花生AFLP-银染体系的建立与优化

通过对影响花生AFLP-银染技术体系的关键因素作对比研究,建立了一套优化的花生AFLP分子标记体系,该体系在应用于花生AFLP研究时,能够得到清晰的分子标记图谱,实验结果重复性好,稳定可靠.优化的关键因素为①采用细玻璃棒勾取DNA,而非离心的方法,可得到高纯度大分子量的DNA样品;②酶切DNA模板为300rng③酶切体系中,EcoRI和MseI分别加入4U,使用NEBbuffer 2;④连接最适温度为16℃过夜⑤预扩时PCR循环预变性时间为1min;⑥预扩产物最佳稀释倍数为75倍.     

AFLP分子标记及其在茶树遗传育种中的应用

AFLP是发展起来的一种新的DNA分子标记技术，该技术原理简单，既具RFLP技术的可靠性，又具有RAPD技术的高效性，可广泛应用于植物遗传标记分析和分离植物基因等研究。本文介绍了AFLP分子标记的基本原理和技术流程。对AFLP分子标记在茶树领域中的应用做了综述并对其应用前景做了展望。     

马铃薯青枯病抗性AFLP图谱的初步研究

通过温室单株抗病性的鉴定,选出了三个能够作为马铃薯青枯病分子标记辅助选择抗病育种的亲本。利用AFLP分子标记的方法检测了它们基因组的DNA的多态性,并构建了其AFLP图谱,且有望应用于标记辅助的选择育种。     

AFLP分子标记在小麦种质资源研究中的应用

AFLP(扩增性片段长度多态性 )是一种新的DNA分子标记 ,近年来广泛应用于小麦种质资源遗传多样性研究、种质指纹图谱构建及遗传材料鉴定、小麦遗传连锁图谱的构建、目的基因的分子定位、分子标记辅助选择以及基因表达调控与克隆研究等方面。本文对AFLP在小麦种质资源研究中的应用进展及前景进行了综述     

基于BSA分析法的分子标记基因定位技术在农作物中的应用

进行基因的标记定位有利于推动分子标记辅助育种在生产上的应用,同时它也可以为基因的图位克隆奠定基础。BSA(集团分离分析法,bulkedsegregation analysis)分析法是对基因进行标记定位的非常实用的方法,它首先利用从一对具有表型差异的亲本所产生的任何一种分离群体构建具有目标性状差异的近等基因池,选择合适的分子标记对两基因池进行分子标记的筛选,筛选出的分子标记再经多个单株鉴定,从而找到与目标基因连锁的分子标记。可与BSA相结合用于基因定位的分子标记有多种,常用的分子标记有RFLP(限制性片段长度多态性,RestrictionFragm entLength Polym orphism),RAPD(随机扩增多态性DNA,Random Am plified Polym orphism DNA),AFLP(扩增片段长度多态性,Am plified Fragm entLength Polym orphism),SSR(简单重复序列,Sim pleSe-quenceRepeats)等,本文根据所用的分子标记种类对基于BSA分析法的基因定位技术进行了概述。     

基于BSA分析法的分子标记基因定位技术在农作物中的应用

进行基因的标记定位有利于推动分子标记辅助育种在生产上的应用，同时它也可以为基因的图位克隆奠定基础。BSA（集团分离分析法，bulked segregation analysis）分析法是对基因进行标记定位的非常实用的方法，它首先利用从一对具有表型差异的亲本所产生的任何一种分离群体构建具有目标性状差异的近等基因池，选择合适的分子标记对两基因池进行分子标记的筛选，筛选出的分子标记再经多个单株鉴定，从而找到与目标基因连锁的分子标记。可与BSA相结合用于基因定位的分子标记有多种，常用的分子标记有RFLP（限制性片段长度多态性，Restriction Fragment Length Polymorphism），RAPD（随机扩增多态性DNA，Random Amplified Polymorphism DNA），AFLP（扩增片段长度多态性，Amplified Fragment Length Polymorphism），SSR（简单重复序列，Simple Sequence Repeats）等，本文根据所用的分子标记种类对基于BSA分析法的基因定位技术进行了概述。     

燕麦光周期不敏感基因的分子标记

为了寻找燕麦光周期不敏感基因的分子标记,本研究采用SSR及AFLP标记对来自加拿大和中国的22份燕麦材料进行了DNA指纹分析及光周期不敏感基因的分子标记研究。结果表明,所选6对燕麦SSR引物中有3对扩增出多态性高的条带,通过带型分析可以将所研究的多数燕麦品种区分开,所选的10对大麦SSR引物和4对小麦SSR引物在22个燕麦品种中多态性不高,不能将不同燕麦品种区分开来。同时利用AFLP标记对其中5个不同熟期的燕麦材料进行了分析,64对AFLP引物组合经选扩共获得18 240个条带,平均57条/引物组合。统计分析AFLP图谱,获得品种特异条带20条,可将各燕麦品种区分开。此外获得光周期不敏感燕麦品种特异条带2条,可作为燕麦光周期不敏感基因的相关分子标记。     

AFLP分子标记及其在禾本科作物遗传改良中的应用

AFLP是一种最新发展起来的DNA分子标记技术，它将RFLP和PCR相结合，能更好地检测DNA的多态性，被认为是迄今为止最有效的分子标记技术。禾本科作物与人类的生存和生活密切相关，对其在DNA水平上的研究具有重要的理论和实践意义。本文就AFLP的基本原理、基本反应程序作一简要介绍，并着重论述AFLP在禾本科作物遗传改良中的应用。     

SSR和AFLP分子标记鉴定巴西橡胶树种质资源的比较研究

选用178份巴西橡胶树种质材料,采用SSR和AFLP分子标记技术对巴西橡胶树种质资源进行鉴定,探讨2种方法的应用效果并加以比较分析。结果显示:利用多态性强的19对SSR引物,检测到92个等位基因;用25对AFLP引物组,检测到702条有多态性的带。SSR位点的平均多态性信息量(PIC)值为0.46,而AFLP多态性带比例是54.88%,AFLP比SSR分子标记具有更高的多态性。结果说明,AFLP标记比SSR标记更适合于巴西橡胶树种质材料的鉴定和保护,同时进一步验证了在作物遗传资源的研究中,采用多种分子标记方法可以获得更加准确的研究数据。     

柱花草AFLP反应体系的建立与引物筛选

以柱花草奥克雷品种为材料，采用改良的CTAB法提取基因组DNA，对影响AFLP反应体系的主要因素进行了优化，建立了柱花草的AFLP反应体系。结果表明：20 μL为最佳反应体系，酶切体系中DNA模板量为1 000 ng，用5 U EcoR I 37℃酶切2 h、5 U Mse I 65℃酶切2 h效果最佳；分别取5 μL酶切液、1 μL T4连接酶(5 μL/L)、1 μL EcoR I接头、1 μL Mse I接头、2 μL缓冲液(T4DNA酶自带)，于22℃下连接10 min效果最佳；预扩增体系中模板稀释15倍、Mg2+浓度为0.75 mmol/L、Taq酶用量为1 U、dNTPs浓度为0.2 mmol/L、引物浓度为2 ng/μL效果最佳；选择扩增体系中模板稀释20倍、Mg2+浓度为1.25 mmol/L、Taq酶为1 U、dNTPs浓度为0.225 mmol/L、引物浓度为0.4 ng/μL效果最佳。利用热研5号、奥克雷2个品种对8对引物组合进行筛选，筛选出46对引物组合，为利用AFLP标记对柱花草进行分子生物学研究及分子育种奠定基础。     

花生DNA分子标记的研究工花生AFI——Ⅰ分析技术体系的建立与作图杂交亲本的筛选

由于缺乏传统遗传标记，花生遗传连锁的报道极为罕见，迄今未发表经典的遗传图谱。发展稳定可靠的AFLP标记，将为基因分型应用于新品种保护、良种保纯、杂种鉴定和种质资源研究提供强有力的技术支撑。研究在建立适合花生AFLP分析的DNA提取流程的基础上，建立了花生AFLP分析的技术方案。AFLP分析结果表明，6个花生杂交亲本间存在一定差异。四对引物共计扩增出307条长度不同的条带。其中多态性条带为160条，占总条带数的52．1％。本研究筛选获得了多态性程度高的杂交亲本，为进一步构建分子连锁图谱创造了条件。     

DNA分子标记在茶树种质资源鉴定中的应用

分子标记具有多态性高、检测手段简单迅速、无基因多效性、能够明确辨别等位基因、实验重复性好等优点。目前最常用的分子标记技术主要有限制性片段长度多态性技术（restriction fragment length polymorphism，简称RFLP）、随机扩增多态性DNA技术（randomom amplified polymorphic DNA，简称RAPD），微卫星DNA技术（inter—Simple Sequence Repeat，简称ISSR）、扩增片段长度多态性技术（Amplified Fragment Length Polymorphism，简称AFLP）等。分子标记技术在茶树研究中得到了广泛的应用，在茶树遗传多样性、种质资源保护、遗传图谱的构建、基因定位与辅助选择育种、指纹图谱应用于作物品种鉴定等研究方面均取得较好的应用效果。     

甘蓝型油菜渝黄1号黄籽性状的AFLP和SSR标记

以甘蓝型黄籽杂交油菜渝黄1号为试验材料,用F2群体中的9株黑籽单株和12株黄籽单株的DNA分别构成黑籽集团和黄籽集团.通过BSA法筛选了96个AFLP引物组合和173对SSR引物,鉴定出与显性黄籽基因连锁的1个AFLP标记E35M52180和1个SSR标记P039230,标记与显性黄籽基因的交换率分别为4.9%和2.5%.此外还发现1个SSR标记P055240与深色种皮有关.     

四倍体杂交冰草AFLP遗传连锁图谱的构建

为给冰草抗性及产量等重要性状QTL定位及分子标记辅助育种等研究奠定基础,以四倍体杂交冰草的347个F2代单株及其亲本为材料,利用AFLP分子标记技术构建四倍体冰草的分子遗传连锁图。结果表明,本研究首次成功构建出1张密度较高的四倍体杂交冰草分子遗传连锁图谱,该图谱包含14个连锁群,572个标记,各连锁群长度范围为129.75~214.90cM,覆盖基因组总长度2 266.59cM,标记间平均间距4.13cM。     

太空诱变玉米雄性不育突变体的DNA-AFLP分析

利用AFLP标记及克隆测序技术对太空诱变玉米雄性不育突变体的基因组DNA进行分析,寻找与不育性状紧密连锁的分子标记。在供试的56对引物中,32对引物能够扩增出稳定、清晰的条带,4对引物能够在不育株和可育株之间扩增出多态性条带。通过对多态性片段的回收、克隆测序及序列分析结果表明,不育株特有的条带(Zmd1-302)与玉米基因组的克隆(AC187265)和玉米雄配子cDNA文库中的EST序列(gi33771201)同源性都很高,推测该片段和玉米太空诱变核不育之间的育性差异有关。将具有多态性的AFLP标记转化为SCAR标记,3对SCAR引物在8个不育单株和8个可育单株中均有扩增,通过聚丙烯凝胶电泳未检测到不育和可育之间的长度多态性,序列比对分析发现不育与可育之间存在多个单碱基差异。     

AFLP分子标记技术及其在茶树上的应用

本文介绍了AFLP分子标记技术的基本原理、特点和技术流程。对AFLP分子标记在茶树种质资源鉴定与分类、遗传多样性、亲缘关系的建立和遗传图谱的构建等方面的应用进行了概述，并对其存在的问题和在茶树领域的应用前景进行了分析。     

大麻研究中的分子标记应用

本文综述了以PCR技术为基础的RAPD、AFLP、ISSR、STR、IGS等DNA分子标记技术在大麻遗传变异、品种鉴定与来源推断等方面的应用进展。并提出了一些值得注意的问题以及今后可能的发展方向。