Identification of Streptococcus dysgalactiae strains of Lancefield's group C,G and L by polymerase chain reaction

Streptococcus dysgalactiae serogroup C, G and L strains were investigated by polymerase chain reaction (PCR) using oligonucleotide primers designed according to species-specific parts of the 16S-23S rDNA intergenic spacer region. The oligonucleotide primers with specificity for the 16S-23S rDNA intergenic spacer region allowed a correct identification of all S. dysgalactiae serogroups C, G and L strains investigated. No cross-reactivities could be observed with any of the control strains indicating the usefulness of PCR-technology to identify the serologically heterogeneous species S. dysgalactiae.     

PCR鉴定牛肉方法的建立及初步应用

依据牛１．７０９卫星ＤＮＡ序列设计了１对引物，建立了ＰＣＲ鉴定生、熟牛肉的方法。应用本方法特异地扩增出预期的牛２１８ｂｐＤＮＡ片段，其检测敏感度对生牛肉达３３．６ｆｇＤＮＡ，对熟牛肉和高压牛肉为０．３２ｐｇ。运用该引物均可扩增出水牛、牦牛、奶牛、黄牛肉单一的相同大小的ＤＮＡ条带，而对马、山羊、绵羊、骆驼、鹿、猪等１５种动物肉的ＤＮＡ扩增则呈阴性。扩增片段经ＨａｅⅢ酶切分析确认，所得１２９、７９、１０ｂｐ片段与微机分析结果一致。利用本法对１０３份生、熟牛肉及其制品进行鉴定，检出率为１００％。对各种样品检测，均可在６ｈ内完成。     

应用聚合酶链反应检测鉴别火鸡支原体方法的建立

根据基因库中火鸡支原体（ＭＭ）１６Ｓ ｒＲＮＡ基因序列（Ｇｅｎｅｂａｎｋ Ｕ０４６４９）,设计了一对跨幅为８５０ｂｐ的引物,用这对引物对４禽侏火鸡支原体标准菌株和６种其它禽病病原体进行ＰＣＲ扩增,结果４禽株鸡支原体菌株均得到片段大小与预期设计相一致的８５０ｂｐ的ＰＣＲ扩增产物,而其它６种禽病病原体（包括ＭＧ、ＭＳ和ＭＩ）的扩增结果则均为阴性,该ＰＣＲ能检出１００ｆｇ的火鸡支原体的ＤＮＡ模板。     

应用聚合酶链反应检测鉴别禽衣阿华支原体的研究

根据基因库中衣阿华支原体（ＭＩ）１６ＳｒＲＮＡ基因序列,设计了一对跨幅为２９９ｂｐ的引物,用这对引物对４禽株衣阿华支原体标准菌株和６种其它禽病病原体进行ＰＣＲ扩增,结果４禽株衣阿华支原体菌株均得到３片段大小与预期设计相一致的２９９ｂｐ的ＰＣ白话 增产物,而其它６种禽病病原体的扩增结果则均生,该ＰＣＲ能检出１ｐｇ的衣阿华支原体的ＤＮＡ模板。     

应用PCR方法对中国旋毛虫虫株的鉴定

收集了中国８个地区不同宿主来源的旋毛虫虫株，提取虫体ＤＮＡ，应用Ｊｅａｎ设计的引物序列和不同的退火温度进行了ＰＣＲ扩增。结果：哈尔滨海伦猪株、长春犬株、沈阳猪株、河南南阳猪株、湖北十堰猪株、西安猪株、云南大理猪株均显示出家畜型旋毛虫特异的６０２ｂｐ目的ＤＮＡ基因片段；而哈尔滨五常犬株未见此片段。在４８℃和５０℃退火温度扩增显示，哈尔滨五常犬株和长春犬株均有３８０ｂｐＤＮＡ基因片段，而其他虫株未有此片段。     

巢式PCR快速鉴定鸡传染性支气管炎病毒的研究

鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）经鸡胚增殖后,直接用尿囊液提取ＲＮＡ后反转录成ｃＤＮＡ,用ＩＢＶ基因３’端的ＵＴＲ１－／ＵＴＲ２＋和ＵＴＲ３－／ＵＴＲ４＋两对引物进行巢式ＰＣＲ,所检测的４个ＩＢＶ标准参考株和１６个ＩＢＶ野毒株均得到了预期的１７４ｂｐ大小的片段,而鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）,鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）及正常鸡胚尿囊液经同样处理没有可见片段出现。本试验不需纯化册毒只需０５ｍｌ病毒尿囊液即可在２４小时内得到准确的试验结果。这表明与其它ＩＢＶ鉴定方法相比,该法具有快速、灵敏、特异的优点。     

应用聚合酶链反应技术检测沙门氏菌

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测沙门氏菌,使用了２对引物ＨＩ和ｐｈｏＰ。ＨＩ引物对各长２０ＮＴ,根据鞭毛Ｉ相抗原基因自行设计,扩增序列长２６９ｂｐ;ｐｈｏＰ引物对各长２１ＮＴ,根据ｐｈｏＰ／ｐｈｏＱ基因设计,扩增片段长２９９ｂｐ。ＰＣＲ采用５０μＬ反应体系。ｄＮＴＰＳ各１００μｍｏｌ／Ｌ,引物各１μｍｏｌ／Ｌ,Ｍｇ２＋２．５ｍｍｏｌ／Ｌ,酶２Ｕ。三温段ＰＣＲ循环条件为：９７℃预变性７ｍｉｎ;９４℃变性６０ｓ、５５℃复性４０ｓ、７２℃延伸６０ｓ,３５个循环;７２℃延伸７ｍｉｎ。检测８株标准阳性菌,结果都出现了ＨＩ引物和ｐｈｏＰ引物特异带,标准阴性菌３株只出现ｐｈｏＰ特异带,说明ＨＩ引物特异性很强。     

用PCR技术鉴定犬细小病毒弱毒疫苗株

通过分析比较犬细小病毒(CPV)弱毒疫苗株和强毒株的基因序列，设计了3条引物并组成2对引物，对弱毒疫苗株和强毒株进行了半嵌套式PCR扩增。第1轮PCR扩增的结果为CPV弱毒疫苗株和强毒株有相同的目的片段(585bp)；第2轮PCR扩增的结果为CPV强毒株有375bp目的片段，而CPV弱毒疫苗株没有375bp目的片段。对PCR产物进行电泳和酶切分析，结果证明PCR产物片段大小和酶切位点与设计的产物完全一致。特异性和敏感性测定结果表明，该方法是高度特异和敏感的，可用于弱毒疫苗毒株与强毒株的鉴定。     

利用聚合酶链反应技术检测牛结核杆菌病的研究

应用聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ） 技术检测牛结核分枝杆菌纯化 Ｄ Ｎ Ａ, 其敏感性为２５０ｆｇ 。所用引物序列对９种抗酸分枝杆菌 Ｄ Ｎ Ａ 进行扩增, 经琼脂糖凝胶电泳证实, 只有人型结核分枝杆菌、牛型结核分枝杆菌产生了３１７ｂｐ 的特异性扩增带。将 Ｐ Ｃ Ｒ 法与皮内变态反应试验（ Ｐ Ｐ Ｄ） 检测方法比较; ５４ 份血样标本中 Ｐ Ｃ Ｒ 的阳性率为１ ％ , Ｐ Ｐ Ｄ 试验的阳性率为０ 。同时对奶样标本的检测与血样结果一致。结果表明, Ｐ Ｃ Ｒ 在直接检测患牛血样、奶样标本中显示出快速、敏感、特异的优点。为今后牛结核病的检测工作提供了一条新的途径。     

应用PCR检测禽腺病毒

根据禽腺病毒 CELO株的基因序列 ,设计合成了 1对引物 :上游引物为 5′-CCCTCCCACCGC-TAACCA-3′,下游引物为 5′-CACGTTGCCCTTATCTTGC-3′。用这对引物对 群禽腺病毒中 1 2个血清型病毒和 1 9个分离野毒株、 群 4个血清型病毒、 群禽腺病毒株的核酸模板进行了 PCR扩增 ,结果均特异性地扩增出了与设计片段大小相一致的 4 2 1 bp片段 ,而对其他 5种禽病病原体和哺乳动物腺病毒血清 2型核酸模板的扩增均为阴性。该 PCR能检出 1 fg禽腺病毒 DNA模板     

PCR检测犬腺病毒方法的建立

利用人工合成的两条引物,对病犬肝脏和细胞培养物冻融上清中的1、2型犬腺病毒DNA进行多聚酶链式反应（PCR）检测;再将扩增产物进行同位素标记,与纯化病毒DNA进行打点杂交。扩增产物经电泳分析结果表明,其大小与设计的引物间的序列大小基本一致;扩增产物经标记后只与犬腺病毒DNA发生杂交反应,表明其为犬腺病毒特异性核酸片段。     

用四重PCR检测方法检测产单核细胞李斯特菌

为了同时快速准确的检测产单核细胞李斯特菌以及是否为有毒力的产单核细胞李斯特菌,根据相关文献报道的四重PCR方法,针对该菌的种特异性基因inl A基因进行引物设计,扩增片段大小为800bp,结果应用该PCR法可特异性的扩增出目的基因片段,与GenBank上发表的序列同源性为97.3%。同时通过对毒力基因inlB,inlC和inlJ的检测用来判断菌株的相关毒力。而同一属的其他菌种无害李斯特菌(L.innocua),韦氏李斯特菌(L.welshimeri)均无特异条带,嗜水气单胞菌(J-1),产气荚膜梭菌(C57-13),大肠埃希菌(ATCC 25922),鼠伤寒沙门菌(C79-32),金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)结果均为阴性。对临床上送检的23份样品进行四重PCR方法检测并同时与国家标准GB/T22429-2008食品中单核细胞增生李斯特氏菌的快速筛选检验中使用的检测方法进行比对,两种检测方法的结果完全符合,均检测出7份阳性样品。并且四重PCR法表明这7份阳性样品中的产单核细胞李斯特菌均携带有3种毒力因子(inlB,inlC和inlJ),因此该四重PCR法可用于快速鉴定是否是有毒力的产单核细胞李斯特菌,为有效预防控制产单核细胞李斯特菌污染提供技术支撑。     

Immunity to Lancefield's group E Streptococcus: passive protection of swine

Healthy swine from one source were randomly allotted to 3 groups of 3 pigs each. Troup I and II pigs were parenterally dosed with serum obtained from swine in the convalescent stage of streptococcic lymphadenitis of swine. Group III pigs were contact controls. The swine of all groups were orally exposed to Lancefield's group E Streptococcus sp. During the next 3 weeks, the controls evidenced little resistance to the development of streptococcic lymphadenitis of swine, whereas the principals evidenced considerable resistance to development of the disease.     

鸭瘟病毒强弱毒株PCR检测方法的建立

根据基因库中鸭瘟病毒强毒株和弱毒株UL2基因保守区设计特异性引物,优化PCR反应的引物浓度和退火温度等,初步建立了可同时鉴别鸭瘟病毒强毒株和弱毒株的PCR检测方法,并对建立的方法进行了敏感性、特异性验证和临床样品检测。该PCR检测方法最低能检出1pg的鸭瘟病毒强毒和弱毒DNA模板。对鸭瘟病毒强毒和弱毒模板的检测,得到了与试验设计相符的827bp(强毒)和299bp(弱毒)的扩增条带,而对鸭副黏病毒、鸭坦布苏病毒、鸭圆环病毒、番鸭细小病毒、鸭Ⅰ型肝炎病毒、禽流感病毒和小鹅瘟病毒等病原体的检测均为阴性。说明建立了一种敏感性高、特异性好的鉴别鸭瘟病毒强毒和弱毒的PCR检测方法。     

应用聚合酶链反应检测鸡传染性贫血病毒

根据鸡传染性贫血病毒（CAV）Cux－1株的基因序列,设计了一对引物,用这对引物对三株CAV的核酸模板进行PCR扩增,结果均能特异性地扩增出420bp的片段,但对其它5种禽病病原体核酸模板的扩增,结果均为阴性,该PCR能检出10fg鸡传染性贫血病毒DNA模板。     

Identification of Papillomaviruses in Scrapings from Bovine Warts by use of the Polymerase Chain Reaction

Bloch, N., Sutton, R.H., Breen, M. and Spradbrow, P.B., 1997. Identification of papillomaviruses in scrapings from bovine warts by use of the polymerase chain reaction. Veterinary Research Communications, 21 (1), 63-68.     

多重PCR同时检测口蹄疫病毒、猪水疱病病毒和水疱性口炎病毒

根据基因库中的口蹄疫病毒（FM—DV）,猪水疱病病毒（SVDV）和水疱性口炎病毒（VSV）各基因序列,设计了与FMDV,SVDV和VSV互补的3对特异性引物,对样品中的cDNA模板进行了多重PCR扩增及反应条件的优化,结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带,分别为189bp,125bp和300bp。用这3对引物对病毒样品cDNA模板进行多次扩增,均能稳定得到与设计相符合的3条特异性条带。本试验能特异、敏感、快速地鉴定FMDV,SVDV和VSV。     

貂源停乳链球菌似马亚种的分离鉴定

为了研究引起水貂肺炎死亡的病因,对送检的病死水貂进行剖检。从病死水貂病料中分离出了一株革兰阳性球菌,对其进行菌落形态观察、生化鉴定以及16S rDNA序列分析,构建系统进化树并进行同源性分析,同时对该菌株进行药敏试验。结果表明：根据分离菌的形态特征、生物化学特性,结合16S rDNA序列测定与进化树分析,将其鉴定为链球菌属的停乳链球菌似马亚种。药敏试验结果显示,该菌株对青霉素、阿莫西林、莫西沙星等药物敏感,但对四环素有较强的耐药性。     

东北民猪源停乳链球菌的分离鉴定与药敏试验

为分离东北民猪源停乳链球菌(Streptococcus dysgalactiae)并鉴定其生物学特性,从齐齐哈尔市某东北民猪场死亡仔猪的肝脏及其关节液样品中分离病原菌,通过生理生化试验和分子生物学试验鉴定分离菌,研究了分离菌的致病性和药物敏感性。结果表明,分离到革兰阳性球菌1株,生化指标与停乳链球菌停乳亚种相符。系统进化树分析表明,分离菌株与停乳链球菌停乳亚种参考菌株的同源性为97%~98%,其中与AB537921.1(Japan)同源性最高,达到98.99%,进一步从分子水平鉴定该菌为停乳链球菌停乳亚种。以0.2mL/只(3.2×10^9CFU/mL)接种量感染小鼠,发病率和病死率均为100%。分离菌对多黏菌素B、阿莫西林、氨苄西林、环丙沙星、氧氟沙星、庆大霉素、氟苯尼考、林可霉素、新霉素均敏感,仅对罗红霉素耐药。