存在于奶牛Ig重链和多种动物Ig分子的两种相同抗原结合位点…

在应用ＥＬＩＳＡ鉴定７株抗奶牛ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＧ１,ＩｇＧ２和Ｉｇ－轻链的单克隆抗体反应性中发现这些ｍＡｂ均是特异地与相应Ｉｇ分子中的轻链或重链的抗原决定簇结合,用夹心法和抑制法均证明了这点。     

兔出血症病毒单克隆抗体的抗原识别位点分析

通过ＥＬＩＳＡ迭加试验对５株抗兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的抗原表位进行了分析。抗体反应增值结果表明，６株单抗分别针对３类不同的抗原决定簇。ＣＧ４－１、ＣＨ３－１和ＡＡ８－１针对病毒结构多肽上的同一决定簇，ＣＦ２－１和ＲＭ－１７针对另一决定族，而ＲＭ－１４针对第３种决定簇；其识别表位可能与ＡＡ８－１非常接近。单抗的识别表位与其生物学活性密切相关。     

副结核分枝杆菌McAb的某些特性鉴定

以超声波粉碎的副结核分枝杆菌地方株Ｃ２抗原免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，经与ＮＳ－１骨髓瘤细胞三次融合，获得了３株能稳定分泌抗副结核分枝ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系，其染色体数目为７８－１１０条，分别为ＩｇＭ和ＩｇＧ２。应用间接ＥＬＩＳＡ法测定细胞培养液，腹水和血清效价为１０＾－２～１０＾－７。交叉试验证明，ＭｃＡｂＯ１与受试的各株副结核分枝杆菌反应强烈，与牛分枝杆菌和草分枝杆菌有微弱特异性抗原之一。ＳＤＳ－Ｐ     

嗜水气单胞菌HEC毒素单克隆抗独特型抗体研究

用嗜水气单胞菌ＨＥＣ毒素免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，通过一次性杂交瘤融合，在筛选ＨＥＣ毒素单克隆抗体（ＭｃＡｂ１）的同时，用兔抗ＨＥＣ毒素血清（ＰＡｂ）包板的ＥＬＩＳＡ方法，筛选到两株抗ＨＥＣ毒素的单克隆抗独特型抗体（ＭｃＡｂ２）。两株ＭｃＡｂ２腹水ＥＬＩＳＡ效价分别为１：２０４８０和１：５１２０，属于ＩｇＧ１亚类。ＨＥＣ毒素的模拟抗原ＭｃＡｂ２不能溶解人的Ｏ型红细胞，但能与相应的ＰＡｂ反应，并能阻断ＰＡｂ与ＨＥＣ毒素的结合。将ＭｃＡｂ２连接到同源小鼠红细胞（ＭＲＢＣ）后免疫小鼠，用ＨＥＣ毒素包板的ＥＬＩＳＡ检测其血清，呈阳性结果，说明ＭｃＡｂ２能模拟ＨＥＣ刺激机体产生抗ＨＥＣ毒素的抗体（Ａｂ３）。     

分泌抗BVDV McAb杂交瘤细胞株的建立

用牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）感染ＭＤＢＫ细胞,将感染细胞培养物冻融后离心取上汪经ＰＥＧ沉淀浓缩抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,取血清抗体效价高遥免疫鼠的脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞在ＰＥＧ作用下融合,产生杂交瘤细胞,用间接ＥＬＩＳＡ法检测杂交瘤细胞生长孔上清,筛选阳性杂交瘤细胞株。以有限稀法克隆２－３次,得到８ 泌抗ＢＶＤＶ的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株。８株ＭｃＡｂ对ＢＶＤＶ,猪瘟均呈阳性反应。杂交     

鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的研制与鉴定

用经蔗糖密度梯度离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ，Ｍ４１）作为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过常规淋巴细胞发校瘤技术产生杂交瘤细胞，经ＥＬＩＳＡ筛选，获得了４株能分泌特异性抗ＩＢＶ单克隆抗体的细胞系，分别命名为４ＡＣ、４ＡＦ１、６ＤＨ及２ＤＨ１０。４株单抗的亚类都属于ＩｇＧ２ｂ，在Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ试验中，４ＡＦ１、６ＤＨ６２株单抗牧场卉性地识别ＩＢＶ的核衣壳蛋白（Ｎ）；经ＥＬＩ     

蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制

用蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）提纯病毒粒子免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,用纯化的ＢＢＷＶ病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有限稀释法克隆,成功获得２株ＢＢ－ＷＶ特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为４Ｄ１１,３Ｇ１２．２株单抗腹水间接ＥＬＩＳＡ效价高达１∶６４００００,抗体类型均为ＩｇＧ１,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ分析表明,２株单抗均是针对ＢＢＷＶ４４．７ｋＤ的外壳蛋白大亚基的特异性抗体．单抗抗原结合位点分析表明４Ｄ１１和３Ｇ１２两单抗作用于同一抗原决定簇     

法氏囊三肽囊素(Bursin)的研究Ⅰ.抗 Bursin 单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

以戊二醛法制备ＢｕｒｓｉｎＫＬＨ，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞，以ＰＥＧ为融合剂，与ＳＰ２融合，用间接ＥＬＩＳＡ法筛选出与Ｂｕｒｓｉｎ－ＢＳＡ结合、不与ＢＳＡ结合的２Ｆ９－４克隆株，经鉴定，抗体属性为ＩｇＭ，Ｋ轻链。水溶性Ｂｕｒｓｉｎ可阻抑２Ｆ９－４对鸡法氏囊的反应，切片标本经ＰＢＳ处理，反应性消失，免疫组织化学染色于法氏囊上获得特征性阳性结果。     

法氏囊三肽囊素的研究：Ⅰ.抗Bursin单克隆抗体杂瘤细胞株的建立

以戊二醛法制备Ｂｕｒｓｉｎ－ＫＬＨ，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞，以ＰＥＧ为融合剂，与ＳＰ２融合，用间接ＥＬＩＳＡ法筛选出与Ｂｕｓｉｎ－ＢＳＡ结合，不与ＢＳＡ结合的２Ｆ９－４克隆株克隆株，经鉴定，抗体属性为ＩｇＭ，Ｋ轻链。水溶性Ｂｕｒｓｉｎ可阻性２Ｆ９－４对鸡法氏囊的反应，切片标本经ＰＢＳ处理，反应性消失，免疫组织化学染色于法氏囊上获得特征阳性结果。     

家兔免疫伊氏锥虫弱毒疫苗后的T细胞,IgG和IgM动态变化

分别以3Ｈ—ＴｄＲ掺入的淋巴细胞转化反应和ＢＡ—ＥＬＩＳＡ方法检测家兔免疫后及攻虫后Ｔ细胞及特异性抗体ＩｇＧ和ＩｇＭ的动态变化。发现免疫后家兔外周血Ｔ淋巴细胞增殖反应于２４ｄ达到高峰,第３１天开始迅速降低。攻虫后特异性Ｔ细胞增殖反应强度未见升高,而特异性抗体Ｉｇｈ、ＩｇＭ均于第２１天达到高峰,攻虫后ＩｇＧ、ＩｇＭ分别在第６天和第９天又达到高峰。结果表明,在这种抗锥虫免疫中Ｔ细胞没有起主导作用,而特异性抗体ＩｇＧ和ＩｇＭ起主导作用。     

鸡群类甲,乙,丙型肝炎病毒感染的血清流行病学调查

从河南部分地区收集鸡血清３１２份，用ＥＬＩＳＡ法分别检测：（１）抗甲型肝炎病毒抗体－ＩｇＭ（ＨＡＶＩｇＭ）；（２）乙型肝炎病毒“两对半”；（３）抗丙型肝炎病毒抗体。其结果３１２份鸡血清抗ＨＡＶＩｇＭ和抗ＨＣＶＡｂ全部阴性。乙肝病毒“两对半”血清阳性数分别为：ＨＢｓＡｇ１８份，抗－ＨＢｓ１６份，ＨＢｅＡｇ１４份，抗－ＨＢｅ２份；抗－ＨＢｃ零份。     

抗鸡IgC单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

利用纯化鸡血清ＩｇＣ免疫的Ｂａｌｂ／ｃ小鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞进行融合，用ＥＬＩＳＡ间接法和夹心法作阳性抗体检测，经有限稀释法克隆，结果筛选出１株可持续分泌抗鸡ＩｇＣ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株３Ｅ３，其培养上清和诱生Ｂｌａｂ／ｃ小鼠腹水的ＭｃＡｂ效价分别为１：４×１０＾２－１．２８×１０＾４和１：８×１０＾５－１×１０＾１０，经染色体分析可见到两种形态的染色体，该细胞株经体连续     

鸡传染性支气管炎病毒单克隆抗体的研制与鉴定

用经蔗糖密度梯度离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ，Ｍ４１）作为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过常规淋巴细胞杂交瘤技术产生杂交瘤细胞，经ＥＬＩＳＡ筛选，获得了４株能分泌特异性抗ＩＢＶ单克隆抗体的细胞系，分别命名为４ＡＣ１、４ＡＦ１、６ＤＨ８及２ＤＨ１０。４株单抗的亚类都属于ＩｇＧ２ｂ，在Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ试验中，４ＡＦ１、６ＤＨ８２株单抗特异性地识别ＩＢＶ的核衣壳蛋白（Ｎ）；经ＥＬＩＳＡ测定，各株单抗４０ｈ培养上清效价达１０－２～１０－４，第７天腹水效价达１０－５～１０－６，４ＡＦ１、６ＤＨ８与所试７个ＩＢＶ标准株及２个ＩＢＶ分离株都发生反应     

鸡T细胞特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

以鸡胸腺细胞免疫ＢＬＡＢ／ｃ小鼠,进行细胞融合,获得了１５株杂交瘤克隆株,其中有５株（１Ｂ６、１Ｃ５、３Ｅ４、９Ｈ６、５Ｅ１０）杂交瘤克隆抗体（ＭｃＡｂｓ）只对鸡胸腺细胞和外周血Ｔ细胞发生特异性反应。ＷｃｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析表明,这组ＭｃＡｂｓ反应的膜抗原分子量为６０～６５ＫＤ,该抗原分布于６３３～７２４％的胸腺细胞、１７３％～２４５％的脾细胞,２３％～２７％的外周血淋巴细胞,而法氏襄细胞的反应性不超过１３％。以此ＭｃＡｂｓ作诊断试剂,对禽类Ｔ细胞分离、纯化及Ｔ细胞亚类鉴定提供了重要的研究手段。     

抗肠结肠炎0∶9型耶尔辛氏菌单克隆抗体及其特性的研究

用耶尔辛氏菌０：９血清型（Ｙ．ｅ．０：９）抗原免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与ＦＯ骨髓瘤细胞进行融合，获得９株分泌特异性抗Ｙ．ｅ．０：９抗体的杂交瘤细胞，命名为Ｙ＿９Ａｂ－ｌ～Ｙ_９Ａｂ－９．其产生的单抗有高度特异性，不仅不与布氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌等反应，也不与其它型（０：４１．４２除外）的肠结肠炎耶尔辛氏菌反应。     

禽大肠杆菌血清型O2,O78融合双价弱毒菌株免疫原性的研究

试验鸡在１０ｄ龄用禽大肠杆菌Ｏ２、Ｏ７８融合双价弱毒菌苗免疫,免疫后１４ｄ对Ｏ２、Ｏ７８强毒株攻击的保护率分别为７３％和８０％,免疫后４２ｄ的保护率分别为６６７％和７３３％,与对照组比较差异极显著（Ｐ＜００１）．采用ＥＬＩＳＡ检测免疫鸡血清抗Ｏ２、Ｏ７８的ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ等类抗体的消长情况,结果显示,血清中各类抗体的ＥＬＩＳＡ总滴度与保护效果呈正相关．其中,ＩｇＭ在免疫后２周内起主要保护作用,ＩｇＧ在２周后起主要保护作用,ＩｇＡ在血清中出现迟缓．     

水稻细菌性条斑病菌单克隆抗体的分类及其单抗血清型研究

用水稻细菌性条斑病菌免疫的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠民鼠骨髓瘤细胞杂交融合，建立了５株分泌抗水稻细菌性条斑病菌的特异性，有鉴别力的杂交瘤细胞株：Ｍ２３、Ｍ６、Ｍ１７、Ｍ２６０、Ｍ２９。这５株单抗分别与来自不同区域的１２８株水稻细菌性条斑病菌进行酶联免疫吸附地试验，结果表明：可将这些菌株识别出５个抗原决定簇，区分出了７个单抗血清型据此我们认为以单抗作为菌分类的依据是可行的。     

夹心ELISA法检测小鼠单克隆抗体试验

本试验用羊抗鼠抗体包被酶标板，建立一种用于多种含鼠抗成分的ＭｃＡｂ的检测方法。用１：１０００（２３．３μｇ／ｍｌ）的羊抗鼠抗体包被４０孔酶标板做夹心ＥＬＩＳＡ试验，检测抗沙门氏菌Ｈ抗原杂交瘤上清，其结果与用抗原包板的间接ＥＬＩＳＡ测得的阳性具有很高的符合率，可用于单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的初步检测。     

单克隆抗体夹心ELISA检测蚕豆萎蔫病毒研究

利用 ２ 株特异性单抗,建立了检测蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）的灵敏度高、特异性好的单抗夹心ＥＬＩＳＡ 方法⒚经测定,ＭｃＡｂ 最适包被浓度为０４ μｇ／ｍ Ｌ,ＨＲＰＭｃＡｂ 最佳工作浓度为１∶２ ０００,该方法最小检出浓度为０１６ μｇ／ｍ Ｌ,与几种常见的病毒无交叉反应⒚对杭州地区的 １４０ 多个样本进行了检测,发现蚕豆、豌豆中ＢＢＷ Ｖ 的阳性率达 ８０％ ⒚     

雏鸡新城疫免疫后体液中Ig含量和HI滴度的动态变化

本研究对健康２周龄雏鸡ＮＤ免疫后血清、泪液、气管液、胆汁、肠液中ＩｇＭ，ＩｇＧ，ＩｇＡ含量和血清、泪液、气管液中ＨＩ抗体滴度进行了检测．结果表明，健康雏鸡１次ＮＤ免疫后其上述指标均升高，２次免疫后进一步升高．说明健康雏鸡ＮＤ免疫后，其全身和呼吸道、消化道局部都呈现明显的体液免疫应答，２次免疫后应答反应增强．