番茄遗传转化体系的建立

研究以番茄（Lycopersicon esculentum Mill.）栽培品种“中杂9号”、“毛粉802”和“合作908”为试材,通过对番茄茎段的离体培养,研究不同基因型以及不同激素组合对植株再生的影响。结果表明：以茎段为外植体时中杂9号和毛粉802更适合诱导再生植株形成;IAA与IBA比较,IAA利于芽的形成及正常芽的发育。其中中杂9号最适宜诱导愈伤组织和芽分化培养基为MS＋6-BA2.0mg/L＋IAA0.1mg/L、MS＋6-BA2.0mg/L＋IAA0.4-0.5mg/L,分化率均高达100%,毛粉802最适宜诱导愈伤组织和芽分化培养基为MS＋6-BA2.0mg/L＋IAA0.4-0.5mg/L,分化率高达100%。茎段外植体适宜的生根培养基为MS＋IAA0.5mg/L＋6-BA0.6mg/L,生根率高达80.8%。     

加工番茄遗传转化再生体系的建立

加工番茄种子出芽后7~8 d,子叶剪成约0.2~0.4 cm,0.3~0.5 cm的小块,以MS B5为基本培养基,附加IAA0.2 mg/L分别与0.5,1.0,1.5,2.0,2.5 mg/L的6-BA/ZT/TDZ组合;6-BA2.0 mg/L分别与0.0,0.05,0.1,0.2,0.5,1.0 mg/L的IAA/IBA/NAA组合。经诱芽比较,在不同浓度6-BA/ZT/TDZ与0.2mg/LIAA组合中,出芽率最高的培养基为MS ZT1.0 mg/L IAA0.2 mg/L和MS TDZ2.0 mg/L IAA0.2 mg/L。在不同浓度的IAA/IBA/NAA与6-BA2.0 mg/L组合中,IAA明显优于NAA和IBA,筛选出MS 2.0 mg/L6-BA 1.0 mg/LIAA为最佳生芽培养基。以1/2MS添加NAA//BA0.0,0.1,0.2,0.5,1.0 mg/L进行生根比较,再生芽在MS 0.5 mg/L IBA生根培养基上生根最好,并发育成完整的小植株。     

茄子遗传转化体系的建立

三月茄下胚轴外植体在含1mg/L ZT和1mg/L-3mg/L BA的MS培养基上芽再生率可达70％以上。150mg/L的卡那霉素可以有效地抑制三月茄下胚轴产生愈伤组织、诱导出不定芽和根。200mg/L-300mg/L氨苄青霉素或羧苄青霉素能够完全抑制农杆菌的生长。通过农杆菌介导,获得了表达绿色荧光蛋白基因（gfp)的转基因茄植株。     

胡萝卜遗传转化体系的建立

以新黑田五寸胡萝卜下胚轴为外植体,研究对胡萝卜抗性植株的影响因素及目的基因的整合情况,建立了较为完善的转化体系。实验结果表明:以胡萝卜下胚轴为材料,用苗龄7d,共培养2d,浸染15min的体系,Kan抗性芽的分化频率可达52%。获得抗性愈伤培养基:B5+0.1mg/L2,4-D+0.2mg/LKT+75mg/LKan+500mg/LCef,抗性芽诱导培养基:B5+100mg/LKan+500mg/LCef;抗性植株生根培养基:B5+0.1mg/LIBA+75mg/LKan+300mg/L:Cef;对转基因植株进行了PCR分子学检测,初步证明外源基因已整合到胡萝卜基因组中。     

百合遗传转化体系的建立

通过根癌农杆菌介导的遗传转化方法,建立了百合金黄精灵(ButterPixie)鳞茎的遗传转化体系。确定了适宜百合转化的筛选剂草甘磷的浓度:芽分化阶段为1.6mg.L-1,根分化阶段为0.8mg.L-1。除菌剂头孢的使用浓度为500mg.L-1。并且确定OD600=0.5的菌液浓度侵染20min,共培养pH5.2培养3d时对百合有最高转化效率。研究确定了预培养时间为4d,在共培养培养基中去除NH4NO3或加入阿魏酸均可提高转化效率。得到抗性植株12株,PCR初步检测发现其中7株为PCR阳性植株,转化效率为58.3%。     

矮牵牛Tidal Wave品种遗传转化受体再生体系的建立

以矮牵牛Tidal Wave品种无菌苗叶片为外植体,在附加不同质量浓度激素的MS基本培养基上诱导培养,通过器官发生途径获得再生植株。在附加3.0mg/LBA、0.3mg/LNAA的培养基上获得了90%以上芽的再生率。再生芽在附加0.02mg/LNAA、1.0mg/LKT、5.0mg/LGA3的培养基上发育良好。在3种选择抗生素的筛选中发现,叶片对潮霉素和庆大霉素较为敏感,这2种抗生素质量浓度为5mg/L时,2周内可将外植体全部杀死;而卡那霉素质量浓度达到15mg/L时,芽分化才被完全抑制。因此可确定卡那霉素为理想的选择抗生素,其选择压质量浓度为15mg/L。2种抑菌抗生素中,头孢霉素对叶片再生影响较大;而250mg/L的羧苄青霉素能有效地抑制农杆菌菌株LBA4404的生长,却对矮牵牛叶片的芽分化影响不大,为适宜的抑菌抗生素。     

番茄ZF遗传转化再生体系的研究

番茄 ZF无菌苗出芽后 5～ 7d,子叶切成 0 .5 cm× 0 .5 cm小块 ,下胚轴切成 1cm的小段作为外植体 ,以 MS为基本培养基 ,玉米素 1.0 mg/ L,6 -苄基腺嘌呤 1.0 m g/ L 分别与吲哚乙酸 0 .0 5 ,0 .2 ,0 .5和 1.0 mg/ L配成 7个激素组合 ,经诱芽比较 ,确定 MS+BA1.0 m g/ L+IAA0 .2 mg/ L 为最佳生芽培养基 ,MS添加吲哚乙酸0 .0 ,0 .0 5 ,0 .1和 0 .2 mg/ L 进行生根比较 ,确定 MS+IAA0 .0 5 mg/ L 为最佳生根培养基。卡那霉素 (Kan)临界浓度确定为 2 5 mg/ L。转化培养过程为 :外植体于生芽培养基 2 6℃ ,2 6 0 0 lx光下预培养 2 4 h。农杆菌 L BA4 4 0 4过夜培养 ,用 MS培养液稀释 10～ 2 0倍 ,侵染外植体 5 m in,2 8℃黑暗共培养 4 8h。然后在 MS+BA1.0 mg/ L+IAA0 .2 m g/ L+Kan2 5 mg/ L+Cef2 0 0 mg/ L 筛选培养基上诱芽 ,每 14 d转接 1次。芽长至 2 cm时 ,切下转至 MS+IAA0 .0 5 mg/ L+Kan2 5 m g/ L+Cef10 0 m g/ L 培养基上生根。     

天山雪莲遗传转化体系建立

采用根癌农杆菌介导法进行GFP基因的遗传转化,建立了农杆菌介导天山雪莲遗传转化体系。以天山雪莲胚性愈伤组织为受体;40 mg/L的卡那霉素为胚性愈伤组织筛选质量浓度;胚性愈伤组织预培养2 d后用含100μmol/L AS和500 mg/L脯氨酸的感染工程菌液侵染25 min,能够取得比较理想的转化效果。对8株卡那霉素抗性植株进行PCR及GFP荧光蛋白检测,共获得6株阳性植株。结果表明GFP基因已整合到天山雪莲的基因组中并得到表达。     

保加利亚尖椒遗传转化体系的建立

以保加利亚尖椒子叶为外植体,通过农杆菌介导法将抗真菌三价载体（GCR）遗传转化至辣椒,建立了适合辣椒转化的高效再生体系,结果表明：在侵染液pH：值5．2、预培养2d、侵染时间7～8min、无AS、共培养2d的条件下,抗性不定芽的诱导分化率达到89％,转基因植株经PCR、Dot blotting检测证明外源基因已整合至辣椒基因组DNA中。     

烟草叶绿体遗传转化体系的建立

烟草叶绿体遗传转化体系的建立ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆＴｏｂａｃｃｏＰｌａｓｔｉｄＧｅｎｅｔｉｃＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ以叶绿体为代表的细胞器转化为建立植物高效表达转化体系提供了一条新的途径。因其高效表达、通用性好、定点整合、稳定快等特性而发...     

芍药遗传转化再生体系的建立

以芍药为研究对象,建立芍药高效的遗传转化再生体系,试验筛选最佳结果为：以茎段为外植体,用HgCl2消毒15min,基本培养基为1／2MS,抗坏血酸（100mg·L^-1）,诱导愈伤阶段的植物生长调节剂（PGR）配比为ZT（2．0mg·L^-1）＋IAA（0．4mg·L^-1）,胚状体分化阶段不加植物生长调节剂PGR;生根阶段为IAA（0．4mg·L^-1）。抗性筛选时适宜的卡那霉素Km浓度为4mg·L^-1,遗传转化受体为胚性愈伤组织。     

甘菊遗传转化再生体系的建立

[目的] 建立高效稳定的甘菊再生体系,并确定卡那霉素和草丁膦的筛选压。[方法] 以甘菊无菌苗叶片为外植体,通过添加不同浓度的NAA和6-BA建立了甘菊遗传转化再生体系。[结果] 在5种芽诱导培养基中,MS3（MS＋NAA 0.1mg/L＋6-BA0.1mg/L）的再生频率最高,可达98%,其不定芽生根率可达100%。培养35d后,添加5和10mg/L卡那霉素的培养基上甘菊再生率为11.3%和10%,添加15和20mg/L卡那霉素的培养基上没有芽的分化;添加0.5mg/L草丁膦的培养基上甘菊再生率为8.7%,添加1mg/L草丁膦的培养基上没有芽的再生,添加1.5和2.0mg/L草丁膦的培养基上没有芽的分化。卡那霉素和草丁膦在甘菊遗传转化中的筛选浓度分别为8.0和0.8 mg/L。[结论] 该研究为进行甘菊转基因试验打下了基础。     

芍药遗传转化再生体系的建立

以芍药为研究对象,建立芍药高效的遗传转化再生体系,试验筛选最佳结果为:以茎段为外植体,用HgCl2消毒15min,基本培养基为1/2MS,抗坏血酸(100mg·L-)1,诱导愈伤阶段的植物生长调节剂(PGR)配比为ZT(2.0mg·L-1)+IAA(0.4mg·L-)1,胚状体分化阶段不加植物生长调节剂PGR;生根阶段为IAA(0.4mg·L-)1。抗性筛选时适宜的卡那霉素Km浓度为4mg·L-1,遗传转化受体为胚性愈伤组织。     

农杆菌介导的番茄遗传转化体系优化

以番茄自交系AC++和番茄母本材料1448的子叶为外植体,采用农杆菌介导的方式接种于含有不同浓度玉米素(ZT)、吲哚-3-乙酸(IAA)和硝酸银(AgNO_3)的MS培养基上,以筛选适合番茄自交系AC++和1448的最佳遗传转化体系。结果显示,诱导愈伤组织及不定芽分化的最适培养基为MS+2.0 mg/L ZT+0.5 mg/L IAA+3 mg/L AgNO_3;诱导生根的最适培养基为1/2 MS+0.3 mg/L IAA。     

番茄遗传转化体系的建立及LC和GFP标记基因的表达

本研究以小型番茄(miniature Lycopersicon esculentum Mill.)Micro-Tom为试材,建立其以子叶、下胚轴为外植体的高效、稳定再生体系及遗传转化体系。结果表明,以子叶、下胚轴为外植体时,诱导愈伤组织和芽分化的适宜培养基均为MS 6-BA2.0mg/L IAA0.2mg/L,芽分化率均可高达92%。两种外植体适宜的生根培养基均为MS NAA0.1mg/L。同时,通过根癌农杆菌介导法,建立了Micro-Tom的遗传转化体系。而乙酰丁香酮能大大提高根癌农杆菌转化番茄的效率,当AS=180μm/L时,芽分化率为52.8%;OD600=0.14是转化的最佳菌液浓度;子叶外植体与农杆菌共培养后,经过诱导,根的再生,获得了抗性苗,利用绿色荧光蛋白(GFP)检测和整株表型为紫色(Lc)基因的表达,初步证明外源基因已经整合到Micro-Tom中,为番茄激活标签体系的建立奠定了基础。     

树莓遗传转化体系的建立与优化

【目的】树莓遗传转化体系的建立对研究其基因功能、性状形成机制等方面的生物学探索和育种改良方面的研究具有重要意义。【方法】建立2套稳定的遗传转化系统,系统1为叶片直接分化丛生芽遗传转化受体系统;系统2为树莓叶片脱分化形成愈伤组织再分化成芽遗传转化受体系统。【结果】转化效率分析结果显示,系统1转化率为25%,是系统2的2.1倍,抗性筛选获得阳性植株时间是系统2的50%。【结论】系统1具有更高的遗传转化效率。     

马铃薯高效遗传转化受体体系的建立

以4个马铃薯(Solanum tuberosum L.)栽培种为材料,对其叶片、茎段和试管薯3种外植体再生体系进行研究,筛选与优化马铃薯遗传转化的受体材料和条件,建立马铃薯高效遗传转化受体体系。结果表明:茎段较叶片愈伤组织形成速度更快、诱导率更高。其中,‘陇薯3号’愈伤组织分化效果最佳,分化率和出苗率分别达100%和175.0%。在添加1.0mg·L~(-1)ZT+1.0mg·L~(-1) IAA+0.5mg·L~(-1)6-BA+0.2mg·L~(-1) GA的MS培养基中,4个品种的试管薯均可通过直接分化再生系统分化成苗。其中,以‘青薯168’试管薯薯片出苗率最高(110.0%)。验证了试管薯作为转化受体,受基因型的影响小,转化周期短,是马铃薯遗传转化的最佳材料,进一步建立试管薯繁育及再生体系,为马铃薯遗传转化奠定良好的基础。     

东方百合遗传转化组培体系的建立

为建立高效稳定的基因转化受体系统,以东方百合"西伯利亚"(Lilium orienta l"Siberia")无菌苗叶片和鳞片叶为外植体,使用不同种类和浓度的生长素与细胞分裂素、蔗糖、抗生素筛选等方法进行了不定芽的诱导分化、试管苗小鳞茎诱导及生根等研究。结果表明:鳞片诱导最佳分化培养基为MS+KT2.0+NAA0.2mg·L~(-1),试管苗小鳞茎诱导培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+KT2.0 mg·L~(-1)+NAA0.2 mg·L~(-1)+75g·L~(-1)蔗糖,试管苗叶片分化培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L~(-1)+NAA0.1 mg·L~(-1),试管苗鳞片叶分化培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L~(-1)+2,4-D 0.2 mg·L~(-1)。生根培养基为1/2MS+NAA0.2 mg·L~(-1)。抗生素敏感性试验表明,百合叶片的卡那霉素选择压为100 mg·L~(-1),鳞片叶为120 mg·L~(-1)。     

大白菜高效稳定遗传转化体系的建立

以无菌苗下胚轴为外植体,建立了大白菜高效、稳定再生和遗传转化体系,获得了转基因抗性芽。结果表明,转化效率最高的基因型为Seoul,最佳筛选培养基为MS＋2mg／L6-BA＋1mg／LNAA＋2mg／LAgN03＋300mg／L Car＋10mg／LHyg,共培养基pH5．2,完全黑暗培养,侵染液浓度OD600=0．5,侵染时间为10min,在此条件下转化效果最好。GUS染色结果表明,GUS基因已整合到抗性芽细胞的染色体中,能够稳定表达。