长角血蜱不同龄期虫体抗原分析

用琼脂双向扩散法、酶联免疫吸附技术和蛋白质免疫印迹技术，用长角血蜱三个龄期的虫体蛋白检测其幼虫、若虫和成虫未吸血全蜱匀浆液分别免疫兔后的血清效价。结果表明不同生活阶段的虫体之间存在免疫交叉反应。实验结果表明不仅长角血蜱三个龄期虫体之间存在共同抗原，而且与微小牛蜱幼虫和越南血蜱幼虫之间也存在共同抗原。     

牛血孢子虫单一种的分离技术及其保藏方法的研究——卵形巴贝斯虫的传播试验

将实验室培育的“洁净”长角血蜱的幼虫、若虫、成虫及微小牛蜱的幼虫,先后分别释放到人工感染卵形巴贝斯虫单一种牛体上不同部位事先粘贴好的布袋中,使其自行叮咬吸血。待饱血脱落后亦分别收集,置28℃、相对湿度约90％的条件下蜕皮或产卵孵化。而后用不同世代和各变态期的蜱,分别叮咬感染除脾和非除脾健康易感牛。结果表明,长角血蜱的当代若虫和成虫对卵形巴贝斯虫没有传播能力,幼虫和若虫吸入的病原亦不能经卵传递;饱血雌虫吸入的病原可经卵传递,次代幼虫、若虫和成虫三个阶段都具有传播能力。次代感染幼虫经兔体后的若虫和成虫也具有感染力。 微小牛蜱不能传播该种病原。     

长角血蜱的免疫研究进展

以长角血蜱疫苗候选抗原为例，从长角血蜱蛋白水解酶、蜱生殖和发育相关分子及RNA干扰技术、IgG结合蛋白技术几方面概述了近年来国内外有关蜱疫苗的研究现状，并展望了蜱疫苗的发展趋势。     

牛血孢子虫单一种的分离技术及其保藏方法的研究——卵形巴贝斯虫在我国的发现及分离

本文报道从我国河南省卢氏县混合感染有瑟氏泰勒虫的犊牛体,利用虫种间潜伏期的差异性,分离到一种形态较大的巴贝斯虫。将清洁长角血蜱成虫释放到感染该种的牛体上,雌虫饱血产卵后,用次代幼虫和若虫叮咬健康牛。结果证实,该种可由长角血蜱经卵传递,次代幼虫和若虫均能传播病原,潜伏期皆为8天。虫体形态呈卵形、圆形、出芽形、阿米巴形、单梨子形及双梨子形等,内含1—2个染色质团,核外逸现象较常见,中央往往形成空泡。虫体大小为2.3—3.9×1.1—2.1μm,平均为3.57—1.71μm。根据媒介(?),虫体形态和大小、病原性及感染动物的临床症状和病理变化,该种被鉴定为卵形巴贝斯虫(Babesia ovata Minami and Ishihara,1980)。     

蜱感染后兔体炎性细胞数量的变化

通过应用免疫增强剂或免疫抑制剂改变兔体的非特异性免疫功能，观察长角血蜱幼虫感染后兔体炎性细胞数量的变化，结果发现免疫增强组兔淋巴细胞和嗜中性粒细胞在长角血蜱幼虫感染前和感染后变化不大；免疫抑制组淋巴细胞数量降低，而嗜中性粒细胞数量增加；不用药组幼虫叮咬后相比淋巴细胞数量稍降低，嗜中性粒细胞数量稍增加，嗜酸性粒细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞数量变化不明显。     

蜱感染后兔体炎性细胞数量的变化

通过应用免疫增强剂或免疫抑制剂改变兔体的非特异性免疫功能,观察长角血蜱幼虫感染后兔体炎性细胞数量的变化,结果发现免疫增强组兔淋巴细胞和嗜中性粒细胞在长角血蜱幼虫感染前和感染后变化不大;免疫抑制组淋巴细胞数量降低,而嗜中性粒细胞数量增加;不用药组幼虫叮咬前与叮咬后相比淋巴细胞数量稍降低,嗜中性粒细胞数量稍增加,嗜酸性粒细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞数量变化不明显.     

嗜群血蜱和长角血蜱ITS-2、COⅠ和COⅡ基因序列变异与亲缘关系分析

本研究旨在阐明长角血蜱与嗜群血蜱间的亲缘关系。采用聚合酶链式反应(PCR)技术从长角血蜱和嗜群血蜱基因组DNA中扩增得到核糖体第二内部转录间隔区基因(ITS-2)片段、线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ基因(COⅠ)片段和线粒体细胞色素氧化酶亚基II基因(COⅡ)片段,并进行测序,进而分析其基因变异与系统发育。结果表明,长角血蜱和嗜群血蜱的ITS-2、COⅠ和COⅡ基因片段的大小存在差异,长角血蜱3种基因分别为361、479和647bp,嗜群血蜱基因分别为354、474和661bp。长角血蜱与嗜群血蜱间ITS-2、COⅠ和COⅡ基因的相似性分别为84.2%、89.0%和88.4%。以3种基因构建的NJ进化树中,长角血蜱和嗜群血蜱均聚类。因此,认为长角血蜱和嗜群血蜱间ITS-2、COI和COII基因间变异较小,它们是血蜱属中亲缘关系较近的2个有效种,支持传统形态学的分类地位。     

嗜群血蜱和长角血蜱ITS-2、COI和COⅡ基因序列变异与亲缘关系分析

本研究旨在阐明长角血蜱与嗜群血蜱间的亲缘关系.采用聚合酶链式反应(PCR)技术从长角血蜱和嗜群血蜱基因组DNA中扩增得到核糖体第二内部转录间隔区基因(ITS-2)片段、线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ基因(COI)片段和线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅱ基因(COⅡ)片段,并进行测序,进而分析其基因变异与系统发育.结果表明,长角血蜱和嗜群血蜱的ITS-2、COⅠ和COⅡ基因片段的大小存在差异,长角血蜱3种基因分别为361、479和647 bp,嗜群血蜱基因分别为354、474和661 bp.长角血蜱与嗜群血蜱间ITS-2、COⅠ和COⅡ基因的相似性分别为84.2%、89.0%和88.4%.以3种基因构建的NJ进化树中,长角血蜱和嗜群血蜱均聚类.因此,认为长角血蜱和嗜群血蜱间ITS-2、COⅠ和COⅡ基因间变异较小,它们是血蜱属中亲缘关系较近的2个有效种,支持传统形态学的分类地位.     

长须血蜱和长角血蜱在大熊猫体表发现

1985年春天,我们从四川平武大熊猫自然保护区采集到寄生于大熊猫体表的蜱近百个,经鉴定它们隶属于蜱科(Ixodidae)的2属5种,即:卵形硬蜱Ixodes ovatus、锐跗硬蜱 Ixodes acutitarsus、巨棘血蜱 Haemaphysalis megaspinosa、长须血蜱Haemaphysalis aponommoides和长角血蜱Haemaphysalis longicornis。其中巨棘血蜱为优势种。而长须血蜱和长角血蜱寄生于大熊猫体表,乃属首次发现。本文就这三种蜱的雄虫形态特征作一简单描述。 1.巨棘血蜱Haemaphysalis me gaspinosa 此蜱与褐色血蜱Haemaphysalis flava外观相近,但体带褐色且较深可资区别,雌雄两性的虫体大     

家兔抗长角血蜱免疫模型的建立及对长角血蜱成蜱生长发育的影响

每隔2周用长角血蜱成蜱定量感染家兔,成功构建了具有不同抵抗力的家兔免疫模型。ELISA检测结果表明,家兔血清中的抗体效价从初次叮咬后第3周开始呈阳性,随着叮咬次数的增加抗体水平逐渐上升,第11周时达到高峰。具有一定抵抗力的家兔对长角血蜱成蜱的吸血和生长发育影响显著,其抗体水平与长角血蜱成蜱在兔体的吸血周期、死亡率成正相关,与雌蜱的饱血脱落率、饱血体重成负相关。结果进一步证明,蜱的唾液腺是其主要的免疫器官之一。家兔抗体水平的持续期足以使长角血蜱完成一个世代,可以满足试验需求,是抗蜱免疫研究理想的阳性对照模型。同时,血清中特异性抗体的效价也可以作为判断动物对长角血蜱抵抗力强弱的重要指标之一。     

瑟氏泰勒虫与环形泰勒虫某些特性的比较研究

通过长角血蜱和残缘璃眼蜱的交互传递试验、虫体形态学观察及过氧化物酶等同工酶的分析，对瑟氏泰勒虫及环形泵勒虫作了比较研究。结果表明，长角血蜱只能传播瑟氏泰勒虫而不能传播环形泰勒虫；同样，残缘璃眼蜱只能传环形泰勒虫而不能传播瑟氏泰勒虫。瑟氏泰勒虫以杆形和梨子形为主，其比例一般保持在６７％－９０％之间；而环形泰勒虫则主要以圆形和卵圆形为主，占总数的７０％－８５％。经聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析表明，这两个种     

双芽巴贝斯虫在长角血蜱肠内发育的形态学研究

以耳袋法将长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)幼虫饲于实验感染双芽巴贝斯虫(Babesia bigemina)牛,幼虫饱血后24h内,其肠管内容物中红细胞内、外见有单梨子型(3.5～4.5μm×1.2～2.6μm)和双梨子型(4.1～4.8μm×1.8～3.0μm)两种裂殖体.饱血后24～48h,随着裂殖体细胞膜及核变性而发生形态变化.48～72h,绝大多数裂殖体出现溶解.72h后,这些裂殖体从肠道消失.其后,在蜱肠上皮及血淋巴中也未能找到双芽巴贝斯虫体.本实验从形态学上证明双芽巴贝斯虫在长角血蜱若虫肠道内不能发育.     

甘肃省部分牛羊血液原虫传播媒介的实验研究

利用蜱传播试验,确定了甘肃省一些牛羊血液原虫的媒介和传播方式。甘肃省牛的双芽巴贝斯虫媒介为微小牛蜱。大巴贝斯虫媒介为长角血蜱。瑟氏泰 勒虫媒介为长角血蜱;绵羊无浆体的媒介为草原革蜱。微小牛蜱、长角血蜱可分别传播双芽巴贝斯虫和大巴贝斯虫,传播方式为经卵传递。将采集于甘肃文县牛体上的微小牛蜱和两当县的长角血蜱饱血雌虫孵育而来的次代幼虫分别叮咬除脾牛体后,２头牛各自感染双芽巴贝斯虫或大巴贝斯虫。将采自崇     

实验感染牛末梢红细胞内卵形巴贝西虫裂殖子的形态学观察

以感染有卵形巴贝西虫的长角血蜱幼虫叮咬感染实验除脾牛,对其末梢红细胞内卵形巴贝西虫的裂殖子的形态及感染率进行了观察。裂殖子可分6个类型,除以往报道的单梨子型、双梨子型、分裂型及退行型之外,还观察到了杆菌型及棒型虫体,随感染率的上升,单梨子型和杆菌型增加,随感染率的下降,棒型及退行型增加。据此认为,虫体的形态与发育阶段有关。根据杆菌型、棒型虫体的出现认为,接种卵形巴贝西虫虫血感染与阳性蜱叮咬感染,其卵形巴贝西虫在牛体内的发育并不相同。     

青海血蜱不同发育阶段蛋白分析

考虑到不同发育阶段蛋白多肽及抗原特性方面的差异,本实验利用SDS-PAGE和Westernblotting对青海血蜱的卵、幼蜱、若蜱、成蜱的蛋白进行了分析。SDS-PAGE结果显示,卵出现了7条主带,幼蜱出现了16条主带,若蜱出现了14条主带,成蜱出现了12条主带。它们的蛋白多肽在数量、含量和分子量上存在差异,共同带只有4条,但相邻发育阶段之间的共同带较多。用感染羊血清和免疫羊血清作免疫印迹时,感染羊血清在分子量5.6万处有明显的反应带,免疫羊血清在分子量9.7万处有明显的反应带。     

长角血蜱孤雌生殖与两性生殖种群的CO I基因序列的特征性差异

长角血蜱是我国常见的一种硬蜱,在自然界存在孤雌生殖和两性生殖的种群。本研究通过对分离的长角血蜱孤雌生殖上海株、安徽株和山东株的线粒体细胞氧化酶I（COI）基因部分序列进行了测定,并与国内其他单位所测定的两性或孤雌生殖的多株长角血蜱COI基因序列进行了比对分析。结果发现,长角血蜱孤雌生殖种群与两性生殖种群的COI基因序列存在特征性差异;COI基因序列可应用于长角血蜱的孤雌生殖种群和两性生殖种群的快速鉴定。     

长角血蜱甘肃株肌钙蛋白基因P27/30的克隆和序列分析

参照GenBank中长角血蜱致病性Okayama株肌钙蛋白P27/30基因的核苷酸序列,设计合成一对引物,从本实验室保藏的干净长角血蜱卵中快速提取总RNA,通过RT-PCR扩增出607 bp的肌钙蛋白基因,将其克隆于PGEM-T-Easy载体,对其进行序列分析,并推导出氨基酸序列,将这一序列与国内外已发表的长角血蜱肌钙蛋白基因进行比较分析。结果表明本实验室保藏的长角血蜱甘肃株与上述已发表的Okayama株核苷酸序列同源性为92.1%,氨基酸同源性为86%。长角血蜱甘肃株与Okayama株、四川孤雌生殖株的发育有一定差异。经RT-PCR分析表明,该基因在长角血蜱的卵、幼蜱、若蜱和饥饿成蜱这几个阶段均有表达。     

对彩饰花蜱及具尾扇头蜱自然和人工免疫力的检验

在外界和实验室条件下,对兔、山羊及牛获得彩饰花蝉及具尾扇头蝉的免疫力进行了研究。用未吸血及吸半饱血的具尾扇头蜱雌虫取得的粗制唾液腺提取物(SGE)和中肠提取物(ME),使兔成功地获得了免疫。在用未吸血的ME获得免疫的兔子身上吸食的雌蜱,产生的幼虫最少。用具尾扇头蜱成虫三次感染的兔子,同样可引起雌蜱所产生幼虫数减少。连续的给兔子饲喂具尾扇头蜱的稚虫,引起蜱吸血量的显著减少。用SGE进行皮肤试验,引起迟发型超敏反应,这可能与兔对具尾扇头蜱产生免疫力有关。而且,兔子以具尾扇头蜱的SGE作抗原,用ELISA方法检验出体液抗体。兔通     

不同饲喂方式和温度对长角血蜱甘肃株生物学特性的影响

在不同饲喂方式和温度条件下,观察我国北方长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)甘肃株的生活史及对其生物学特性的影响。将试验蜱分组后置于不同饲喂方式和温度下,待其发育到下一阶段,叮咬实验动物,连续调查其发育阶段的生物学特性。研究发现,完成一个世代需101 d～148 d。成年饥饿雌蜱吸血期具有两个显著特征:缓慢吸血和快速吸血;经兔体叮咬的成年雌蜱其饱血体重小于羊体。不同饲喂条件下长角血蜱饱血体重、产卵量差异极显著(P0.01);在一定温度范围内,幼蜱、若蜱的蜕变时间随温度的升高而缩短;当饱血雌蜱处于发育阶段时,产卵前期、产卵期及卵的孵化期均随着温度的升高而缩短;16℃～30℃条件下长角血蜱产卵量没有变化,利于蜱的存活;4℃以下和45℃以上饱血蜱及其后代不能存活;16℃以下蜱的发育周期延长。结果表明,长角血蜱为三宿主蜱;雄蜱可以帮助雌蜱吸血;在羊体上的吸血能力优于在兔体上的吸血能力;温度对长角血蜱的发育繁殖有影响。     

中国“二棘血蜱”和长角血蜱的生活周期和形态特征比较研究

对采自中国东洋区贵州省、云南省、浙江省、江苏省的“二棘血蜱”和采自中国古北区吉林省、河南省、河北省、辽宁省的长角血蜱的生活周期及其幼虫、若虫和成虫的形态特征作了比较观察。结果,与 Hoogstraal提出的二棘血?的鉴别点相对照,除相当一部分“二棘血蜱”成虫盾板上的刻点比较细这一点符合Hoogtsraal所提出的二棘血蜱的待征外,所观察的“二棘血蜱”的幼虫,若虫和成虫反比长角血蜱大;二者若虫的齿式均为3/3,须肢第3节背后缘中央均无突起,二者成虫的齿式均为5/5,盾板上的刻点均稠密、分布均匀;通过扫描电镜观察,二者哈氏器结构也无明显的区别。因此认为,采自中国东洋区的所谓“二棘血蜱”实际是长角血蜱。然而分布于中国东洋区和古北区的长角血蜱间,形态上存有一定程度变异,具体表现在个体大小、幼虫肩突尖端间距离、若虫和成虫须肢第2节外角的突出程度、成虫盾板上刻点的粗细以及若虫哈氏器远端缝孔的有无等方面。