养基上均呈现与产气荚膜梭菌相似的典型菌落，革兰染色为紫色大杆菌，初步判定为产气荚膜梭菌，命名为XZ-1～XZ-8。分离株生化检测结果与产气荚膜梭菌相符；分离株均携带cpa和cpb2基因，为A型产气荚膜梭菌；16S rRNA基因分析结果显示，8株分离株与产气荚膜梭菌参考株的相似性为97.3%～100%,在系统进化树中处于同一分支，而与屎肠球菌、大肠杆菌参考株处于不同分支...