过氧化氢诱导斜带石斑鱼原代肝细胞氧化损伤模型的构建

本试验以斜带石斑鱼原代培养肝细胞为研究对象,以过氧化氢为刺激源,以肝细胞存活率和抗氧化指标的变化为判断指标,旨在建立稳定的斜带石斑鱼原代肝细胞氧化损伤模型。在原代肝细胞培养液中分别添加0(对照)、100、200、400、600、800和1 000μmol/L过氧化氢,使之分别作用2、4、6、8、12和24 h,共42组,每组10个重复,测定肝细胞存活率。在得出适宜过氧化氢作用时间的基础上,使每个浓度的过氧化氢(每个过氧化氢浓度设6个重复)作用于肝细胞适宜时间后,收集肝细胞和培养液测定抗氧化指标,筛选使肝细胞发生氧化损伤的适宜过氧化氢作用浓度。结果显示:800μmol/L过氧化氢作用肝细胞8 h,斜带石斑鱼肝细胞的存活率降低至61.98%;800和1 000μmol/L组与其他各组相比,肝细胞超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶(600μmol/L组除外)和过氧化氢酶活性显著降低(P0.05),丙二醛与脂质过氧化物含量显著升高(P0.05),但800和1 000μmol/L组之间差异不显著(P0.05)。以上结果表明,过氧化氢作用浓度为800μmol/L、作用时间为8 h,可作为建立斜带石斑鱼肝细胞氧化损伤模型的适宜条件。     

过氧化氢诱导的草鱼原代肝细胞氧化损伤模型的构建及其对天然植物抗氧化能力的评价

本试验旨在探讨过氧化氢(H2O2)诱导草鱼原代肝细胞体外氧化损伤模型的建立条件,并利用所构建的模型评价8种天然植物的抗氧化能力.采用噻唑蓝(MTT)染色法检测不同浓度[0(对照组)、100、200、400、600 μmol/L]H2O2处理草鱼原代肝细胞0.5、1.0、2.0和4.0 h后的细胞存活率,并采用微板法检测...     

镉对原代培养大鼠肝细胞的损伤作用

用活体肝脏灌注、胶原酶消化法分离大鼠肝细胞并作原代培养,以CdCl2(0～250或500umol/L）处理,测定培养上清液中LDH、ALT、ARG和细胞内GSH-Px、GSH、MDA等的含量,探讨镉对肝细胞的损伤作用和脂质过氧化状况。结果当Cd≥10和5umol/L时,细胞内LDH、ARG泄漏分别明显增加,GSH-Px活力显著受到抑制,GSH含量和MDA产生随着镉的剂量增大而增加（Cd≥50 umol/L）。认为镉对肝细胞的损伤和对细胞膜完整性的破坏,与脂质过氧化有关;镉处理后细胞中GSH增加可能与镉抑制了还原型谷胱甘肽向氧化型谷胱甘肽的转化有关。镉可直接抑制ALT本身的活性,因而认为以细胞内ALT泄漏作为镉诱导细胞损伤的评价指标时要予以注意。     

蜂胶及其活性成分抗心肌细胞氧化性损伤作用探析

蜂胶是西方蜜蜂采集植物树脂后,混入蜂蜡和其它分泌物经加工咀嚼而成的一种粘稠物质。蜂胶作为一种天然活性物质,其成分极其复杂,具有抗菌、抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性,是作为保健食品、药品制品的重要活性成分。随着人们饮食结构的改变、空气质量不断下降以及我国老龄化现象的加剧,心血管疾病已逐渐成为威胁我国公民健康的重大疾病之一。心血管疾病的发病机制极其复杂,其中氧自由基引起的心肌细胞氧化性损伤是造成心血管系统结构与功能异常的重要原因之一。大量研究证实,许多心血管疾病的病理过程中都有过量的氧自由基产生,氧化应激状态下的活性氧自由基代谢紊乱是心肌细胞损伤     

湿生扁蕾乙酸乙酯提取物对乙醇诱导L02细胞氧化损伤的保护作用研究

研究湿生扁蕾乙酸乙酯提取物(GEE)对乙醇诱导人正常肝细胞(L02)氧化损伤的保护作用及其机制。用400μmol/L乙醇诱导L02细胞建立体外细胞氧化损伤模型,加入GEE 25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL作用24 h,采用MTT法检测细胞存活率;检测细胞培养上清液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量的变化;DCFH-DA探针染色流式细胞仪检测细胞内ROS水平;DTNB-GR动力学循环法检测胞内还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)的含量变化。结果表明,400μg/mL乙醇诱导L02细胞24 h可建立肝细胞氧化损伤模型。GEE在25～100μg/mL对L02细胞无损伤。与模型组比较,GEE中剂量、高剂量组能显著提高L02细胞存活率(P<0.001);降低细胞上清液中ALT、AST含量(P<0.001);使细胞内SOD活力显著提高(P<0.001);MDA含量明显降低(P<0.001);同时使细胞内ROS水平降低(P<0.01)、GSH/GSSG比值提高(P<0....     

对氨基苯胂酸对小鼠肝脏损伤作用试验

对氨基苯胂酸(arsanilic acid),又称阿散酸,是一种广泛用于畜禽饲料的添加剂,对畜禽的生长发育、生产性能等有明显的促进作用,并可防治畜禽的某些疾病.本实验室在之前的体外研究发现:对氨基苯胂酸能抑制体外培养的大鼠原代肝细胞的增殖,并能诱导肝细胞凋亡,其诱发肝细胞凋亡的初步机理是抑制细胞抗氧化酶的活性,并促进凋亡蛋白Bax的表达升高,对氨基苯胂酸诱导肝细胞凋亡的最小浓度范围在50～500μmol/L之间.     

维生素C对红细胞氧化损伤保护作用研究

为了利用血红蛋白释放试验(HRT)检测生理浓度维生素C(VC)对生理浓度过氧化氢(H2O2)氧化损伤后红细胞的保护作用,用终浓度为0、0.15、0.3、0.4、0.6、0.7、0.85mmol/L的VC溶液处理红细胞悬液并进行HRT。再分别用0、1.25、2.50、3.75、5.00mL/L的H2O2溶液处理0.4mmol/L VC作用后红细胞悬液(VC保护组)和VC未作用的红细胞悬液(对照组),测定红细胞相对溶解度。结果表明,VC达到生理浓度时,血红蛋白再释放量逐渐减弱;VC保护组红细胞相对溶解度与对照组差别不大。说明生理浓度的VC能减弱HRT的血红蛋白再释放,降低红细胞破膜率,但不能显著降低H2O2对细胞膜的氧化损伤。     

JNK抑制剂对仔猪肝细胞药物性损伤的缓解作用及其机理

【目的】研究c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125对仔猪原代肝细胞药物性损伤的缓解作用及机理。【方法】通过二步灌流法获得仔猪原代肝细胞,将肝细胞分为对照组(C)、JNK抑制剂组(SP)、模型组(M)和治疗组(T),每组6个重复。对照组细胞不添加药物,SP组用2μmol/L SP600125处理细胞,M组用80μg/mL脂多糖(LPS)+20μg/mL恩诺沙星(ENR)处理细胞,T组用80μg/mL LPS+20μg/mL ENR+2μmol/L SP600125处理细胞,处理12 h后,收集上清测定谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性,收集细胞测定谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性、丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量及肝细胞核因子-1(hepatocyte nuclear factor 1,HNF-1)和谷胱甘肽-S-转移酶A1(glutathione S-transferase alpha 1,GSTA1)mRNA的相...     

原花青素对玉米赤霉烯酮诱导牦牛颗粒细胞氧化损伤的保护作用研究

旨在探究原花青素（procyanidins,PC）在玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEA）诱导牦牛颗粒细胞产生氧化损伤后,对颗粒细胞生长增殖、抗氧化性以及激素分泌的影响。本试验选取3～5岁的健康牦牛（n=3）,完成卵巢颗粒细胞的分离培养,并通过免疫荧光染色鉴定颗粒细胞纯度。通过CCK-8法分别比较不同浓度ZEA （0（对照组）、5、10、20、40、60、80和100 μmol·mL^-1）、不同浓度PC （0（对照组）、0.05、0.5、2.5、5、10、50和100 μg·mL^-1）以及50 μmol·mL^-1 ZEA+5 μg·mL^-1 PC联合处理对牦牛颗粒细胞活性的影响。通过ELISA法检测对照组（未添加ZEA及PC）、50 μmol·mL^-1 ZEA组和50 μmol·mL^-1ZEA+5 μg·mL^-1PC联合处理组牦牛颗粒细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）以及雌二醇（E₂）水平。采用实时荧光定量PCR法检测不同组颗粒细胞中部分增殖生长、凋亡、抗氧化及E₂合成相关基因的表达水平。结果显示,本研究所分离培养得到的细胞表达颗粒细胞标志蛋白FSHR,具有较高的纯度,可以满足后续试验要求。添加不同浓度ZEA后,颗粒细胞活力随着ZEA浓度的升高而显著降低（P<0.05）。在一定浓度范围内（0~5 μg·mL^-1）,随着浓度的上升,PC对颗粒细胞的活力有显著提高作用（P<0.05）,且在浓度为5 μg·mL^-1时对细胞活力的提高作用最明显。与ZEA处理组相比,ZEA与PC联合处理后颗粒细胞的数量增加且细胞活力极显著提高（P<0.05）,颗粒细胞增殖生长相关基因PCNA和IGF-Ⅱ 以及抗凋亡相关基因XIAP和BCL-2的表达显著上调（P<0.05）。相反,促凋亡相关基因BAX和CASP3的表达显著下调（P<0.05）。同时,ZEA+PC联合处理后能显著降低牦牛颗粒细胞活性氧水平并促进颗粒细胞分泌E₂（P<0.05）,颗粒细胞中的抗氧化相关基因SOD2、GPX1及CAT和E₂合成相关基因STAR、CYP11A1及HSD3B的表达量显著上调（P<0.05）。上述结果表明,PC可提高经ZEA处理后颗粒细胞的生长增殖能力,上调颗粒细胞的活力,提高抗氧化能力,降低ROS水平以及提高E₂的分泌水平。综上所述,PC对ZEA诱导的牦牛颗粒细胞氧化损伤有一定保护作用。本研究为ZEA毒性的防治和畜牧业生产中PC的应用提供了一定的研究数据和理论支持。     

茶多酚对H2O2诱导U251细胞氧化损伤的保护作用

为研究茶多酚(TP)对H2O2诱导U251细胞氧化损伤的保护作用,试验分为正常组、氧化损伤模型组、TP低(25 mg/mL)剂量组、中(50 mg/mL)剂量组、高(100 mg/mL)剂量组,分别通过MTT法、Hoechst 33342染色法、流式细胞分析法和ELISA法测定TP对H2O2诱导下U251细胞存活率、细...     

人工引流熊胆粉治疗家兔实验性肝损伤的病理学研究

家兔40只,分为治疗组(18只)、未治疗组(18只)及正常对照组(4只).未治疗组与治疗组家兔腹部皮下注射CCl_4溶液,造成肝损伤.治疗组在注射CCl_4后每日经口灌服人工引流熊胆粉120mg.治疗组和未治疗组分别于注射CCl_4后第1d、3d、6d、9d、12d、15d各扑杀3只,进行血液学、血清生化指标检测及肝脏病理组织学、组织化学与超微结构观察.结果:治疗组家兔血清中SGPT、γ—GT、LDH活性较未治疗组提前下降(P<0.01).治疗组与未治疗组治疗前后红、白细胞总数无显著差异(P>0.05).治疗组肝损伤的修复较未治疗组快.肝细胞内SDH、MAO、LDH及肝组织ATPase酶反应较未治疗组显著增强.     

熊用益胆素对无管取胆的熊胆粉产量与质量的影响

选用 9头胆汁产量稳定、体况相近的无管取胆黑熊 ,随机分成 3组添加含天然绿色饲料添加剂 0 .5 %组 (试验Ⅰ组 )和添加德国的PINA T饲料添加剂 0 .5 %组 (试验Ⅱ组 )及空白组 (对照组 )试验。结果表明 ,试验Ⅰ组胆汁产量、干粉率、干粉量有极显著提高 (P <0 .0 1) ,而试验Ⅱ组无显著提高 (P >0 .0 5 )。Ⅰ、Ⅱ组粗脂肪的消化率比对照组分别提高 2 .15 %和 4 4 .92 % (P >0 .0 5 )。熊胆粉分析结果表明 ,试验Ⅰ、Ⅱ组及对照组UDCA含量无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,但高效液相色谱分析图谱中UDCA所占峰面积比例试验Ⅰ、Ⅱ组分别比对照组提高 2 9.6 5 %和 14 .6 2 % ,同时CDCA所占峰面积比例试验Ⅰ、Ⅱ组分别比对照组提高 34.5 0 %和7.0 9%。熊胆粉氨基酸分析结果表明 ,试验Ⅰ组和试验Ⅱ组及对照组氨基酸含量无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;但试验Ⅰ组除天门冬氨基酸外其余均有提高 ,但差异不显著 ;试验II组各氨基酸含量均与对照组相近     

QuEChERS-超高效液相色谱-质谱联用法测定熊胆粉中9种苯二氮䓬类药物残留量

建立了超高效液相色谱-质谱联用法(UPLC-MS/MS)快速测定中药材熊胆粉中9种苯二氮?类药物残留的方法。样品以乙腈为提取溶剂,经萃取盐包除杂提取,采用分散式固相萃取管 (EMR-Lipid dSPE) 净化,ACQUITY BEH C18色谱柱(1.7 μm,2.1×100 mm)分离,多反应监测模式(MRM)采集数据,外标法定量。在优化的条件下,虽9种药物存在不同程度的基质效应,但不影响检测结果的准确性。方法学考察结果显示,9种苯二氮?类药物在对应的浓度范围内线性关系良好,决定系数(R²)≥0.9961,方法检出限(LOD,S/N =3)在0.06～0.71 μg/kg范围内,定量限(LOQ,S/N =10)在0.20～2.60 μg/kg范围内,3个加标水平的平均回收率在69.1%～108.0%范围内,日内RSD为1.8%～9.0%,日间RSD为2.6%～9.3%。该方法前处理操作简便、重现性好,准确度高,为熊胆粉中苯二氮?类药物残留的风险监控提供了一种有效的检测技术。     

蛹虫草多糖对四氯化碳诱导大鼠原代肝细胞损伤的保护作用研究

蛹虫草是一种药用真菌。从人工培养的蛹虫草中提取蛹虫草多糖(CMPS),采用Ⅳ型胶原酶灌流法分离大鼠肝细胞进行原代培养,研究蛹虫草多糖对CCl4诱导大鼠原代肝细胞损伤的保护作用。结果表明:蛹虫草的子实体和基质都含有丰富的多糖,其中基质中的多糖含量最高,约为子实体的2～4倍;CMPS可明显降低由CCl4诱导的损伤肝细胞培养上清液中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)的活性水平和丙二醛(MDA)的含量水平,显著提高由CCl4诱导的损伤肝细胞培养上清液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和诱导损伤肝细胞的存活率。试验结果提示CMPS对大鼠原代培养肝细胞损伤有直接保护作用,该作用可能与其抗氧化作用有关。     

外源NO对NaCl胁迫下玉米幼苗氧化损伤的保护作用

试验以150 mmol·L^-1 NaCl为胁迫条件,用浓度为0.01,0.05,0.1,0.5和1 mmol·L^-1的外源一氧化氮(NO)供体SNP处理玉米(Zea mays L.)幼苗,研究外源NO对NaCl胁迫下玉米幼苗氧化损伤的影响,旨在探讨NO对NaCl胁迫下玉米生长缓解的生理机理。结果表明:外源NO可促进脯氨酸(Pro)积累,提高超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)活性,提高可溶性糖的含量,并能缓解叶绿素的降解和丙二醛(MDA)含量的升高。NO的这种作用存在明显的剂量效应,其中以0.1 mmol·L^-1 SNP处理效果最为显著。     

迷迭香酸对哮喘小鼠氧化性肺损伤的保护作用

为评价迷迭香酸对哮喘小鼠模型氧化性肺损伤的保护作用,本研究用卵清蛋白（OVA）致敏、激发雌性BALB/c小鼠建立哮喘模型,并用OVA和H₂O₂联合激发小鼠作为氧化肺损伤阳性对照模型。在最后一次滴鼻激发24 h后,取支气管肺泡灌洗液（BALF）进行细胞计数并测定活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平,取左侧肺脏固定做HE染色。结果显示,迷迭香酸可明显减少BALF中细胞总数和嗜酸性粒细胞数目,显著抑制肺组织和BALF中ROS的产生,升高SOD和GSH-Px水平,改善肺组织病理变化。本试验结果表明,迷迭香酸对氧化肺损伤起到明显的保护作用。     

Protective Effects of Rosmarinic Acid on Oxidative Lung Damage in Asthmatic Mice

In order to evaluate the protective effect of rosmarinic acid on oxidative lung damage in asthmatic mice, in this study, the asthma model was established by sensitizing and challenging female BALB/c mice with ovalbumin (OVA), and some mice were challenged by OVA and H₂O₂ as a positive control of oxidative lung damage. The BALF, lung tissues of mice were harvested 24 h after the final OVA challenge and the number of total cells and eosinophils were measured, ROS,SOD and GSH-Px levels were detected, and pathological changes of lung tissue were observed using HE staining. The results showed that rosmarinic acid significantly reduced the number of total cells and eosinophils in BALF, significantly inhibited the production of ROS in lung tissue and BALF, increased the levels of SOD and GSH-Px, and ameliorated pathological changes of lung tissue. The results suggested that rosmarinic acid could protect oxidative lung damage in asthmatic mice.