哺乳动物腔前卵泡的研究进展

哺乳动物的卵巢中,含有数万个卵泡．其中绝大部分为原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡等腔前卵泡。然而能发育到成熟并排卵的卵泡为数甚少,约99．9％的卵泡在腔前卵泡阶段闭锁、退化,这无疑是动物遗传和育种资源的极大损失。目前,卵母细咆是休外受精胚胎移植、性别控制、胚胎分割、动物克隆和转基凶等胚胎生物技术研究和开发必不可少的材料,卵母细胞来源匮乏成为制约这些技术研究进展的主要因素,因此卵巢腔前卵泡的开发无疑是解决这一难题的有效途径。本文介绍了腔前卵泡研究的历史和现状以及最新的研究情况．目的是为有关的研究工作提供有益的启示和参考。     

不同成熟时间对黄牛小腔卵泡母细胞成熟率的影响

许多年以来,国内动物繁殖工作者一直从事繁殖控制机理的研究,致力于发展繁殖操作技术。最近几年,繁殖新技术的研究突飞猛进,出现了体外受精、克隆、转基因和性别控制技术,来提高具有高遗传价值动物的繁殖力及其生产效益。这些新技术在体外操作都需要卵母细胞,但是由于缺乏足够的可用卵母细胞,大大地限制了这些新技术在生产上的应用。卵巢上除了少数大腔卵泡卵母细胞外,还有成千上万的小腔卵泡卵母细胞和腔前卵泡卵母细胞,这些小腔和腔前卵泡卵母细胞是提供体外操作所需的成熟卵母细胞的潜在来源。本研究目的在于开发卵巢上的小腔卵…     

哺乳动物卵泡发育过程中的超微结构变化

目前 ,动物腔前卵泡的体外培养正日益受到重视 ,并已取得了较大进展 ,已建立的培养体系可成功地使腔前卵泡发育到有腔阶段 ,猪、山羊等已可实现腔前卵泡卵母细胞体外成熟 ,体外受精并发育至囊胚阶段。但有关腔前卵泡体外成熟的机制仍不明了。本文通过对体内发育与体外培养之卵泡及其卵母细胞超微结构进行比较 ,从微细结构上客观评定体外培养卵泡的形态、活力、代谢状况及功能完整性 ,界定体外生长卵泡所处发育阶段 ,从而为确立和完善腔前卵泡体外培养体系并最终选择高质量的卵母细胞进行体外受精提供可靠的理论依据。1　体内发育卵泡及其卵…     

小鼠腔前卵泡体外培养研究进展

哺乳动物卵巢中有数量丰富的腔前卵泡,小鼠腔前卵泡卵母细胞从开始尝试分离至今已经获得试管后代,为在动物生产中的应用奠定了良好的理论基础和技术路线。文章简要地综述了小鼠腔前卵泡体外培养的方法,主要讨论了血清、生殖激素等培养液添加成分对小鼠腔前卵泡培养的影响及小鼠腔前卵泡体外培养技术的发展前景。     

牛卵巢内卵泡及卵母细胞生长发育的组织学研究

随机摘取牛离体卵巢18枚,常规石蜡切片,光镜下共观察卵泡5 818个,并测得卵泡、卵母细胞直径和透明带厚度（平均值）。结果:在整个卵泡发育过程中,卵泡与卵母细胞发育是完全显著正相关（P<0.01,R=0.9906）,其中腔前期P<0.01,R=0.9917,有腔期P<0.01,R=0.9951。腔前卵泡时期,卵泡和其卵母细胞直径增长幅度大体相等,而从有腔卵泡始,卵泡生长速度远远大于其卵母细胞。透明带与卵母细胞发育呈不显著正相关（P>0.05,R=0.9521）。     

哺乳动物腔前卵泡培养方法研究进展

目前，各种动物腔前卵泡的研究已经取得了一定进展。但体外培养获得的卵母细胞质量与体内相比还有一定的差距。有效的腔前卵泡培养方法是腔前卵泡研究取得成功的关键。腔前卵泡的培养方法有普通培养法、二维培养法、三维培养法以及培养板倒置培养；另外依据卵泡培养密度又可分为单个卵泡和多个卵泡培养法。研究者可以根据不同的需要选择合适的培养方法。     

小尾寒羊腔前卵泡体外生长发育的研究

近20年来,胚胎移植、体外受精、核移植、转基因等胚胎工程技术在理论和生产应用上已取得了很大进展.然而,所有这些技术是建立在具有完全发育能力的卵母细胞的基础之上的.大量卵母细胞的体外成熟培养是这些技术的限速步骤之一.目前采用的有腔卵泡卵母细胞的体外成熟和超数排卵,不能提供充足的卵母细胞以支撑胚胎工程技术的进一步发展.此外,卵巢中的卵母细胞绝大多数以无腔的形式存在于卵巢皮质内,有腔卵泡所占比例不到1%,屠宰场屠宰羊只后的卵巢内含有大量的腔前卵泡.如果建立腔前卵泡的体外培养体系,获得大量的具有成熟和受精能力的卵母细胞,一方面将会最大限度地挖掘保存卵巢上遗传资源;另一方面将极大的促进胚胎工程技术的研究与应用,还有利于研究卵泡和卵母细胞的生长和发育规律.     

影响牛腔前卵泡机械分离效率的因素

哺乳动物卵巢皮质中有大量的腔前卵泡，这是体外生产胚胎的一个潜在的卵母细胞来源。通过腔前卵泡体外培养获得成熟卵母细胞，以最大限度地发挥优良母畜的遗传和繁殖潜力。然而腔前卵泡分离效率一直制约着有关研究工作的开展。牛卵巢组织结构致密，纤维化程度高，机械分离牛腔前卵泡技术上有很大难度。许多研究者尝试酶消化分离腔前卵泡。虽然能分离到相对较多的腔前卵泡，但酶处理不但费用昂贵，处理时间长．而且酶处理及酶的残留都会降低卵泡活力。有人用显     

AREG对绵羊小腔卵泡卵母细胞体外成熟的影响

旨在研究双调蛋白(AREG)对绵羊小腔卵泡卵母细胞体外成熟(IVM)的影响。本研究从屠宰场绵羊卵巢上采集小腔和中腔卵泡的卵母细胞进行试验,利用自发荧光检测卵母细胞的NAD(P)H和FAD~(++)水平,利用JC-1检测卵母细胞的线粒体膜电位;两种来源的卵母细胞经体外成熟后,比较其卵丘扩展指数(CEI)、第一极体排出率(MII%);比较AREG、AREG+GDF9、AREG+BMP15、AREG+GDF9+BMP15、GDF9+BMP15对小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的CEI、MII%及卵母细胞线粒体膜电位的影响;检测了AREG+GDF9+BMP15对小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的NAD(P)H和FAD~(++)水平及其受精后发育能力的影响。结果表明,成熟前,小腔卵泡卵母细胞的线粒体膜电位和FAD~(++)水平均显著低于中腔卵泡卵母细胞(P0.05);体外成熟培养后,小腔卵泡卵母细胞的CEI和MII%均显著低于中腔卵泡卵母细胞(P0.05)。与对照组相比,AREG+GDF9+BMP15显著提高了小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的CEI、MII%和线粒体膜电位(P0.05),且与中腔卵泡卵母细胞组差异不显著(P0.05);另外,AREG+GDF9+BMP15显著提高了小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的NAD(P)H和FAD~(++)水平(P0.05),且与中腔卵泡卵母细胞组差异不显著(P0.05)。与对照组相比,在成熟液中添加AREG+GDF9+BMP15可以明显提高小腔卵泡卵母细胞体外受精后的卵裂率和囊胚率(分别为(43.79±3.69)%、(28.54±4.31)%和(78.99±1.12)%、(47.46±2.50)%,P0.05),而且与中腔卵泡卵母细胞组无显著差异(P0.05)。综上表明,绵羊小腔卵泡卵母细胞的代谢水平及IVM质量较低, AREG在GDF9和BMP15的协同作用下可以显著提高小腔卵泡卵母细胞的代谢水平及IVM质量,并进一步提高小腔卵泡卵母细胞体外受精后的发育能力。     

AREG对绵羊小腔卵泡卵母细胞体外成熟的影响

旨在研究双调蛋白（AREG）对绵羊小腔卵泡卵母细胞体外成熟（IVM）的影响。本研究从屠宰场绵羊卵巢上采集小腔和中腔卵泡的卵母细胞进行试验，利用自发荧光检测卵母细胞的NAD （P） H和FAD⁺⁺水平，利用JC-1检测卵母细胞的线粒体膜电位；两种来源的卵母细胞经体外成熟后，比较其卵丘扩展指数（CEI）、第一极体排出率（MII%）；比较AREG、AREG+GDF9、AREG+BMP15、AREG+GDF9+BMP15、GDF9+BMP15对小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的CEI、MII%及卵母细胞线粒体膜电位的影响；检测了AREG+GDF9+BMP15对小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的NAD （P） H和FAD⁺⁺水平及其受精后发育能力的影响。结果表明，成熟前，小腔卵泡卵母细胞的线粒体膜电位和FAD⁺⁺水平均显著低于中腔卵泡卵母细胞（P<0.05）；体外成熟培养后，小腔卵泡卵母细胞的CEI和MII%均显著低于中腔卵泡卵母细胞（P<0.05）。与对照组相比，AREG+GDF9+BMP15显著提高了小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的CEI、MII%和线粒体膜电位（P<0.05），且与中腔卵泡卵母细胞组差异不显著（P>0.05）；另外，AREG+GDF9+BMP15显著提高了小腔卵泡卵母细胞体外成熟后的NAD （P） H和FAD⁺⁺水平（P<0.05），且与中腔卵泡卵母细胞组差异不显著（P>0.05）。与对照组相比，在成熟液中添加AREG+GDF9+BMP15可以明显提高小腔卵泡卵母细胞体外受精后的卵裂率和囊胚率（分别为（43.79±3.69）%、（28.54±4.31）%和（78.99±1.12）%、（47.46±2.50）%，P<0.05），而且与中腔卵泡卵母细胞组无显著差异（P>0.05）。综上表明，绵羊小腔卵泡卵母细胞的代谢水平及IVM质量较低， AREG在GDF9和BMP15的协同作用下可以显著提高小腔卵泡卵母细胞的代谢水平及IVM质量，并进一步提高小腔卵泡卵母细胞体外受精后的发育能力。     

哺乳动物腔前卵泡的分离与培养

哺乳动物卵巢中绝大多数卵母细胞以无腔形式存在，有腔卵泡所占比例很少。通过建立腔前卵泡的培养体系，获取大量的具有成熟和受精能力的卵母细胞，将极大地促进体外受精、核移植等胚胎工程技术的发展，并有利于研究卵泡和卵母细胞的发育规律。     

哺乳动物腔前卵泡的分离与培养

哺乳动物卵巢中绝大多数卵母细胞以无腔形式存在，有腔卵泡所占比例很少。通过建立腔前卵泡的培养体系，获取大量的具有成熟和受精能力的卵母细胞，将极大地促进体外受精、核移植等胚胎工程技术的发展，并有利于研究卵泡和卵母细胞的发育规律。     

山羊腔前卵泡卵母细胞体外发育与体外成熟的研究

通过比较3种培养基、5个培养系统和4种培养方法对卵母细胞生长率的影响,结果发现,就卵母细胞生长率而言。以MEM HEPES培养液＋5％FCS＋40μg/mlFSH 20ng/ml IGF-1 2mmol/L cAMP 2mmol/L次黄嘌呤培养系统为佳。在腔前卵泡体外培养过程中,12个卵泡经腔期发育,约占同等培养条件下卵泡九的2％（12／603）。培养卵泡经腔期发育并未改善其卵母细胞的成熟率（0／12）。腔前卵泡卵母细胞经过不同时间的体外培养,发现经12和14d培养结不的卵母细胞中,有81％（47／58）生发泡明显迁移至质膜下;培养14d的卵母细胞中,约16．4％（9／55）产生pbI但不排出,因而在胞质中见到极体;;培养16d得到1枚排出pbI的孤雌激活卵;同时发现培养16－18d卵母细胞退化率明显增高（P＜0．01）。推测山羊腔前卵泡卵母细胞体外培养的适宜时间为16d。     

哺乳动物小腔卵泡的体外发育

随着胚胎工程技术和辅助生殖技术的发展,对胚胎数量、质量要求都在增加。超数排卵、卵母细胞体外成熟等增加了卵母细胞利用率,但卵巢内大腔卵泡非常有限。因此小腔卵泡作为一种巨大的卵母细胞来源越来越受到众多学者关注。研究小腔卵泡卵母细胞体外成熟和体外受精发育机制,有利于提高小腔卵泡卵母细胞的发育力。     

山羊卵母细胞冷冻保存的研究进展

卵母细胞的冷冻保存在胚胎工程技术方面有重要意义。主要概述了山羊卵泡卵母细胞和腔前卵泡冷冻保存的研究进展,以期为后续研究工作提供参考。     

绵羊卵泡颗粒细胞的体外培养与保存

哺乳动物卵巢内含有数量庞大的腔前卵泡,然而在生理条件下,这些卵泡只有大约1%能发育到成熟的排卵阶段,其余都由于闭锁而退化,这是对雌性繁殖潜力的极大浪费。通过在体外培养复苏这些卵泡的生长,可以为体外受精,克隆和转基因等生物工程技术提供潜在的同种质卵母细胞来源[1]。特别是随着克隆和转基因技术的发展,将来对卵母细胞的需要越来越大,只靠回收窦腔卵泡中的卵子已经不能满足需求,通过体外培养卵巢组织或者卵泡,复苏卵巢中占主导地位的腔前卵泡的生长,可以加强我们对卵泡颗粒细胞生存、发育的生理调节机制的了解,对于提高高遗传和经济价值的家畜以及在科研上具有重要价值的动物的繁殖潜力,珍稀或濒危动物的保护以及人类生育能力的保存和辅助受孕具有重大意义[2]。     

牛次级卵泡和三级卵泡前期生长发育的组织学研究

通过对牛次级卵泡和三级卵泡前期生长发育的组织学研究 ,探讨了次级卵泡和三级卵泡前期的生长发育规律。结果表明 :在卵泡生长发育过程中 ,卵泡颗粒细胞层数达 5～ 6层时 ,开始出现不连续卵泡腔 ;其层数在 8层以上则以连续腔为主 (占 94 .74 % ) ,连续腔出现最多的层数为 8～ 16层 (占 84 .2 1% )。次级卵泡在颗粒细胞层数达到 3～ 4层时 ,已形成完整的透明带 ,颗粒细胞层数达到 5层时 ,透明带增厚。随着颗粒细胞层数的增多 ,卵泡直径和卵母细胞直径均增大。次级卵泡卵母细胞直径的增长和卵泡直径增长速度基本接近 ;而进入有腔卵泡阶段 ,卵母细胞直径的增长速度相对于其卵泡直径的增长缓慢。次级卵泡颗粒细胞层数在 2～ 5层 ;颗粒细胞层数达 5层之后进入三级卵泡初期阶段     

N-乙酰半胱氨酸对不同直径卵泡来源猪卵母细胞体外成熟效果的影响

旨在在猪卵母细胞体外成熟培养液中添加N-乙酰半胱氨酸(NAC),揭示NAC对不同直径卵泡来源卵母细胞体外成熟效果的影响，解析其对氧化还原平衡的调控作用。本研究收集猪卵巢上大腔(4～6 mm)、中腔(2～4 mm)、小腔(1～2 mm)卵泡中的卵母细胞，在以上3种卵泡来源猪卵母细胞的体外成熟培养液中，均分别添加0、1、2、4 mmol·L^-1浓度的NAC处理，评价卵丘扩展指数、第一极体排出率等成熟指标，检测卵母细胞中ROS水平、谷胱甘肽(GSH)含量和抗氧化基因的表达水平。结果表明，NAC处理对大腔卵泡来源卵母细胞的卵丘扩展指数和ROS水平无显著影响(P>0.05),对大、中腔卵泡来源卵母细胞的第一极体排出率无显著作用(P>0.05);而适量浓度的NAC(2 mmol·L^-1)处理可显著提高中、小腔卵泡来源卵母细胞的卵丘扩展指数(P<0.05),降低ROS水平(P<0.05),提升小腔卵泡来源卵母细胞的第一极体排出率(P<0.05)。同时，NAC处理对大、中腔卵泡来源卵母细胞中的GSH含量和抗氧化基因SOD、CAT...     

不同直径的绵羊卵泡中卵母细胞核相及皮质颗粒分布特征分析

为了探讨绵羊体内卵母细胞的核相及皮质颗粒的分布特征,本研究根据绵羊卵泡直径将绵羊有腔卵泡分为早期有腔卵泡(1mm≤直径≤2.5mm)与中期有腔卵泡(2.5mm<直径≤7.5mm)两组,用地衣红染色方法观察两组绵羊卵泡中卵母细胞的核相特征及所占比例,用FITC-PNA、Hoechst 33342双染方法观察两组绵羊卵泡中的不同核相时期的卵母细胞的皮质颗粒分布特征。结果表明,绵羊早期有腔卵泡中的卵母细胞大部分处于GV1期,其核膜边缘不整齐,染色体呈细丝状,紧贴于核膜下均匀分布或集中于核膜下某处分布,皮质颗粒在胞质中密集、均匀的分布。绵羊中期有腔卵泡中的卵母细胞,大部分处于GV3~GV4期,其核膜边缘清晰、着色较轻,染色体短而粗,在核质中均匀分布,核质明显脱颗粒化,皮质颗粒开始向细胞膜迁移,部分卵母细胞的皮质颗粒在细胞膜下形成一圈密集的带状区域。由此可见,绵羊早期与中期有腔卵泡中的卵母细胞大部分处于GV期的不同阶段,其胞质中皮质颗粒开始发生迁移的时间早于生发泡破裂(GVBD)期。     

连接蛋白Cx43和Cx37在卵泡发育中的作用

卵泡中的颗粒细胞通过间隙连接彼此交流,也与卵母细胞相互联系.连接蛋白是组成间隙连接的基本结构单位,其中Cx43和Cx37是卵泡发育所必需的.Cx43介导的间隙连接偶联通道对于胚胎生殖嵴的发育和出生后的卵泡发生都是必不可少的.Cx37除了对卵母细胞和颗粒细胞之间的交流发挥作用外,还能在紧邻卵母细胞的颗粒细胞之间形成交流通道,缺失Cx37会影响到有腔卵泡的发育,并且卵母细胞不能发育至成熟,故Cx43和Cx37对卵泡发育至关重要.