猪繁殖与呼吸综合征病毒人工感染试验

为探讨单纯猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染与猪"高热病"及猪群死亡率的关系,用经检测为PRRSV阳性的猪病料接种2头断奶仔猪,每日测定体温,将发病猪处死剖检,用PCR方法进行PRRSV检测和ELISA检测抗体,发现攻毒猪均迅速出现持续高热症状,无死亡趋向,剖检试验猪以肺脏损伤为主,无细菌的继发感染,PCR检测P...     

猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒2型、猪伪 狂犬病病毒混合感染的检测分析

本研究采用RT-PCR方法对2010年12月至2011年11月采集于豫西地区的170份疑似PRRSV感染猪病料进行病原检测,得到102份高致病性PRRSV阳性样本,在此基础上应用PCR方法检测PCV2和PRV的感染情况,并计算混合感染率。试验结果显示,豫西地区PRRS发病猪主要疫病的总混合感染率为58.52%,二重混合感染率为39.21%,三重混合感染率为19.61%,其中PRRSV/PCV2型二重混合感染最严重,混合感染率达33.33%;春夏和秋冬总混合感染率分别为48.57%、81.25%,而且不管是二重还是三重混合感染,秋冬均比春夏更严重,尤其是PRRSV/PCV2/PRV型三重混合感染,秋冬与春夏季节的混合感染率相差较大,分别为37.50%、11.43%;PRRS发病猪从哺乳期到育肥期都有混合感染,混合感染率分别为42.10%、50.00%、100.00%,混合感染程度逐渐加重,主要集中在育肥期;不同发病时期的最高混合感染型也有所不同,其中哺乳期最高混合感染型为PRRSV/PCV2,混合感染率为42.10%,保育期最高混合感染型为PRRSV/PCV2、PRRSV/PCV2/PRV,混合感染率均为22.73%,育肥期最高混合感染型为PRRSV/PCV2/PRV,混合感染率为50.00%。本研究反映了豫西地区PRRS发病猪群与猪圆环2型及猪伪狂犬病的混合感染情况和规律,为该地区PRRS及其混合感染的临床诊治和区域性防控工作的进行提供了理论依据和指导。     

Clinical Effects of Experimental Dual Infections with Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Followed by Swine Influenza Virus in Conventional and Colostrum‐deprived Pigs

Previous studies demonstrated that experimental dual infections of pigs with porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) followed by H1N1 influenza virus cause more severe disease and growth retardation than the respective single virus infections. Here three experiments were undertaken to better define the clinical impact of combined PRRSV‐H1N1 infections in conventional and caesarean‐derived colostrum‐deprived (CDCD) pigs. Groups of pigs were inoculated by aerosol with PRRSV followed by H1N1 at 3‐, 7‐ or 14‐day intervals. During the post‐H1N1 period, mean body temperatures, respiratory signs and mean weight gains in the PRRSV‐H1N1 inoculated groups were recorded and compared with those in uninoculated controls (experiments 1 and 2) or in singly virus‐inoculated pigs (experiment 3). In a first experiment with conventional pigs, the PRRSV‐3d‐H1N1 and PRRSV‐7d‐H1N1 infections induced mean body temperatures >40.5°C during 8 days (peaks 41.1 and 41.6°C, respectively) and mean growth reductions of 3.4 and 4.8 kg, respectively, during the 2 weeks after H1N1, along with marked depression and respiratory disease. The PRRSV‐14d‐H1N1 infection, on the contrary, was largely subclinical. In a second experiment with conventional pigs, PRRSV‐3d‐H1N1 and PRRSV‐7d‐H1N1 infections were clinically milder, with smaller increases in mean body temperatures (peak 40.5°C in both groups) and growth reductions (1.4 and 1.6 kg, respectively). In both groups, only one pig showed prominent general and respiratory signs. In a final experiment with CDCD pigs, PRRSV‐7d‐H1N1 infection had minimal effects on mean clinical performances and growth and, except for one pig that was severely affected, differences with the single virus inoculations were negligible. Thus, both the time interval between infections and the sanitary status of pigs can affect the clinical outcome of dual PRRSV‐H1N1 infections. However, factors so far unknown seem to cause large variations in the clinical response between individual pigs.     

猪繁殖与呼吸综合征和猪流感混合感染的诊断

通过流行病学调查、临床症状观察和病理剖检，结合血清学调查和病原学检测，对浙江省部分地区流行的“猪高热症”病因进行了探讨，初步认为这种疫情是由猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）和猪流感并发造成的，继发感染则加重了本次疫情所造成的损失。     

特异性中和抗体终止猪体内猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）美洲型标准株（VR-2332）的ORF6及ORF7部分保守序列，设计合成1对特异引物，通过优化RT—PCR反应条件，建立了从血清中检测PRRSV RNA的RT—PCR诊断方法。60日龄仔猪经鼻腔接种1mL 10^5.6TCID50/／mL PRRSV强毒液，7d后肌肉注射中和效价为1：64的特异性高免血清，每隔1周利用RT—PCR检测猪体内PRRSVRNA，5周内PRRSV RNA检测均为阴性，表明高滴度特异性中和抗体完全终止了PRRSV感染猪体内的病毒复制。     

影响猪繁殖与呼吸综合征病毒感染与增殖的因素

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染宿主细胞以及在宿主细胞内进行复制的过程受到宿主细胞的细胞受体、胞内大分子及细胞因子影响。随着单克隆抗体制备技术、分子生物学技术与蛋白质研究技术的日趋成熟,使深入研究影响PRRSV感染与增殖的因素成为可能。目前在猪肺巨噬细胞(PAM)与Marc-145细胞中发现了多个PRRSV细胞受体,这与PRRSV感染宿主细胞所具有严格的细胞嗜性有关。同时胞内大分子物质可导致PRRSV在宿主细胞内产生增殖性感染。包括干扰素在内的细胞因子具有抑制PRRSV在宿主细胞内增殖的作用。研究影响PRRSV感染与增殖的因素,对于预防PRRSV感染与合理利用PRRSV具有重要意义。     

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒继发细菌感染病例的实验室诊断

猪繁殖与呼吸障碍综合征(PRRS)是严重危害养猪业的病毒性传染病之一。实验采集临床疑似猪繁殖与呼吸障碍综合征病死猪的脏器组织,应用分子生物学和细菌学方法进行实验室确诊。经荧光RT-PCR检测,该病例确诊为猪繁殖与呼吸综合征病毒感染所致;经细菌分离鉴定和耐药性分析,该病例继发革兰氏阳性球菌感染,头孢氨噻肟对该致病菌抑制效果较好。     

2007-2010年河北省猪蓝耳病病毒隐性感染情况调查

采用RT-PCR方法对2007—2010年采自全省11个地市272个县级屠宰场2159份商品猪的肺脏或肺门淋巴结进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)病原学检测,结果PRRSV场总体阳性率为38.97%,样品总阳性率为11.90%,高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)总阳性检出率为9.77%,经典猪繁殖与呼吸综合征病毒(C-PRRSV)总阳性检出率为2.13%。PRRSV同CSFV、PRV和PCV-2混合感染所占的比率为55.64%,HP-PRRSV和C-PRRSV同其他病原体混合感染所占的比率分别为58.76%和41.30%,混合感染以二重或三重感染为主。在同一份样品中不能同时检测到HP-PRRSV和C-PRRSV。C-PRRSV隐性感染阳性率虽然在河北省猪群中一直较低,但其略呈上升的趋势;而HP-PRRSV隐性感染阳性率虽然在河北省猪群中呈逐年下降趋势,但其污染面积较大,应值得高度重视。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒与副猪嗜血杆菌混合感染的诊断

为确诊广东省阳江市某规模化猪场（存栏800头母猪）保育猪发病死亡的原因,本试验对从该发病猪场采集的3份肺脏、肝脏、脾脏临床样品进行细菌学检测及药敏试验,采用PCR/RT-PCR检测临床样品中猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪圆环病毒3型（PCV3）和猪肺炎支原体等病原。对特异性扩增的3株PRRSV的ORF5基因产物进行序列测定,与VR2332、HuN4、JXA1、CH-1a等代表毒株进行核苷酸序列同源性分析,并构建系统进化树。结果表明,试验分离鉴定出1株副猪嗜血杆菌（Hps）,对7种临床常用药如阿莫西林、头孢拉定等均有较强的敏感性。同源性比对结果表明,3株PRRSV （LJW1、LJW2和LJW3）ORF5基因核苷酸同源性为99.3%~99.8%,与欧洲型代表毒株Lelystad核苷酸同源性为64.0%~64.2%,与HP-PRRSV毒株JXA1、HuN4、CH-1a和TJ核苷酸同源性较高,分别为99.2%~99.5%、99.0%~99.3%、94.5%~94.9%和98.8%~99.2%;与中国河南和广西分离的HP-PRRSV毒株HeNzm1-16和GXLZ05-2015核苷酸同源性较高,分别为99.3%~99.7%和99.2%~99.7%,与美洲型经典疫苗株MLV、美洲型标准株NC、美洲型经典株VR2332核苷酸同源性较低,分别为88.5%~88.8%、85.2%~85.5%和82.3%~82.6%。PRRSV ORF5基因系统进化树分析表明,3株PRRSV均属于美洲型毒株,与国内HP-PRRSV代表毒株JXA1、HuN4和TJ等处于同一分支,亲缘关系较近。本研究揭示了该场保育猪发病病原,并从分子水平上明确了分离的3株PRRSV与不同代表毒株的亲缘关系,为弱毒疫苗的合理选择使用和综合防控PRRSV提供了参考依据。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒致病机理的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种以妊娠母猪严重繁殖障碍及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特征的传染病。现已遍及世界各主要养猪国家和地区,成为危害养猪业最严重的传染病之一。作者就猪繁殖与呼吸综合征病毒致病机理方面的研究情况作一综述,为诊断技术、免疫机理研究、疫苗设计和疫病防制提供借鉴。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染抑制猪瘟疫苗的免疫应答

对20日龄SPF猪和20日龄猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）血清阳性猪，人工感染猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）北京分离株（BJ－4）后48h接种猪瘟疫苗，利用ELISA方法检测仔猪针对PRRSV和猪瘟疫苗的体液免疫，利用MTS法检测仔猪外周血单核细胞对有丝分裂原ConA的刺激反应。结果表明，不论是SPF仔猪还是带有PRRSV抗体的仔猪，在鼻内接种PRRSV后48h接种猪瘟疫苗，其对猪瘟疫苗的抗体反应显著低于对照组，对有丝分裂原ConA的刺激反应也下降。由此说明，PRRSV感染使仔猪对猪瘟疫苗的免疫应答受到抑制。     

抗独特型抗体对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的免疫作用

用PRRSV感染SPF猪，血清检测结果显示，机体不仅产生抗PRRSV抗原的各种抗体(Ab1)，而且产生针对这些抗体的抗独特型抗体(Ab2)。根据各种蛋白质的等电点不同，应用IEF技术分离纯化出PRRSV感染猪血清中的不同IgG。分别以纯化的抗PRRSV—GP5蛋白、抗PRRSV-M蛋白的Ab2免疫SPF猪各5头，7d后经鼻腔感染PRRSV，定期采集血样进行病毒分离或鉴定试验。抗PRRSV-GP5蛋白的Ab2免疫的猪，其血样自感染后3～7d均检出PRRSV；3头猪在感染后14～63d未检出PRRSV；2头猪在感染后14～35d检出PRRSV，从42～56d转为阴性，其中1头猪在63d时检出PRRSV。抗PRRSV—M蛋白的Ab2免疫的猪，其血样自感染后3～7d均检出PRRSV；2头猪在感染后14～63d未检出PRRSV；3头猪在感染后14～35d检出PRRSV，从42～56d转为阴性，其中1头猪在63d时检出PRRSV。抗PRRSV—GP5和抗PRRSV—M蛋白的Ab2免疫作用显著，可作为PRRSV-GP5和PRRSV—M蛋白的替代抗原产生具有中和效应的抗体，保护机体免受PRRSV的感染。     

猪繁殖与呼吸综合症病毒引发的免疫抑制

猪繁殖与呼吸综合症病毒主要侵害猪体的巨噬细胞系统,特别是肺泡巨噬细胞,使感染猪的免疫力降低,引发免疫抑制.但许多研究证明PRRSV引起的免疫抑制是暂时性的,仅在肺中并局限于一定的水平.由PRRSV引发的猪的呼吸道病常伴发细菌感染是PRRSV感染的一大特征.由PRRSV引起的免疫损伤和在合并症中各种病原微生物的关系在试验中没有得到复制,不同PRRSV毒株在诱发机体产生免疫抑制方面的差别也没有得到比较.所以在没有实验室证据前,应慎重看待PRRSV在诱发猪体产生免疫抑制方面的作用.     

猪生殖——呼吸综合征病毒研究进展

对猪生殖与呼吸综合征病毒新的分类地位,基因结构特点,病毒蛋白的功能、病毒在细胞的增殖过程,增殖特点、毒株变异等新进展及病毒独特的生物学行性作了综述,提出了病毒变异和毒力差异的分子基础是需要进一步研究的问题。     

应用PCR检测猪圆环病毒2型和猪繁殖呼吸综合征混合感染

猪圆环病毒病自1991年加拿大首次报道以来，包括我国在内的世界上许多国家和地区都报道有该病发生。近年来，该病发生呈上升趋势，给世界的养猪业造成了相当大的经济损失。目前猪圆环病毒在猪场中的感染率是很高的，它主要侵害断奶后2-3周的仔猪，发病率为20％。60％，死亡率为5％-35％。已成为阻碍当今养猪业发展的重要病原之一。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株特异性抗体IgG的制备

应用猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株活疫苗免疫兔,制备兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株的特异性抗体IgG,应用15%SDS-PAGE和Western-blot进行纯化鉴定.结果表明:抗猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株特异性抗体IgG经15%SDS-PAGE纯化分析和Western-blot的鉴定显示该特异性抗体IgG具有很好的免疫原性,特异性强,仅与该病毒毒株的ORF5发生特异性结合.说明兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒HuB-20株特异性抗体具有良好的免疫原性和特异性,可与猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5特异性结合,可以作为诊断试剂和诊断试剂盒的一抗.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离与鉴定

从辽宁某猪场采取病料,经处理后接种Marc-145细胞进行PRRSV分离,结果有2份病料在该细胞上盲传后可见典型的CPE,经测定其毒价为10^-6.5TCID₅₀/mL。间接免疫荧光试验可见黄色荧光,用电镜对纯化的病毒进行观察,可见有囊膜包裹的圆形病毒粒子,直径约为50~70 nm。该病毒对氯仿、紫外线、酸碱度变化和热敏感。对有CPE的细胞培养物进行RT-PCR,结果为阳性。接种试验动物出现典型的PRRS临床症状和死亡。结果表明,成功分离到一株PRRSV。     

猪繁殖与呼吸综合征致病机理的研究进展

PRRS(猪繁殖与呼吸综合征)复杂的发病机制包括抗体依赖性增强、引起机体免疫抑制和在机体内持续性感染等现象,以及病毒遗传多样性;这些是该病难以防控的主要原因,本文就近年有关进展进行综述。     

规模化养猪场猪瘟、猪生殖-呼吸综合征、猪伪狂犬病监测及原因分析

采用夹心ELISA对我省12猪场60份猪组织样品进行猪瘟抗原检测，其中阳性样50份，占83.3%，分布于10猪场。用PRRSV抗体ELISA对18猪场518份猪血清样品进行抗体检测，其中阳性样品213份，占41.1%，分布于13个猪场。用PRV-gpI-抗体ELISA对26个猪场514份猪血清样品进行抗体检测，其中阳性样品268份，占52.1%，分布于21个猪场。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒分子生物学研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是1987年首先在美国北卡罗纳州的猪群中爆发的一种病毒性传染病,主要造成怀孕母猪流产、早产、产死胎,仔猪呼吸困难、高死亡率及成年猪的免疫机能障碍[1].国内外学者对其研究的不断深入,病毒的分子生物学研究方面取得了重要进展.PRRSV基因组的结构与功能得以明确,基因组所编码的蛋白及蛋白结构和PRRSV的基因变异进一步得以认识,基因工程疫苗的研究和分子生物学检测方法得到推动.