牛胚胎冷冻技术的实用化研究

采用不同的冷冻程序，不同的植冰温度，不同的冷冻保护剂，不同的解冻液及不同的解冻方式对牛胚胎冷冻及解冻技术的各个环节进行研究，目的是选择简便，高效的牛胚胎冷冻方法，综合冷冻过程，减少冷冻，解冻中对胚胎的损伤，提高胚胎解冻成活率和移植妊娠率。     

牛胚胎冷冻技术的研究

本文采用不同的冷冻程序，不同的植冰温度，不同的冷冻保护剂，不同的解冻液及不同的解冻方式对牛胚胎 冷冻及解冻技术的各个环节进行了研究，目的是选择简便，高效的牛胚胎 冷冻方法，缩短冷冻过程，减少岭冻，解冻中对胚胎的损伤，提高胚胎解冻成活率和移植妊娠率。     

在生产条件下牛冷冻胚胎直接移植的效果

牛冷冻胚胎解冻后能直接移植给受体牛的胚胎冷冻保存方法,对在商业条件下应用胚胎移植技术最有价值。传统冷冻法通常在胚胎解冻后用蔗糖溶液分步稀释抗冻保护剂,在显微镜下检查胚胎品质,合格者方能移植。与此相比,直接移植法简化了移植前胚胎的处理,可消除由于稀释抗...     

哺乳动物繁殖研究进展

1　直接移植冷冻的绵羊胚胎获得成功应用简单的胚胎冷冻方法 ,并将解冻的胚胎直接移植有助于降低绵羊胚胎移植的成本 ,加速绵羊品种改良。本实验是要研究胚胎冷冻方法在现场应用的可行性。所用的胚胎都从经ＦＳＨ -处理的情期第 7ｄ供体母羊收集 ,并对胚胎进行形态鉴定 ,用改良的ＰＢＳ清洗 ,于 10 %的甘油 ,10 %甘油和 2 0 %乙二醇中分别培养 5ｍｉｎ ,然后移入冷冻液 (2 5 %的甘油和 2 5 %的乙二醇 )中 ,装管 ,并将其移入液氮中冷冻保存。解冻的胚胎或直接移植或按常规方法处理后移植。结果表明 ,冷冻胚胎和新鲜胚胎的妊娠率和存活率没有…     

不同抗冻剂和冷冻—解冻方法对绵羊胚胎冷冻效果的研究

<正> 前言 到目前为止,国外研究绵羊胚胎冷冻并获得活的后代的有:Moor,N.W.(1976);Willadsen,S.M.(1977);Willadsen,S.M.(1976)。牛、羊胚胎冷冻一解冻后,存活率的变化幅度很大,多数移植成活并发育至产出活仔畜的数量约占全部冷冻胚胎数的35％。 哺乳动物胚胎冷冻过程中,不同抗冻剂配合使用不同的冷冻—解冻方法,对冷冻胚胎解冻后的存活率有明显的影响。目前很多学者对抗冻剂及冷冻和解冻方法进行了大量     

哺乳动物胚胎冷冻原理及研究进展

哺乳动物胚胎冷冻研究始于 5 0年代 ,先后在小鼠、大鼠、兔、马、牛、绵羊、山羊等动物胚胎上获得成功。目前该方面的研究进展很快 ,部分家畜的冷冻胚胎已逐步走向商品化应用。本文比较全面的综述了哺乳动物胚胎冷冻的原理、方法过程和冷冻胚胎的解冻及解冻后保护剂脱除。     

家畜卵和胚胎冷冻的现行方法及有待研究的问题

近17年来,采用建立起来的牛非手术采卵及冷冻方法,已能将牛桑葚胚和囊胚冷冻,并获得较高的存活率。现在试验中和商业上牛胚胎冷冻大多数是采取控制降温和解冻的程序。解冻后存活率按形态评定可达90％～100％,非手术移植的妊娠率为60％。绵羊、山羊和马的桑葚胚和囊胚用控制降温和解冻程序也能有效的冷冻。简化的控制降温和解冻程序的一步法用于牛胚胎,妊娠率可达50％。此法免去了解冻后较繁琐的脱除冷冻保护剂和胚胎评定过程。玻璃化法和快速冷冻法是较先进的方法,可大大缩短胚胎冷冻时间,而且无需复杂的冷冻设备。不过,迄今家畜胚胎冷冻的结果还是有待提高的,尽管牛、绵羊、山羊桑葚胚和囊胚用玻璃化法冷冻已经成功,移植后产了仔。另外,卵母细胞、早期胚胎、显微手术(切割、克隆、活组织检查)后的胚胎、猪胚胎冷冻成功率还很低。因此,为使胚胎移植技术能在生产中应用和开展胚胎显微操作、体外受精、克隆和基因转移之类生物技术的试验及应用,很有必要加强研究建立起更为有效的胚胎冷冻解冻方法。     

哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存的研究进展

自1985年胚胎玻璃化冷冻(v itrification)保存技术发明以来,玻璃化法先后在小鼠、兔、绵羊、牛、猪、山羊等动物胚胎上获得成功,近年来有关哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存的研究主要集中在冷冻和解冻方法上,相继发明了一些新的玻璃化冷冻方法:冷环玻璃化法(cryo loop)和开放式细管法(open pu lled straw,OPS),并且对解冻后细管内直接脱除防冻剂进行了广泛深入的研究,使得冷冻胚胎移植更易于在生产上推广应用。现将胚胎玻璃化冷冻的原理、冷冻保护剂、冷冻方法、解冻后保护剂脱除方法的最新研究进展作一综述。     

进口奶牛冻胚一步解冻移植效果的研究

冷冻胚胎移植效果不仅能检验胚胎冷冻保存技术的可靠性,且直接影响牛胚移技术的普及应用与商业利益。与传统的胚胎冷冻一解冻处理技术相比较,牛冷冻胚胎解冻后立即移植给受体牛更适于现场操作,简化了移植前胚胎的分步脱甘油处理,具有省时、不需专门仪器设备等优越性。如果直接移植效果接近或超过冷冻精液人工授精技术水平（情期受胎率平均55％）,则对提高冷冻胚胎的利用率,增进国际问的引种,以及形成胚胎产业化、推动胚胎移植技术商业化具有重要意义。     

简易胚胎冷冻器的应用试验

根据液氮罐内汽相区存在的温度梯度,可逐渐达到降温的原理而研制成功的简易冷冻器,已在全国17个省、市、自治区推广应用。采用该仪器及与其配套的胚胎冷冻—解冻技术方法,对小鼠、绵羊、奶牛、黄牛胚胎进行冷冻试验,取得小鼠冷冻胚胎解冻后培养成活率率为90.7％,孵化膨胀率为77.2％;绵羊和奶牛冷冻胚胎解冻后,形态恢复正常的胚胎比例分别为76.2％和69.4％,移植成功率分别为50％和30％。     

引进加拿大牛冻胚解冻后直接移植的效果

对进口的加拿大牛冷冻胚胎进行解冻后移植效果观察.结果共解冻24枚冻胚,解冻后直接移植给24头受体牛,妊娠19头,移植妊娠率79.2%,其中荷斯坦奶牛冻胚移植21头,妊娠17头,移植妊娠率达81.0%,创造我国牛冷冻胚胎移植成功率的最高记录.     

进口奶牛胚胎移植试验

为了探索一条以进口奶牛胚胎代替活畜进口的新途径，自2000年5月至12月，我们从加拿大引进179枚奶牛胚胎，并在内蒙、山东等地区进行了移植试验，结果显示：受体母牛在移植前45d强化饲养管理可提高移植妊娠率；常规冷冻胚胎解冻与一步细管冷冻胚胎解冻移植妊娠率无显著差异；用1．5mol/L乙二醇作保护剂冷冻的一枚牧胎移植妊娠率显著高于枚胚胎移植妊娠率。技术人员操作速度及子宫损伤对移植妊娠率明显影响。     

牛冷冻胚胎直接移植研究进展

冷冻胚胎解冻后直接移植给受体的方法,应用方便,有利于体外大量生产牛胚胎程序的商品化。牛胚胎直接移植现在用的程序是以蔗糖作渗透压缓冲剂,在冷冻细管里脱除甘油,然后移植,或者将蔗糖添加在冷冻液里,省去专门的脱除步骤。现在研究的新方法是用1.5M乙二醇(ethykne glycol)作冷冻保     

胚胎冷冻

在最近5年中,冷冻胚胎技术的进展提高了胚胎移植的成功率,使养牛业更广泛地采用了这项技术。最近一年半对胚胎一次解冻给了很大的注意。这样就减少了解冻时间。这种快速解冻过程,可使移植者不需处理胚胎,因而减少了移植冻胚的成本。     

家畜胚胎冷冻近期试验结果

近年来在改进牛、绵羊、马胚胎的冷冻和解冻方法方面,已取得了显著的进步。然而,猪胚胎的冷冻至今仍未取得满意的结果。我们研究的重点是牛的胚胎,对绵羊、猪和兔的胚胎也做了试验。本文主要论述近期来牛的完整和切割胚胎及完整的绵羊和猪胚胎的冷冻试验结果。     

黑头萨福克绵羊胚胎玻璃化快速冻胚移植效果分析

本试验应用玻璃化胚胎冷冻方法进行黑头萨福克绵羊胚胎冷冻和移植,比较了受体羊卵巢上黄体数量、受体羊的体况、移植胚胎的数量对受体受胎率的影响。受体羊卵巢上有一个黄体的移植受胎率42.7%与有2~3个黄体受体羊移植受胎率44.4%无显著差异;受体的体况对受胎率有显著影响,中上等(含中等)体况水平的受体的受胎率47.2%显著高于中下等的受体的受胎率43.0%(P0.05);使用玻璃化胚胎冷冻法的冷冻解冻胚胎移植受胎率54.2%显著高于常规胚胎冷冻法的冻胚移植受胎率44.0%(P0.05);移植1枚桑葚胚(1M)的受胎率47.5%略高于移植1枚囊胚(1B)的受胎率44.3%(P0.05)。因此,受体羊黄体数、冷冻桑葚胚和囊胚对胚胎移植受胎率没有显著影响,而受体中上等(含中等)体况水平和玻璃化胚胎冷冻法冷冻解冻胚胎移植受胎率显著提高。     

冷冻兔胚胎的移植

大部分家畜的胚胎冷冻保存于70年代以后相继成功.有关冷冻免胚胎的引进尚未见报道.为探索冷冻负胚胎在我国移植的可行性,我院首次从联邦德国慕尼黑大学引进皮兔冷冻胚胎进行移植试验.现将其结果报告如下.     

牛胚胎冷冻方法的应用研究

为研究使用常规冷冻法和OPS法对牛体内生产胚胎进行冷冻、保存及移植的效果,在阿克苏市进行了牛胚胎冷冻和移植试验.结果显示,这两种方法生产的冻胚解冻后的移植受胎率分别为28.89%和26.08%,差异不显著.对常规冷冻法和OPS法的冻胚生产费用进行比较.结果表明,OPS法冷冻胚胎比常规冷冻法的步骤简单、费用低,不需要专用...     

本地黄牛冷冻胚胎移植技术及其受胎率影响因素分析

笔者选用97头山东省平度市当地黄牛作为受体，采用玻璃化解冻进行加拿大进口北美性控高产荷斯坦奶牛冷冻胚胎移植。试验分别从冷冻胚胎级别、受体牛黄体直径、移植者技术水平、胚胎解冻后的停留时间，对冷冻胚胎移植受胎率进行了分析比较。结果表明：A级胚胎（46．3％）比B级胚胎（31．6％）、C级胚胎（0）受胎率高；受体牛黄体直径在1．0～1．5cm（49．1％）之间较2cm（28．1％）、2．5cm时受胎率要高；移植者技术水平的高（42．3％）低（21．1％）其受胎率相差较大；胚胎解冻后停留的时间10～20min（37．8％）、1～2h（46．9％）、4～6h（25％）对受胎率也影响较大。说明影响当地黄牛移植高产荷斯坦奶牛冷冻胚胎受胎率的因素主要有冷冻胚胎级别、受体牛黄体直径、移植者技术水平、胚胎解冻后停留的时间。     

纯种肉羊超数排卵和胚胎冷冻技术的研究

试验对40只用于冷冻胚胎生产的无角多赛特羊、德国肉用美利奴供体羊分别在发情后6.5～7d进行子宫采胚,并进行冷冻胚胎。其结果:6.5d和7d采集的可用于冷冻的平均胚胎数(6.80±4.44)和(7.40±3.54)枚没有显著差异(P>0.05)。6.5d采集的胚胎所有胚胎均处于紧缩桑葚胚、早期囊胚、囊胚阶段。7d采集的胚胎中扩张囊胚占42.57%,孵化囊胚占18.92%。在该研究中共解冻92枚胚胎并进行移植,其结果:解冻后的24枚孵化囊胚和68枚有透明带的胚胎成活率和移植妊娠率分别为:37.50%、44.44%和91.18%、59.67%。因此冷冻羊胚胎时,采集胚胎的最佳时间是供体羊发情后的6.5d。