巴西橡胶树胶乳亮氨酸氨肽酶基因克隆及表达

以巴西橡胶树(Hevea Brasiliensis)无性系热研7-33-97的胶乳为材料,根据已报道的植物亮氨酸氨肽酶基因的保守序列设计简并引物,应用RACE技术克隆同源基因(HbLAP1).用生物信息学软件(DNA-MAN,DNAStar,ScanProsite,ClustalW)对HbLAP1进行生物信息学分析,通过Northern-blot分析HbLAP1的表达.结果表明,HbLAP1的cDNA全长1 985 bp,包括1个1 581 bp的阅读框,编码526个氨基酸的蛋白质,一个105 bp的5'非编码区和一个299bp的3'非编码区(括16个腺苷酸尾巴);HbLAP1是一种可溶性的细胞质氨肽酶结构域,割胶显著下调舶HbLAP1的表达.HbLAP1可能是乳管细胞茉莉酸信号途径的负调控因子.     

巴西橡胶树HbMlo8基因的功能研究

Mlo基因是植物体内具有负向调控功能的一类基因。为揭示Hb Mlo8基因在橡胶树中的功能,分析了该基因在巴西橡胶树不同组织中的表达情况,在机械损伤、干旱、白粉菌侵染、ABA、ETH、JA和H_2O_2处理下的表达模式。结果表明:Hb Mlo8基因在橡胶树的树皮、胶乳、花和叶中均有表达,主要在树皮和花中表达。机械损伤、干旱、白粉菌侵染均会使Hb Mlo8在橡胶树叶片中的表达量显著上调。橡胶树叶片中Hb Mlo8基因在ETH处理早期下调表达,处理10 h后开始显著上调。在ABA、H_2O_2和JA处理下,Hb Mlo8基因均呈现下调表达现象。说明Hb Mlo8可能参与橡胶树对白粉菌和非生物胁迫的响应过程以及激素信号转导路径,为阐明Hb Mlo8基因在橡胶树生长和逆境响应机制中的功能研究打下良好基础。     

巴西橡胶树生物膜的冷害

采用电子显微镜技术和酶的细胞化学法研究巴西橡胶树冷害生物膜结构的变化.实验结果表明:在零上低温下各种细胞器膜系都遭到不同程度的损伤,但是质膜是细胞各种膜体系中对冷害最敏感的部位.膜的损害有三种形式:(1)双分子膜解体和消失;(2)生物膜发生液化作用;(3)双分子膜的撕开.膜蛋白和膜脂都遭受低温的伤害.膜各种形式的伤害原因可能不同.     

国外巴西橡胶树死皮的研究

防治橡胶树死皮迄今仍是世界难题。根据现有文综述国外对橡胶树死皮的症状、分类、病因和防治等方面的研究。     

巴西橡胶树乳管分化的研究

巴西橡胶树的乳管组织，是决定橡胶产量的是最重要的结构成份。人们一直从两个方面来研究乳管分化，即乳管分化的细胞学和植株内外固子对乳管分化的影响。我们认为，在这些研究中，最值得注意的结果，是采胶对乳管分化的影响。有证据表明，排胶促进乳管分化和原有全部成熟乳管的死亡或去除导致形成密集乳管。据此，我们假定在已有的成熟乳管中存在有抑制将来乳管分化的物质。我们相信，这一假定是深入研究这分化的一个可能的途径。     

巴西橡胶树性器官加倍技术的研究

利用秋水仙素对巴西橡胶树性器官进行加倍诱导,获得二倍性的大小孢子,研究结果表明：（１）处理后外部形态变异与器官加倍具有相关性,（２）采用包棉花法,秋水仙素浓度为０．２５％,有较高的诱导率。（３）同一雄花各花药加倍可以同步,同一花药中粉的加倍率可达１００％。     

巴西橡胶树抗风研究进展

从品种(系)抗风性评价、抗风力影响因素,以及抗风性早期预测等3个方面,综述巴西橡胶树抗风研究的最新进展,为巴西橡胶树抗风性的深入研究及抗风品种选育提供参考。     

巴西橡胶树胶乳蛋白质组学研究综述

巴西橡胶树胶乳高速离心后大致可分为橡胶粒子、C-乳清和黄色体3种组分，这些组分中含有约200种不同的蛋白质。随着蛋白质组学的发展，巴西橡胶树胶乳蛋白质组学的研究已相继展开。本文综述近年来巴西橡胶树胶乳蛋白质组学的研究，提出了其存在的问题并进行了展望。     

巴西橡胶树种子超微结构的研究

利用透射电镜技术研究了巴西橡胶树成熟种子的超微结构。刚脱落的成熟种子在代谢上是活跃的，它的胚芽和胚根细胞具有大的核仁、很多聚核糖体和大量的粗糙内质网，同时胚轴、子叶和外胚乳细胞的液泡化程度较高。成熟脱落的种子在２４℃、８５％相对湿度存放３ｄ后，它的细胞内已开始了超微结构的萌发过程，胚细胞中线粒体数目明显增多，子叶和外胚乳中的淀粉粒、贮藏蛋白质和类脂体开始降解，与种子的这种生理状态一致，子叶和外胚乳     

巴西橡胶树气刺割胶中不同刺激位置的生理效应

以常规割胶(1/2阳线割胶)为对照,比较分析了气刺割胶条件下不同刺激位置对干胶产量,胶乳中干胶、蔗糖、硫醇、无机磷、镁离子含量以及黄色体破裂指数等生理参数的影响。结果表明,除了在阳线上方进行刺激的处理外,其它处理的产量以及蔗糖、硫醇、无机磷含量均高于对照,干胶含量、镁离子含量和黄色体破裂指数均低于对照;其中在阴线上方刺激的处理产量最高,生理状况良好,显示出了良好的产胶潜力。     

橡胶苗光合“午休”现象探讨

用Li-6400便携式光合分析系统,对生长季节的橡胶树实生苗与嫁接苗在自然条件下进行各项光合生理指标的测定,研究其光合“午休”现象的生理机制。结果表明,午后的强光、高温及相对湿度的下降是造成午后光合下降的主要生态因素;而蒸腾速率、气孔导度、表观羧化效率、表观量子效率、光化学效率的下降是光合“午休”现象的生理生化因素。因此认为,光合“午休”现象由外界生态因子和植物内在生理生化因素共同影响。     

温度对巴西橡胶树微体繁殖的影响

进行了温度对巴西橡胶树（Hevea brasiliensis)微体繁殖影响的研究。以巴西橡胶树的腋芽和顶芽为外植体，分别在26，28和30℃3种温度下进行组织培养，定期观测萌生枝的高度、直径、数量等多项指标。结果表明：在培养第50天时，腋芽繁殖系数26℃的2.6提高到28℃和30℃的4.6，提高了76.9%，在同样情况下，28-30℃的顶芽繁殖系数比26℃的提高50%左右；28℃的萌生枝直径略大于30℃和26℃的，30℃和28℃的萌生枝和萌动芽数量大于26℃的；30℃的枯顶数量略大于28℃和26℃的。综合指标说明：培养温度以28℃最佳，继代1次时间不宜超过50d。     

橡胶树籽苗芽接苗不同物候期的光合特性

在适宜温度(28.5 0.5)℃,相对湿度(75 5)%和正常大气CO2浓度条件下,采用活体测定方法,在不同物候期,对橡胶树籽苗芽接苗砧木和接穗第1蓬叶的光合特性进行了研究。结果表明,橡胶树籽苗芽接苗砧木和接穗第1蓬叶的光合特性变化规律基本相似,从变色期、淡绿期、稳定期,到衰老期,其叶片的表观量子效率(α)、最大净光合速率(Pmax)、光饱和点(PSLI)和叶绿素含量(CHL)等均随着物候期变化而不断变化,变化趋势为先迅速升高,达到最高值后缓慢下降;光补偿点(LCP)的变化趋势则相反。不同物候期的光补偿点和光饱和点有较大的差异,光补偿点为12￣78μmol/(m2·s),光饱点为256￣1109μmol/(m2·s)。与砧木相比,接穗有较高的光饱和点和较低的光补偿点。     

巴西橡胶树专利现状分析

从时间、研究领域、申请人地域分布3个方面对巴西橡胶树全球以及中国专利申请数据进行分析,并从时间、研究领域、申请人类型3方面对国内发明专利申请情况再次进行分析。结果发现：全球以及中国专利申请量虽波动起伏,但整体呈上升趋势,且主要集中在植物保护和农业生物技术领域;中国发明专利的国内申请人主要为科研单位且集中在植物保护、农业生物技术和农产品加工领域;国外申请人主要为企业且集中在植物保护领域。分析结果为中国天然橡胶产业发展政策的制定提供数据参考。     

巴西橡胶树多聚遍在蛋白基因的表达分析

研究中发现橡胶树胶乳中的橡胶粒子膜上存在遍在蛋白（Ubiquitin)，天然橡胶就是在橡胶粒子上合成的，一些与橡胶合成相关的酶或蛋白就位于橡胶粒子膜上，为了探讨多聚遍在蛋白（Polyubiquitin)基因在天然橡胶合成中可能的调节作用，对橡胶树Polyubiquitin基因的表达进行了研究，Northern blot分析表明，Polyubiquitin基因在橡胶树叶片，树皮和胶乳中都表达，在胶乳中的表达量比叶片和树皮中的高。用外源乙烯和茉莉酸处理的末开割橡胶树和开割橡胶树进行处理后，均可引起Polyubiquitin基因表达增强，未开割橡胶树对外源乙烯和茉莉酸处理比开割橡胶树的反应敏感。     

巴西橡胶树葡萄糖/核糖醇脱氢酶基因的克隆和表达分析

割胶显著刺激新开割橡胶树胶乳产量,前期的比较蛋白质组学的研究中,已通过双向电泳的方法分离到一个随割胶下调的葡萄糖/核糖醇脱氢酶(GRDH,glucose/ribitol dehydrogenase)。通过搜索本实验室的橡胶树EST数据库和PCR扩增得到该蛋白点对应的全长c DNA序列并命名为Hb GRDH1。序列分析显示,c DNA的编码序列(CDS)为882 bp,推测编码294个aa,分子量大小为32.2 ku,等电点为5.18,基因组序列包含4个外显子和3个内含子。通过Realtime PCR和Solexa高通量转录组测序分析发现,Hb GRDH1主要在胶乳和雌花中表达,在叶片发育稳定期呈现明显的下调表达趋势;在新开割树胶乳中,前4刀该基因表达变化不明显,而第5刀开始呈现上调表达趋势;在胶乳中,乙烯利处理对该基因表达前12 h无明显影响,在24 h时呈明显的下调表达。本研究结果有助于进一步阐明橡胶树中Hb GRDH1基因的功能,特别是其参与橡胶树胶乳再生调控的分子机理。     

橡胶树人工多倍体染色倍性研究

以经秋水仙素诱导成功的少垦2和PR107品系16a树龄的橡胶树人工多倍体无性系（处理）和其亲本二倍体（对照）植株为材料，分析多倍体橡胶树细胞染色体倍性的组成情况和纯合程度，并分析比较多倍体与二倍体之间及其树间和部位间细胞染色体倍性组成的差异情况。结果表明：（1）这2个品系的多倍体植株系由多种染色体倍性的细胞嵌合在一起构成，且以多倍细胞为主；在植株之间或部位间，这些不同倍性细胞的比例结构或嵌合程度差异很大；经过16a的生长，这些橡胶树多倍体的三倍细胞比例明显增加，而相应的四倍细胞比例大幅度下降，四倍细胞有逐渐向三倍细胞转化的趋势。（2）对照的2个品系的亲本二倍体各植株以及植株内的各部位的细胞，基本上是二倍体，细胞染色体倍性较纯合，植株间和部位间各种染色体倍性细胞比例差异均不显著。本上是二倍体，细胞染色体倍性倍性较纯合，植株间和部位间各种染色体倍性细胞比例差异均不显著。     

橡胶树人工多倍体的形态性状与产胶特征

以经秋水仙素诱导成功的海垦2、PR107和RRIM6003个品系多倍体(处理)为材料,以它们的亲本二倍体为对照,研究16a树龄橡胶树人工多倍体无性系的形态特征和干胶含量。结果表明:3个橡胶品系具有多倍体的形态特征,又表现出嵌合性。它们的树围、生势不及相应的二倍体,干胶含量也不优于二倍体。大多数多倍体植株的树干表面呈现不同程度的隆凸或凹陷。叶片的叶形指数、一级侧脉数、主脉导管列数、栅栏组织厚度、海绵组织厚度和叶片厚度6个主要性状在多倍体与二倍体之间均存在显著或极显著差异,体现了多倍体与二倍体之间的差异性;但在多倍体的植株间或部位间以及二倍体的植株间或部位间,表现出来的差异性错综复杂,无一定的规律性。多倍体树皮结构与二倍体的差异也很明显,如多倍体射线较二倍体的少,射线细胞较宽,树皮弦切面上的“网眼”(多列射线排列成的梭状结构)较宽、形状不规则、排列较混乱等。      

巴西橡胶树胶乳中4种植物生长物质的测定

采用酶联免疫检测技术和气相色谱法测定了巴西橡胶树胶乳中生长素(IAA)、细胞分裂素(iPAs)、脱落酸(ABA)和乙烯(ET)等4种植物生长物质的含量。结果表明:利用酶联免疫检测技术可检测到巴西橡胶树胶乳中含有较多的IAA,iPAs,ABA。采用气相色谱法(TraceGC气相色谱仪和GC-9V气相色谱仪)可检测到用乙烯利刺激割胶的成年割胶树胶乳中的ET,但在未开割幼树胶乳中未能检测到内源ET。在巴西橡胶同一茎段一定长度范围内,不同的采胶位置IAA,、ABA含量的差异不显著,表明它们量的分布没有位置效应。