猪肺炎支原体检测芯片的研制及初步应用

本研究探索建立一种新的基因芯片方法检测和鉴定猪肺炎支原体。在猪肺炎支原体的16SrRNA、P36和P463个基因内设计3个靶基因片段,用PCR标记Cy3探针,建立了用于检测和鉴定猪肺炎支原体的检测芯片。试验结果显示,猪肺炎支原体与检测芯片的3个靶基因（Mhp-16S、Mhp-P46和Mhp-P36）杂交呈阳性,猪鼻支原体只与Mhp-16S靶基因杂交呈阳性,其它所测细菌和病毒不与检测芯片的靶基因杂交。检测芯片的检测灵敏度和PCR相同,能达到10pg基因组DNA／50μL标记体系或反应体系。用检测芯片鉴定了3株疑似猪肺炎支原体临床分离株,结果有2株为猪肺炎支原体,1株为其它猪支原体。用检测芯片、P36-PCR和分离鉴定分别对45头病猪临床样品选择混合培养物中的猪肺炎支原体进行了检测,结果它们的检出率分别为20％（9／45）、22．2％（10／45）和8．9％（4／45）。检测芯片还检出有26．7％（12／45）的病猪感染了其它猪支原体。试验结果表明,所建立的检测芯片是一种快速检测和鉴定猪肺炎支原体的敏感特异性方法。     

猪支原体肺炎活疫苗(168株)的安全性研究

用健康易感仔猪进行同群感染试验和连续五代返强试验对猪肺炎支原体活疫苗(168株)进行安全性试验,同时也进行了该活疫苗单剂量、单剂量重复和大剂量试验及5批次疫苗免疫商品猪的临床试验。结果发现,猪支原体肺炎活疫苗(168株)免疫猪后,免疫猪和同群感染猪均未观察到典型的临床症状和病理变化;连续五代返强试验,试验猪均未观察到典型的临床症状和病理变化,说明该疫苗株未出现返强。单剂量、单剂量重复和大剂量试验及5批次疫苗的临床试验也未观察到不良反应。这说明受试批次猪支原体肺炎活疫苗(168株)具有良好的安全性。     

“猪地方性肺炎及其防治控制”专栏二：有关猪肺炎支原体感染诊断方法和流行病学的最新观点

猪肺炎支原体是猪地方性肺炎（Enzoodc Pneumonia，EP）的主要病原体，本病是一种主要影响肥育猪的慢性呼吸道疾病。尽管人们在控制猪肺炎支原体感染及其带来的不利影响上花费了大量的精力，但是猪地方性肺炎仍继续给全球养猪生产造成重大的经济损失。猪肺炎支原体通常是通过引进亚临床型感染的动物而侵入猪群的，或通过短距离的空气传播发生感染，但后一种情况较少。一旦侵入猪群，猪肺炎支原体可通过与受感染的母猪直接接触而将病原体传给后代或在同圈猪只之间进行传播。用于诊断猪肺炎支原体感染的“黄金标准”技术——细菌学培养非常费劲，通常很少使用。酶联免疫吸附试验和聚合酶链式反应检测方法以及以屠宰场监测或田间剖解为形式的死后检查，是用于调查猪肺炎支原体是否参与了猪呼吸道疾病的最常用技术。这些技术已被用来监测受猪地方性肺炎影响的猪群猪肺炎支原体的临床型和亚临床型感染猪群、免疫猪群或非免疫猪群以及处于不同的生产条件和管理奈件下的猪群的发生情况。猪场水平上的猪地方性肺炎临床过程差异以及猪肺炎支原体疫苗接种效果的差异表明，猪肺炎支原体的不同田间分离株的传播和毒力特性存在差异。本文综述了猪肺炎支原体感染的流行病学最新知识，包括其传播、感染和血清转化动力学，并且还比较了用来监测猪地方性肺炎的各种流行病学方法。     

猪喘气病病原菌的分离鉴定

<正>猪气喘病,又称猪支原体肺炎,猪地方性肺炎,是由猪肺炎支原体(Mycolasma hyopneumoniaw,Mhp)引起的一种猪慢性、接触性呼吸道传染病,具有气喘和咳嗽、患病猪只生长缓慢和发育不良等特点。Mhp经常与圆环病毒等其他肺部病原体混合感染,易造成更大的经济损失。本研究从发病猪病料中分离、鉴定获得了1株猪肺炎支原体,为该病病原研究提供了基础。从猪喘气病病例中分离得到1株病原菌,对病原菌进行分离培     

有关猪肺炎支原体感染诊断方法和流行病学的最新观点

猪肺炎支原体是猪地方性肺炎(Enzootic Pneumonia,EP)的主要病原体,本病是一种主要影响肥育猪的慢性呼吸道疾病.尽管人们在控制猪肺炎支原体感染及其带来的不利影响上花费了大量的精力,但是猪地方性肺炎仍继续给全球养猪生产造成重大的经济损失.猪肺炎支原体通常是通过引进亚临床型感染的动物而侵入猪群的,或通过短距离的空气传播发生感染,但后一种情况较少.一旦侵入猪群,猪肺炎支原体可通过与受感染的母猪直接接触而将病原体传给后代或在同圈猪只之间进行传播.用于诊断猪肺炎支原体感染的"黄金标准"技术--细菌学培养非常费劲,通常很少使用.酶联免疫吸附试验和聚合酶链式反应检测方法以及以屠宰场监测或田间剖解为形式的死后检查,是用于调查猪肺炎支原体是否参与了猪呼吸道疾病的最常用技术.这些技术已被用来监测受猪地方性肺炎影响的猪群猪肺炎支原体的临床型和亚临床型感染猪群、免疫猪群或非免疫猪群以及处于不同的生产条件和管理条件下的猪群的发生情况.猪场水平上的猪地方性肺炎临床过程差异以及猪肺炎支原体疫苗接种效果的差异表明,猪肺炎支原体的不同田间分离株的传播和毒力特性存在差异.本文综述了猪肺炎支原体感染的流行病学最新知识,包括其传播、感染和血清转化动力学,并且还比较了用来监测猪地方性肺炎的各种流行病学方法.     

快速直接PCR检测猪肺炎支原体方法的建立及其应用

为了对河南省猪场猪肺炎支原体的感染情况进行调查,试验设计1对引物,对疑似猪肺炎支原体的肺组织进行直接PCR扩增,并进行了特异性、敏感性、重复试验,建立了猪肺炎支原体的快速直接PCR方法。2017年1月至2018年12月从河南省猪场发生重症呼吸困难猪的实变肺脏共采集348份,用建立的PCR方法进行鉴定,猪肺炎支原体阳性226份,阳性率为64.94%。表明猪肺炎支原体的感染率极高,是危害猪场的较为普遍、严重的病原。     

规模化猪场肺炎支原体、鼻支原体与蓝耳病病毒感染情况调查

[目的]为分析猪肺炎支原体(MHP)、猪鼻支原体(MHR)与猪蓝耳病病毒(PRRSV)在临床感染中的相互关系。[方法]对从山东省规模化猪场收集的213份疑似病料进行PRRSV、MHP和MHR的检测,结合猪场的免疫背景对结果进行分析。[结果]发现在猪肺炎支原体免疫猪场,猪肺炎支原体感染比例显著降低,而在猪肺炎支原体非免疫猪场,猪鼻支原体与猪肺炎支原体、猪蓝耳病病毒的混合感染率极高。无论在肺炎支原体免疫场还是非免疫场,猪蓝耳病病毒与猪鼻支原体的混合感染率,都超过了猪蓝耳病病毒与猪肺炎支原体的混合感染率。[结论]PRRSV与MHP和MHR之间有着密切的关系,除猪肺炎支原体外,猪鼻支原体目前已成为危害养猪业的又一重要因素。     

绵羊肺炎支原体与猪肺炎支原体交叉抗原研究

为了研究绵羊肺炎支原体标准株Y98与猪肺炎支原体标准株232全菌蛋白免疫原性的异同,试验采用SDS-PAGE和免疫印迹分析技术对其进行了研究,结果表明:绵羊肺炎支原体标准株Y98同猪肺炎支原体标准株232免疫印迹结果基本一致,在70,50,40,25 ku蛋白带处存在共同抗原。     

猪肺炎支原体强弱毒株感染后呼吸道特异性sIgA抗体分泌规律差异性

检验猪肺炎支原体强毒株与弱毒株感染后呼吸道sIgA抗体活性,并比较其抗体分泌规律差异。分别使用猪肺炎支原体强毒JS株和弱毒168株接种实验猪,同时设置健康猪为对照组,按时采集鼻拭子样本。通过ELISA检测0,2,4,7,14,21,28,35,42,49和56d特异性sIgA抗体滴度,比较两组抗体分泌规律。结果显示,在接种4~7d之间,强毒组已出现阳性猪,14d时所有猪呈感染阳性。而弱毒组在14~21d之间开始逐渐出现阳性猪,35d时80%左右的猪呈阳性感染,随后下降。并且强毒组抗体平均滴度高于弱毒组。结果显示,强毒转阳更早,抗体滴度更高,持续时间更长;弱毒为猪支原体肺炎弱毒疫苗株,该菌株同样保持了良好的免疫原性,可刺激呼吸道黏膜产生特异的sIgA,但黏膜抗体转阳时间较晚,滴度较低。强弱毒株在黏膜抗体分泌方面的差异有助于临床上对猪肺炎支原体的感染以及活疫苗免疫进行区别鉴定。     

猪肺炎支原体YN200901株的分离鉴定

采集疑似猪肺炎支原体病理变化的肺脏,接种到改良牛心培养基、猪胃消化液培养基进行培养,经瑞特染色、镜检,菌落狄氏染色、PCR鉴定及序列比对、生化试验鉴定,抗猪肺炎支原体血清生长抑制试验,分离获得一株猪肺炎支原体云南地方流行菌株,命名为YN200901。试验结果为云南本地株猪肺炎支原体的后续研究提供了物质基础。     

抗猪肺炎支原体IgA间接ELISA检测方法的建立

为了更准确地对猪肺炎支原体感染及免疫状况进行检测,作者拟建立抗猪肺炎支原体IgA间接ELISA检测方法.在比较了猪肺炎支原体全菌抗原和粘附因子P97R1原核表达蛋白后,选择后者作为包被抗原;以羊抗猪IgA为二抗,兔抗猪IgG-HRP作为酶标三抗,并分别对包被抗原的浓度、样品的孵育时间、二抗与三抗的最佳稀释度和作用时间以及显色液的作用时间作了优化.最终建立了稳定而特异的抗猪肺炎支原体IgA的间接ELISA检测方法.批间与批内试验结果证明该方法具有很好的稳定性.初步应用表明,该方法可用于猪肺炎支原体感染或免疫状态的临床监测.     

猪肺炎支原体强毒株的分离和鉴定

从15份疑似猪支原体肺炎病料中分离出病原,然后进行培养传代,再做染色镜检、PCR鉴定、序列分析和动物回归实验,最终将分离株接种于健康仔猪,结果仔猪出现典型的猪支原体肺炎临床症状和病理变化,证明该分离株为猪肺炎支原体.     

新疆伊宁市周边猪支原体肺炎的流行病学调查

猪支原体肺炎又称猪气喘病,是危害养猪业最重要的疾病之一。本研究通过采集新疆伊宁市周边地区规模化猪场、养殖合作社及生猪散养户饲养的疑似支原体肺炎猪只的鼻拭子或病料(肺脏),利用荧光定量PCR方法对猪支原体肺炎感染情况进行调查,并结合对周边规模化养殖场、养殖合作社和散养户进行的支原体肺炎流行病学调查进行分析,结果显示伊宁市周边规模化养殖场、养殖合作社及周边散养户的猪只均有猪支原体肺炎感染,其中鼻拭子采样阳性率为38.8%;肺脏病料阳性率为57.8%,结果也反映了散养户发生支原体肺炎感染的情况较为严重。同时通过支原体肺炎的流行病学调查结果综合分析该病的发生及发展规律对预防控制新疆地区猪支原体肺炎提供理论依据。     

春季猪支原体的防治

<正>猪支原体肺炎,是一种由猪肺炎支原体感染引起的一种接触性、慢性呼吸道传染病,也是一种重要的免疫抑制性疾病,是猪呼吸道综合征的病原之一。肺炎支原体感染容易造成其他病原微生物的混合感染和继发感染从而引起猪呼吸道综合征。我国是世界养猪大国,每年在猪肺炎支原体上损失百亿元以上,所以有效防治猪支原体肺炎,减少损失,显得尤为重要。     

广东东莞地区猪肺炎支原体感染的血清学调查

为了解广东东莞地区猪养殖场猪肺炎支原体感染情况,在5个镇（街）、20个猪养殖场共采集了390份血清,应用ELISA方法进行猪肺炎支原体抗体检测。结果为猪肺炎支原体抗体阳性率为86.92%,20个猪养殖场都存在不同程度的猪肺炎支原体感染,其中母猪的抗体阳性率为70.41%,仔猪为84.45%,中猪为97.50%,大猪为92.63%。结果表明,广东东莞地区养殖场猪受肺炎支原体感染情况比较普遍,需采取综合防控措施。     

猪肺炎支原体的培养和保存

我们从外地引进几株猪肺炎支原体标准株和流行株,并从慈溪疫区分离出一株猪肺炎支原体,对其继续培养方法和菌株保存方法进行了一些工作,介绍如下:     

猪肺炎支原体的培养和保存

我们从外地引进几株猪肺炎支原体标准株和流行株,并从慈溪分离出一株猪肺炎支原体,对其继续培养方法和菌株保存方法进行了一些工作,现小结如下。材料和方法1.猪肺炎支原体液体培养基我们参照中监所的培养基配方,配制了适合于支原体分离和培养的液体培养基,其组成成分为: 0.2%水解乳蛋白Hank’s液400ml 牛心消化液240ml     

猪支原体肺炎活疫苗与猪伪狂犬活疫苗混合喷鼻试验

简化免疫程序,方便养猪生产,是众多养猪人的需求,通过设计猪支原体肺炎活疫苗(RM48株)与伪狂犬活疫苗相互影响试验、混合使用对于伪狂犬免疫的影响试验、混合使用对于猪支原体肺炎活疫苗(RM48株)的免疫影响试验、猪支原体肺炎活疫苗(RM48株)与灭活疫苗临床效果对比试验等4个试验,试验结果表明:猪支原体肺炎活疫苗(RM48株)与伪狂犬活疫苗是可以混合喷鼻使用的;猪支原体肺炎活疫苗(RM48株)比猪支原体肺炎灭活疫苗产品的临床应用效果更明显。对于简化免疫程序推进,提供有力的数据支持。     

猪支原体肺炎的症状、治疗及防控

猪支原体肺炎是由猪肺炎支原体引起的一种猪的传染性、慢性呼吸道疾病,又名猪地方流行性肺炎,俗称猪气喘病。健康猪接触或吸入病猪通过喘气、咳嗽、喷嚏排出形成飞沫的带菌分泌物而感染,主要症状为咳嗽和气喘,病变的特征是肺的尖叶、中间叶、心叶以及膈叶前缘出现虾肉样或肉样实变。本文简要概述了猪支原体肺炎的症状、治疗方法和防控方法,为防治猪支原体肺炎建立理论基础。     

猪附红细胞体PCR检测方法的建立和初步应用

基于猪附红细胞体广东株16S rRNA基因的序列特点，设计合成种特异性引物，建立了猪附红细胞体PCR检测方法。该方法能特异性扩增523bp的猪附红细胞体16SrRNA基因片段，而对猪丹毒杆菌G4T10株、猪链球菌STl71株、多杀性巴氏杆菌E0630株、猪胸膜肺炎放线杆菌、猪肺炎支原体、鸡毒支原体和猫血巴尔通氏体CA株的基因组DNA没有扩增带出现。对猪附红细胞体基因组DNA的最小检测量为160pg。通过对38份临床样品的检测，8份为猪附红细胞体感染阳性，其余为阴性。结果表明，建立的PCR检测方法具有极高的敏感性和特异性，可用于急性猪附红细胞体病和临床健康带菌猪的诊断。