4个品系罗非鱼血清免疫球蛋白的分离纯化及分子量测定

利用A蛋白柱亲和层析法分离纯化了4个品系罗非鱼血清的免疫球蛋白(Ig)。优化的分离纯化条件为:进样量1.0mL血清,4℃结合3.5 h,流速1.3 mL/min。通过标准曲线法测定分离得到的免疫球蛋白最高浓度在1.87～2.95 mg/mL之间。绘制洗脱曲线,比较A蛋白柱亲和层析法分离纯化4个品系罗非鱼血清Ig的效果。SDS-PAGE电泳检测发现,4个品系罗非鱼血清Ig重链、轻链的分子量分别在80、30 ku左右。表明A蛋白柱亲和层析法可用于罗非鱼血清Ig的快速分离纯化。     

多发性骨髓瘤中医病机分析及证治思路

多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）是一种浆细胞恶性肿瘤,随年龄增长发病率升高,多经意义未明的单克隆免疫球蛋白血症（monoclonal gammopathy of undetermined significance,MGUS）发展而来。本文在前人经验基础上,提出了完整的肾虚血瘀证治思想;认为肾虚无制、瘀毒肆虐是MM发生的关键;提出了补肾阴、扶正气、破瘀毒、解症状基本治法,使MM恢复到MGUS状态。     

猪血免疫球蛋白G提取及分子量测定

[目的]纯化猪血免疫球蛋白IgG,并测定其轻链与重链的分子量。[方法]采用分步硫酸铵盐析法粗提猪血浆中的免疫球蛋白G,透析袋脱盐后用DEAE-SephadexAS0对IgG进行纯化,对纯化后的免疫球蛋白进行SDS-PAGE电泳,采用AlphaEaseFC凝胶分析软件对凝胶图像进行分析。[结果]3份样品中免疫球蛋白的浓度分别为2．712、2．679、2．489mg／ml;电泳后每泳道均出现2条蛋白带,说明所提免疫球蛋白的纯度较高;2条蛋白带分别为IgG的重链（H链）与轻链（L链）,与标准蛋白Marker进行比较可知,H链的分子量约为57KDa,L链的分子量约为26KDa。[结论]得到了高纯度的猪IgG,并进一步确定了IgG轻链与重链的分子量。     

α-干扰素预防多发性骨髓瘤并肺部真菌感染的临床观察

多发性骨髓瘤 (MM)患者由于自身免疫功能低下 ,且在化疗过程中使用细胞毒性药物、肾上腺皮质激素及广谱抗生素 ,很容易并发肺部真菌感染 [1 ] 。干扰素具有抗肿瘤和免疫调节作用 ,本文是应用干扰素联合 COMP方案治疗 MM,发现应用干扰素后肺部真菌感染率明显下降 ,现报道如下。1　资料与方法1.1　研究对象40例为初治或复治复发病例 ,按张之南主编《血液病诊断与疗效标准》确诊为 MM[2 ] 。随机分为两组 :治疗组 2 0例 ,男 13例 ,女 7例 ,平均年龄 5 7.6岁 (2 5～ 71岁 ) ,骨髓浆细胞比例平均占 45 .6 % ,并发肾功能损害 3例 ;对照组 2 0…     

鸡IgG单克隆抗体的制备与鉴定

[目的]制备鸡免疫球蛋白单克隆抗体,提高诊断鸡特异性抗体的水平。[方法]应用盐析法粗提和葡聚糖G200凝胶层析分离纯化鸡血清IgG,免疫BALB/c小鼠,并进行细胞融合和ELISA筛选。[结果]间接ELISA法检测C44、C45、C67和C68共4株鸡IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞的腹水效价分别为1∶640000、1∶320000、1∶640000和1∶80000。Westernblot分析显示,C44和C45株单克隆抗体识别鸡IgG轻链,而C67和C68株单克隆抗体识别鸡IgG重链,它们与鸭、猪等血清Ig均没有反应。小鼠Ig亚类分析表明,4株细胞分泌的抗体均为IgG1型。[结论]成功获得了4株稳定分泌鸡IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞。     

多发性骨髓瘤30例临床误诊分析

目的：探讨多发性骨髓瘤的临床特点、误诊原因，降低误诊率。方法：回顾性分析2006年1月至2009年8月多发性骨髓瘤30例患者临床资料、误诊情况。结果：①误诊病种多样，常见误诊疾病涉及骨骼、呼吸、肾脏、心血管、血液等多系统疾病；②多发性骨髓瘤临床表现多样化，症状缺乏特异性；③多数医生对多发性骨髓瘤复杂多样的临床表现缺乏系统思考，局限于专科问题分析。结论：提高对多发性骨髓瘤的认识，抓住要点、及时进行相关检查，才能降低多发性骨髓瘤的误诊率。     

宫腔镜检查对诊断异常子宫出血的诊断价值

目的：了解宫腔镜检查在异常子宫出血中的诊断价值。方法：应用宫腔镜检查异常子宫出血患者75例．并将检查结果与病理诊断结果进行比较。结果：宫腔镜诊断异常子宫出血的敏感度为94．1％．特异度为75．0％,阴性预测值为85．7％,阳性预测值为88.9％。结论：宫腔镜检查异常子宫出血．可提高对子宫内膜萎缩、慢性炎症、子宫粘膜下肌瘤及子宫内膜息肉的诊断率。尽管对子宫内膜增生过长及子宫内膜癌的敏感性与单纯诊刮相似．但可观察到更详细的形态学变化。     

心肌炎患者血清免疫球蛋白游离轻链检测及其临床意义

目的 了解心肌炎患者血清免疫球蛋白游离轻链(FLC)水平变化及其临床意义.方法 采用免疫速率散射比浊法测定28例心肌炎患者(观察组)、20例健康成年人(对照组)血清FLC水平,通过ROC曲线法评估FLC对心肌炎的诊断效率,比较高低FLC水平患者中不良事件发生率.结果 观察组λ型FLC水平高于对照组,而K/λ比值低于对照...     

斑点叉尾鮰血清免疫球蛋白纯化及其结构分析

通过饱和硫酸铵分步盐析结合柱层析纯化温和气单胞菌免疫的斑点叉尾鮰血清免疫球蛋白(Ig)，结果表明，斑点叉尾鮰血清Ig主要分布在35％～55％的硫酸铵沉淀区间；而在Sepharose-4B凝胶柱和DEAE-52阴离子交换柱层析纯化的Ig均出现在第1个蛋白质峰。SDS—PAGE分析表明，纯化后的血清Ig纯度提高。通过变性还原、变性非还原和非变性非还原3种条件下的免疫印迹(Westernblot)试验对血清Ig的结构进行初步分析，发现SDS变性还原条件下血清Ig重链分子量为72kD，轻链有3条，其分子量分别为21kD、23．5kD和26kD；在变性非还原条件下血清Ig则出现多种结构形式，主要条带的分子量分别为760kD、525kD、330kD和230kD；而在非变性非还原条件下Ig仅出现一种结构形式，分子量约为870kD。     

学龄前儿童不明原因发热103例临床分析

目的：探讨学龄前儿童不明原因长期发热(FUO)的病因及诊断方法。方法：对符合FU0诊断标准的学龄前患儿103例作一回顾性分析。结果：103例学龄前患儿经各种检查或特异性治疗，最后明确诊断者95例。确诊率92．2％；感染性疾病41例，占39．8％，其中结核病18例。占感染性疾病的43．9％；结缔组织病36例，占35．0％；肿瘤11例，占10．7％；其他疾病7例，占6．8％；原因不明8例，占7．8％。结论：感染性疾病、结缔组织疾病及肿瘤是学龄前患儿FUO的主要原因，根据临床症状和必要的辅助检查可以明确大多数FUO的病因。     

欧洲鳗鲡免疫球蛋白阳性细胞的组织化学定位与分布特点

采用蛋白A亲和层析法分离纯化欧洲鳗鲡(Anguilla anguila,欧鳗)血清免疫球蛋白(Ig),制备其特异性兔抗血清,并运用免疫组织化学技术研究了嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染的试验组鳗鲡和未经感染的对照组鳗鲡脾脏、肾脏和肝脏Ig阳性(Ig )细胞定位与分布特点.结果表明:纯化后的Ig经SDS-PAGE检测含有分子质量约68 ku重链和26 ku轻链的2条清晰蛋白条带,由其制备的兔抗Ig血清效价达1:51 200.对照组欧鳗脾脏Ig 细胞数较少,肾脏相对较多,肝脏未发现.试验组欧鳗脾脏Ig 细胞数量明显比对照组增多,肾脏中有所增多但不明显,肝脏中未发现.在试验组和对照组中,黑色素巨噬细胞在脾脏和肾脏中均见明显聚集并与淋巴细胞形成黑色素巨噬细胞中心(melano-macrophage centres,MMCs),其中脾脏MMCs多数位于血管附近,脾脏Ig 细胞均主要分布在MMCs及其周边,且在试验组中数量多而密集,而肾脏Ig 细胞在对照组中明显分布于MMCs及其周边,但在试验组不明显.与对照组相比,试验组中脾脏和肾脏黑色素巨噬细胞数量和体积均有明显增多.试验结果说明欧鳗肾脏和脾脏是具有Ig 细胞的重要免疫器官,其中黑色素巨噬细胞数量和体积变化与免疫应答过程密切相关.     

Density gradient separation of marrow cells restricted for antibody class

Primitive cells of (C3H x C57BL/10)F(1) mouse bone marrow, participating with thymocytes in immune responses to sheep erythrocytes, are already committed to the immunoglobulin M or immunoglobulin G antibody class. By equilibrium centrifugation in discontinuous gradients of bovine serum albumin, cells responsible for production of IgM immunocytes migrate to the denser regions, whereas those responsible for IgG immunocytes remain in the lower density regions.     

Density gradient separation of marrow precursor cells restricted for antibody specificity

Potentially immunocompetent cells of (C57BL/6 x DBA/2) F(1) mouse bone marrow are committed to antigenic determinants of sheep or burro erythrocytes prior to interaction with thymus-derived cells and participation in immune responses to administered antigens. At this stage of differentiation marrow cells of this particular mouse strain are not yet restricted for the immunoglobulin M or immunoglobulin G antibody class. By equilibrium centrifugation in discontinuous gradients of bovine serum albumin, precursors of cells that produce antibody to sheep erythrocytes migrate to denser regions, whereas the precursors of immunocytes that produce antibody to burro erythrocytes remain in the lower density regions. cursors for all specificities.     

Human CD4 binds immunoglobulins

T cell glycoprotein CD4 binds to class II major histocompatibility molecules and to the human immunodeficiency virus (HIV) envelope protein gp120. Recombinant CD4 (rCD4) bound to polyclonal immunoglobulin (Ig) and 39 of 50 (78%) human myeloma proteins. This binding depended on the Fab and not the Fc portion of Ig and was independent of the light chain. Soluble rCD4, HIV gp120, and sulfated dextrans inhibited the CD4-Ig interaction. With the use of a panel of synthetic peptides, the region critical for binding to Ig was localized to amino acids 21 to 38 of the first extracellular domain of CD4. CD4-bound antibody (Ab) complexed with antigen approximately 100 times better than Ab alone. This activity may contribute to the Ab-mediated enhancement of cellular HIV interaction that appears to depend on a trimolecular complex of HIV, antibodies to gp120, and CD4.     

“新吉富”罗非鱼免疫球蛋白单克隆抗体的制备及其在免疫效果评价上的应用

制备了"新吉富"罗非鱼血清免疫球蛋白IgM单克隆抗体(McAb)并进行了特性分析,以血清IgM McAb为基础,建立了IgM捕获ELISA检测方法.采用亲和层析法纯化健康"新吉富"罗非鱼IgM,纯化蛋白经SDS-PAGE检测,重链、轻链的相对分子质量分别为75~78、23~25 ku;以纯化的IgM为抗原制备IgM McAb,制备McAb杂交瘤细胞株系3株,分别命名为2H5、2D4、2B11,抗体亚型均为IgM,小鼠腹水效价分别为1.0×10~(-5)、1.0×10~(-4)、1.0×10~(-5),对IgM敏感度测定表明,2H5、2D4、2B11检测灵敏度分别为31.25、125.00、62.50 ng.以抗罗非鱼IgM McAb包被酶标板,建立IgM捕获ELISA检测方法.以无乳链球菌灭活疫苗免疫罗非鱼,受免血清按建立的IgM捕获ELISA方法检测特异性抗体,结果表明,建立的IgM捕获ELISA检测方法可应用于免疫应答抗体水平分析.     

Generation and analysis of interleukin-4 deficient mice

Interleukin-4 (IL-4) promotes the growth and differentiation of many hematopoietic cells in vitro; in particular, it directs the immunoglobulin (Ig) class switch to IgG1 and IgE. Mice homozygous for a mutation that inactivates the IL-4 gene were generated to test the requirement for IL-4 in vivo. In the mutant mice T and B cell development was normal, but the serum levels of IgG1 and IgE were strongly reduced. The IgG1 dominance in a T cell-dependent immune response was lost, and IgE was not detectable upon nematode infection. Thus, some but not all of the in vitro properties of IL-4 are critical for the physiology of the immune system in vivo.     

Circulating autoantibodies to the 200,000-dalton protein of neurofilaments in the serum of healthy individuals

There is substantial evidence that human serum contains antibodies to many autoantigens. For example, all healthy people have autoantibodies (immunoglobulin M) to some undefined brain antigens. In this study immunoblots and immunohistochemical staining were used to detect antibodies to neural tissues in serum samples from 200 healthy people and 200 patients with various neurological diseases. Ninety-nine percent of the 400 subjects had serum immunoglobulin M and 95 percent had immunoglobulin G that bound to a 200-kilodalton protein in homogenates of neural tissues. In most cases there were no antibodies to anything else in the homogenates. The 200-kilodalton protein was the heaviest of the neurofilament triplet proteins. These observations do not support a role for antibodies to the 200-kilodalton protein of neurofilaments in the pathogenesis of neurological diseases.     

Bone marrow: the bursa equivalent in man?

Human bone marrow lymphoid cells, particularly when enriched with plasma cells, as in multiple myeloma, respond to pokeweed mitogen and to antiserum to immunoglobulin but not to phytohemagglutinin. Cells of patients with X-linked agammaglobulinemia of the bursal deficient type failed to respond to either pokeweed or to the antiserum to immunoglobulin. Leukocytes of the agammaglobulinemia patients however responded in a normal fashion to phytohemagglutinin. Just as the in vitro response to phytohemagglutinin is taken as an index of the thymus-dependent system, the in vitro response to both antiserum to immunoglobulin and pokeweed may be considered an index for the bursaldependent system. Human bone marrow, therefore, contains bursal cells and probably very few or no thymus cells.     

抗大片吸虫分泌排泄抗原单克隆抗体制备

【目的】制备大片吸虫分泌排泄抗原单克隆抗体,为大片吸虫病的免疫诊断、防治等研究奠定基础。【方法】利用杂交瘤技术,以大片吸虫分泌排泄抗原为免疫原制备单克隆抗体,并用ELISA、硫氰酸盐洗脱法等方法鉴定其生物学特性。【结果】通过间接ELISA筛选及3次亚克隆后,共获得5株大片吸虫分泌排泄抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为6D3、6B4、7D2、7D1和7D4。经鉴定,发现5株杂交瘤细胞染色体数为90～110条,均大于亲本细胞,其亚类鉴定分别属于IgG2b、IgM、IgM、IgG1和IgM,其轻链均为κ型;5株单克隆抗体（6D3、6B4、7D2、7D1、7D4）的上清效价分别为1∶400、1∶3200、1∶25600、1∶6400和1∶6400,腹水效价分别为1∶104、1∶104、1∶105、1∶107和1∶106;而表位测定结果表明,5株单克隆抗体中,6D3与7D1、7D2以及7D4与7D1、7D2作用于不同表位,6D3与6B4 可能识别同一表位或重叠表位,或同一表位有空间位阻,7D4与6D3以及6B4与7D4、7D1、7D2可能具有空间位阻;5株单克隆抗体的相对亲和力为：6B4＞7D4＞7D1＞6D3＞7D2;5株杂交瘤细胞株均能稳定地分泌单克隆抗体。【结论】制备获得的分泌排泄抗原单克隆抗体可用于大片吸虫病的诊断和免疫机理等方面的进一步研究。     

基于免疫分析的杏仁蛋白饮料中杏仁蛋白质定量方法研究

为建立基于竞争酶联免疫分析(ELISA)的杏仁蛋白饮料中杏仁蛋白质定量方法,使用2-D电泳结合MALDI-TOF/MS鉴定了杏仁的高丰度蛋白,分离纯化了杏仁40 ku prunin蛋白α链,并以此作为抗原制备了抗杏仁蛋白单克隆抗体,使用该抗体建立了检测杏仁蛋白质的竞争酶联免疫分析方法。该方法以杏仁可溶全蛋白作为标准品,IC50为19.6μg/m L,线性范围为5.0~100μg/m L(R2=0.990)。该方法特异性良好,和其他可食种子蛋白质无交叉反应。检测植物蛋白饮料样品的检出限为0.6 mg/m L,相对标准偏差10%。使用巴氏杀菌、超高温瞬时灭菌和高压灭菌的蛋白质平均回收率分别为96%、92%和81%。