香草兰生防细菌的筛选、分子鉴定及其抑菌机制的初步研究

通过平板对峙法从香草兰根际微生物中筛选出对香草兰根(茎)腐病菌(Fusarium oxysporum)、香草兰疫病菌(Phytophthora nicotianae)和香草兰细菌性软腐病菌(Erwinia carotovora)均有良好抑制效果的生防菌10株。通过16S r DNA序列比对及系统发育树分析,其中7株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus.amyloliquefaciens),2株为枯草芽孢杆菌(B.subtils),1株为甲基营养型芽孢杆菌(B.methylotrophicus)。提取脂肽类化合物进行抑菌分析,发现10株生防菌脂肽类提取物对香草兰根(茎)腐病菌和香草兰疫病菌均有良好的抑制效果,有4株的脂肽类粗提物对香草兰细菌性软腐病菌有强烈的抑制活性。对其中2个菌株脂肽类粗提物进行MALDI-TOF/TOF-MS检测,发现菌株VX2R11产生表面活性素(Surfactin)和伊枯草素A(Iturin A)2种脂肽类化合物,菌株VX2S02仅产生伊枯草素A,推测产生伊枯草素A是菌株VX2R11和VX2S02拮抗香草兰根(茎)腐病菌和疫病菌重要机制;产生表面活性素是菌株VX2R11拮抗香草兰细菌性软腐病菌的重要机制。     

产几丁质酶芽孢杆菌对病原真菌的抑菌作用

三株产几丁质酶芽孢杆菌[短芽孢杆菌（G1）、地衣芽孢杆菌（G2）和枯草芽孢杆菌（G3）]对植物病原真菌生长有抑制作用。它们在琼脂平板上对油菜菌核病菌、水稻纹枯病菌、黄瓜灰霉病菌和小麦赤霉病菌均有抑菌圈产生。G2菌和G3菌，在灭菌土抑菌试验和不灭菌土抑菌试验中对油菜菌核病菌和水稻纹枯病菌显出强烈的抑菌活性。G3菌尤为突出。G3菌有开发成为生防制剂防治多种土传植物病害的潜力。     

灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)次生代谢产物的抑菌活性初步研究

用生长速率法及抑菌圈法测定了灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)高产菌株次生代谢产物提取物对6种植物病原菌的抑菌活性。结果表明,灰葡萄孢菌的提取物对稻瘟病菌(Pyricularia oryzae)、烟草赤星病菌(Alternaria alter-nata)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)和梨黑星病菌(Venturia nashicola)的菌丝生长有明显的抑制作用,能够完全抑制菌丝生长的浓度分别为2、2、4和8mg/mL,EC50则分别为0.1039、0.3816、0.8418和1.4950mg/mL。对烟草野火病菌(Pseudomonas syuringae pv.tabaco)、白菜软腐病菌(Erwinia carotovora)2种细菌也有抑制作用,在浓度为2mg/mL时,抑菌圈直径均为2.8cm。     

卷柏乙醇提取物对14种植物病原菌的抑制活性

采用牛津杯法及琼脂打孔法测定卷柏(Selaginella tamariscina)乙醇提取物对4种植物病原细菌[柑橘溃疡病菌(Xanthomonas carotovora pv.citri、姜瘟病菌(Ralstonia solanacearum)、水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)、大白菜软腐病菌(Erwinia carotovora pv.carotovora)]的抗菌活性.结果表明,在浓度为1 mg/mL时,卷柏乙醇提取物对4种供试细菌具有较好的抑制活性,抑菌圈直径13.6～15.3mm,对姜瘟病菌和水稻白叶枯病菌的最低抑菌浓度为125 μg/mL.采用生长速率法测定提取物对10种植物病原真菌[香蕉酸腐病菌(Geotrichum candidum Link ex Pers)、苹果轮纹病菌(Physalospora nasei)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、苹果腐烂病菌(Valsa mli)、玉米小斑病菌(Helninthosporiun maydwas)、葡萄黑痘病菌(Sphaceloma ampelinum)、苹果斑点落叶病菌(Alternarial ternate f.sp.mali)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum)、番茄棉腐病菌(Pythium ultimum)]的抑制作用,发现除对苹果轮纹病菌的抑制效果较好外(抑制率为56.3％),对其余供试菌的抑制率均低于50％.     

拮抗细菌对6种植物病原菌的抑菌作用

分别就拮抗细菌生防菌2[短小芽胞杆菌（Bacillus pumilus)]和生防菌1[枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis)]对稻瘟病菌（Magnaporthe grisea)、芦笋茎枯病菌（Phomopsisi asparagi)、尖镰刀菌（Fusarium oxysporum)、玉米小斑菌（Bipolaria maydis)、百合灰霉病菌（Botrytis elliptica)和青枯病菌（Ralstonia solanacearum )6种植物病原菌的抑制作用进行了测定，结果发现，生防菌2发酵液50倍稀释液对稻瘟病菌分生孢子萌发的抑制率为62.6%，100倍稀释液则为55.3%，对分生孢子附着胞形成的抑制作用不明显；将稻瘟病菌和生防菌2发酵液同时接入燕麦培养基中，生防菌2对稻瘟病菌菌落的生长有明显的抑制作用；生防菌2对芦笋茎枯病菌、尖镰刀菌、玉米小斑菌和百合灰霉病菌分生孢子萌发的抑制作用不明显；生防菌1对青枯病菌生长有明显的抑制作用，而生防菌2对青枯菌抑制作用不明显。     

土壤颉颃芽孢杆菌B-Q2-7的分离筛选及其抑菌作用研究

从杨凌大寨乡采来的土壤中分离到142株芽孢杆菌,经过皿内对峙初筛和无菌发酵滤液复筛得到一株对稻瘟病菌,小麦赤霉病菌,黄瓜枯萎病菌,梨黑星病菌,烟草赤星病菌,番茄灰霉病菌均具有强颉颃作用的芽孢杆菌B-Q2.单孢颉颃性筛选表明B-Q2-7的抑菌活性最强,对稻瘟病菌和番茄灰霉病菌的抑制率分别达到87.4%和90.6%.盆栽实验结果显示B-Q2-7无菌发酵滤液对番茄灰霉病具有良好的预防和治疗作用,10倍液的预防效果和治疗效果分别为89.6%和80.4%.抑菌机理研究表明,B-Q2-7代谢产物对梨黑星和番茄灰霉病菌的孢子萌发具有极强的抑制作用,在稀释10倍时的抑制萌发率分别达到95.9%和100%;显微观察到被B-Q2-7抑制的病原真菌菌丝大部分扭曲、肿大、畸形,出现膨大的泡囊.     

放线菌A19菌株抑菌活性成分的研究

从土壤中筛选到一株对多种植物病原菌有强烈抑菌作用的放线菌菌株,编号为A19。采用活性追踪法从A19菌株发酵液中分离得到H-1、H-2和H-3 3个化合物。经结构鉴定,化合物H-1为环(脯氨酸-亮氨酸),化合物H-2为环(4-羟基-脯氨酸-亮氨酸),化合物H-3的结构式尚待解析。抑菌活性测定结果表明:化合物H-3表现强烈的抑菌活性,在剂量为5μg时对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、白菜软腐病菌(Erwinia carotovora)的抑菌圈直径分别为13.5 mm1、1.0 mm、12.5 mm和14.0 mm,对小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、番茄叶霉病菌(Fulvia fulva)、马铃薯干腐病菌(Fusarium solani)、玉米大斑病菌(Exserlhilum turcicum)和玉米弯孢叶斑病菌(Curvularia lunata)孢子的抑制中浓度EC50分别为123μg/mL、154μg/mL、130μg/mL、87μg/mL和173μg/mL。化合物H-2对供试病原菌也表现一定的抑菌活性,而化合物H-1对供试病原菌无明显的抑菌活性。     

枯草芽孢杆菌BS-06液体发酵生产农用抑真菌素的初步研究

对枯草芽孢杆菌BS-06产生抑真菌素的条件进行优化,确定最佳发酵条件为:培养时间48 h,初始pH为8.0,装液量为30 mL,培养基中添加2%的麦芽糖、0.15%的硝酸钾、0.15%的吐温-80。枯草芽孢杆菌BS-06产生的抑真菌素具有较广的抗菌谱,对水稻纹枯病菌、稻瘟病菌、节瓜枯萎病菌、冬瓜枯萎病菌、苦瓜枯萎病菌均有较好的抗菌效果,有望开发成生物农药来防治农作物病原真菌。     

枯草芽孢杆菌BS-1菌株抑菌活性研究

对1株枯草芽孢杆菌BS-1进行了抑菌活性测定研究。以苹果炭疽病菌、番茄灰霉病菌、水稻恶苗病菌、小麦赤霉病菌、棉花枯萎病菌、辣椒疫霉病原菌、玉米小斑病菌7种植物病原菌为指示菌,采用对峙培养法、杯碟法以及菌丝生长速率法测定了枯草芽孢杆菌及其无菌发酵液对7种植物病原菌的拮抗活性,结果表明,枯草芽孢杆菌及其发酵液对番茄灰霉病菌生长有较强的抑制作用,对苹果炭疽病菌没有抑制作用。     

无花果内生真菌的研究Ⅰ.抗植物病原真菌活性的筛选

以白菜黑斑病菌（Alternaria brassicae）、番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）、辣椒疫霉病菌（Phytophthora capsici）、苹果腐烂病菌（Valsa mali）、西瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum f．sp．niveum）、烟草赤星病菌（Alternaria alternata）为指示菌种，对从无花果（Ficuscarice）中分离获得到的64株内生真菌进行抗真菌活性试验，结果表明18株内生真菌具有抗菌活性，占总内生真菌的28．1％，将具有抗菌活性的菌株进行分类鉴定，分属于2目、4科、8属。     

烟草赤星病菌拮抗菌发酵液的防病作用

以拮抗烟草赤星病菌的两株放线菌SZF2和SZF7为材料,对其发酵液防赤星病菌的效果及机理进行了初步研究.结果表明,SZF2和SZF7的无菌发酵液能抑制烟草赤星病原菌孢子萌发,同时还能激发烟草产生过量过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO),从而提高烟草对赤星病菌的抗性.离体和盆栽试验结果表明,SZF2和SZF7的发酵液可明显降低烟草赤星病的病情指数,其盆栽试验相对防效分别为48.94%和50.13%.     

YAG激光对番茄早疫病菌拮抗菌WB7的诱变效应

[目的]探明YAG激光对枯草芽孢杆菌WB7诱变作用。[方法]采用YAG激光(波长1060 nm,功率7 W)照射1株对番茄早疫病菌有拮抗作用的枯草芽孢杆菌WB7,综合各辐照时间组里菌株致死率和正变率的大小以及拮抗能力提高程度,分析不同辐照时间对WB7生长以及诱变的影响效果。采用连续传代培养,测定正变株拮抗能力的遗传稳定性。[结果]利用YAG激光辐照枯草芽孢杆菌对WB7有显著的诱变效应,不同辐照时间的诱变率有显著性变化,辐照1.5 min诱变作用最强,且正变率最大;筛选的最佳突变株WB7-L1.5’5高抗番茄早疫病菌,经过7代传代试验证明其可稳定遗传。[结论]该研究建立了YAG激光诱变枯草芽孢杆菌WB7的试验体系,对番茄早疫病的生物防治具有广阔的应用前景。     

蔬菜根际细菌R2–2的鉴定及其抑菌活性

从云南昆明市郊蔬菜根际分离细菌,经平板对峙培养筛选出1株抑菌能力较强的菌株R2-2,通过对其进行形态观察、Biolog微生物自动鉴定系鉴定和16S rDNA序列测定及其系统发育学分析,鉴定为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。对R2-2与植物病原细菌(甘蓝黑腐病菌、魔芋细菌性软腐病菌、海棠斑点病菌、水稻白叶枯病菌、水稻细菌性条斑病菌)和病原真菌(疫霉菌、尖镰孢菌、茄镰孢菌、立枯丝核菌)进行对峙试验,结果显示,R2-2对水稻白叶枯病菌和水稻条斑病菌有较强的抑菌效果,抑菌圈直径分别达6.83 cm和7.03 cm。该菌株的16S rDNA序列已在GenBank中注册,登录号为JN648098。     

缙云山土壤拮抗放线菌的分离、筛选与发酵条件优化

以烟草赤星病菌为指示菌,从缙云山土壤中分离和筛选出6株拮抗放线菌,其中JY-22对指示菌拮抗效果最好。对JY-22的抑菌谱测定结果表明:JY-22对棉花枯萎病菌、烟草赤星病菌、小麦纹枯病菌、柑橘疮痂病菌、茶云纹叶枯病菌和柑橘青霉病菌都具有较强的拮抗作用,抑菌率达41.9%~75.7%。通过单因子和正交试验对拮抗放线菌JY-22进行发酵条件的研究,结果表明,其最佳培养基组成和培养条件为:1 000 mL培养基中含葡萄糖2.0%、玉米粉1.5%、黄豆粉3.0%、氯化钠0.25%、碳酸钙0.2%,初始pH值为自然,250 mL三角瓶装液量为50 mL,发酵周期为72 h。     

番茄采后早疫病菌拮抗菌的筛选及发酵条件优化研究

[目的]筛选番茄采后早疫病菌拮抗菌,并优化其发酵条件。[方法]从番茄果实中分离出15株菌株,通过平板对峙法从中筛选出对番茄早疫病有拮抗效果的菌株,并对其摇瓶发酵培养条件（pH、温度、培养时间、转速、装瓶量和接种量）进行了优化。[结果]从番茄果实中筛选出了对番茄采后早疫病菌具有明显拮抗效果的菌株004,其最佳发酵条件为：初始pH7.0,温度30℃,装液量100/250 ml,接种量2.0%,培养时间48 h,转速210 r/min。通过发酵条件优化,发酵滤液抗菌活性得以提高,抑菌圈从0.20 cm提高至0.70 cm。[结论]为防治番茄早疫病菌提供了参考。     

贵州省烟草赤星病菌生物学特性研究

烟草赤星病是发生较严重的一种常见烟草病害,为了模拟室外不同的气象条件下烟草赤星病的最适发生环境,对贵州省烟草赤星病菌的生物学特性进行研究。结果表明,温度为25℃、湿度达到100%、黑暗的条件最适合烟草赤星病菌生存;ZA培养基最适宜赤星菌菌丝生长,而OA培养基最适宜赤星菌产孢。赤星病菌的生长随温度、湿度的增加而增加,在到达一定数值后逐渐下降。利用SPSS软件建立了温度和湿度对烟草赤星病菌落平均直径增长量的的回归方程,分别为:y=0.015x2+0.0158x-0.04,y=-0.001x2+0.213x-4.666。     

丹参内生细菌的抑菌活性研究

DS-1是从丹参叶片中筛选出的一株细菌,为研究其对病原真菌的抑菌效果,本实验采用平板对峙法和生长速率法测定了DS-1菌株及其发酵液对梨黑斑病菌、番茄早疫病菌、小麦赤霉病菌等8种病原真菌的抑菌活性。结果表明DS-1对这8种病原菌都有很好的抑制作用,其中对梨黑斑病菌的抑菌率达到了90.57%;过滤处理的发酵液对病原菌的抑制率最高达到83.87%,但经过高温处理的发酵液活性出现不同程度的下降。     

山东省保护地土壤黄瓜菌核病拮抗细菌的分离与鉴定

利用点接法从山东省9个地市的保护地黄瓜菌核病病株根际土壤中初步筛选到21株拮抗细菌,其分布率与田间发病率呈正相关,经平板对峙培养复筛出4株对黄瓜菌核病菌具有强烈抑制作用的细菌。该4个菌株均具有明显的抑菌宽带,其中菌株BSH-4对黄瓜菌核病菌的抑制率最高为91.1%,抑菌带宽度为18.5mm;4个菌株对黄瓜猝倒病菌、蔓枯病菌、枯萎病菌和立枯病菌,番茄早疫病菌、辣椒疫病病菌、茄子绵疫病菌等7种常见蔬菜土传病害的致病菌均表现出不同程度的抑制作用。根据菌株的菌体形态、培养性状、生理生化特性等指标,初步确定4菌株中1株为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa),1株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),2株为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)。     

梨采后病害拮抗菌的分离与筛选

以梨采后病原菌链格孢菌(Alternaria alternata)、镰刀菌(Fusarlum poae)、毛霉菌(Mucoraceae racemosus)为靶标菌,从各种水果和叶片表面分离到89株细菌;通过平板对峙试验,筛选出对梨链格孢菌有拮抗作用的细菌10株,占菌株总数的11.2%;对梨镰刀菌有抑制作用的细菌15株,占菌株总数的16.9%;对梨毛霉菌有抑制作用的细菌11株,占菌株总数的12.4%。按抑菌率的大小,将拮抗菌分为强、中、弱3类;对3种病原菌均有很好抑制作用的是HM3和XY1。