中华蟾蜍蝌蚪变态过程中甲状腺的组织学变化

【目的】研究中华蟾蜍(Bufo gargarizans)蝌蚪在不同发育阶段甲状腺的组织学变化。【方法】以处于变态高峰前后5期（28,33,38,42,46期）的中华蟾蜍蝌蚪为试验材料,用Motic BA300光学显微镜对各个发育时期蝌蚪的甲状腺进行组织学观察,测定蝌蚪的全长、体质量和肝质量等形态指标,并分析这些形态指标与甲状腺直径、滤泡平均直径及最大直径的线性相关性。【结果】在28期时,中华蟾蜍蝌蚪甲状腺出现但无分泌甲状腺激素的功能;33期时,甲状腺具备了分泌甲状腺激素的能力;此后甲状腺进一步发育,在蝌蚪前肢展开期甲状腺活性达到最强;至尾完全吸收期,甲状腺机能减弱。蝌蚪全长、体质量及肝质量与甲状腺直径及滤泡直径呈正线性相关。【结论】具有分泌机能的甲状腺出现的发育时期,与两栖动物变态类型相关;分泌高峰期出现的发育时期与幼体持续时间密切相关。中华蟾蜍蝌蚪的全长可以直观地反映其甲状腺的机能活性。     

碳酸盐碱度对中华蟾蜍蝌蚪生长发育的影响

[目的]研究碳酸盐碱度对中华蟾蜍蝌蚪生长发育的影响,为其他水生生物的生长对碳酸盐碱度的适应性研究提供数据与参考。[方法]以中华蟾蜍蝌蚪为试材,研究蝌蚪在碱性不同水平值上中毒反应的变化规律,从而找出致死量和安全量。[结果]碳酸盐碱度对中华蟾蜍的24、48、72、96h零致死量（LD0）分别为9．97、8．85、6．23、3．84mmol／L,10％致死量（LD10）分别为11．13、9．97、6．82、4．10mmol／L,半致死量（LD50）分别为15．24、12．16、10．94、7．68mmol／L,90％致死量（LD90）分别为19．47、15．88、14．85、11．78mmol／L,全致死量（LD100）分别为20．21、16．64、16．41、13．49mmol／L,安全量（SD）为2．83mmol／L。适宜中华蟾蜍蝌蚪生长发育的水环境中碳酸盐碱度的范围在1．0～3．0mmol／L。[结论]碱度应控制在有利于水生生物种群生长和发育的适宜范围,才能使生物种群数量与环境协调发展。     

敌百虫和吡虫啉对中华蟾蜍蝌蚪的复合毒性

[目的]为了评价吡虫啉和敌百虫对水生生物的复合毒性。[方法]以中华蟾蜍蝌蚪为指示生物,研究吡虫啉、敌百虫以及这2种农药混合作用下的急性毒性。[结果]在吡虫啉安全浓度下,敌百虫对中华蟾蜍蝌蚪的LC50值约为单剂的0.6;在敌百虫安全浓度下,吡虫啉对蝌蚪的LC50值约为单剂的0.4。[结论]环境中低浓度的吡虫啉、敌百虫虽然不会对中华蟾蜍蝌蚪产生毒害作用,但会大大增强敌百虫、吡虫啉对蝌蚪的毒性。     

中华蟾蜍指名亚种蝌蚪对降低饮用水浑浊度的影响

为探明蝌蚪对饮用水浑浊度的除浊效果,为进一步探索利用蝌蚪改善饮用水质量的可能性提供依据,采用中华蟾蜍指名亚种蝌蚪对不同浊度的百花湖水进行除浊试验。结果表明:试验第2天初始浊度值由4.1NTU降低到3NTU以下;试验第6天初始浊度值由6.3NTU降低到3NTU以下。密度为0.625个/L的蝌蚪对不同浊度的除浊效果均达显著水平(P<0.05);由于种内干扰效应,在一定浊度范围内平均每只蝌蚪降低浊度的能力随自身密度的增加而下降。     

四川省稻瘟病菌对稻瘟灵的抗药性研究

采用生长速率法测定了2004-2007年分离自四川省16个地区（市、州）41个县（市）的208个有效稻瘟病菌单孢对稻瘟灵的抗药性。结果表明：全省最不敏感菌株EC50值（20.7794μg/mL）是最敏感菌株EC50值（0.8135μg/mL）的24.54倍。确定了四川省水稻稻瘟病菌对稻瘟灵的敏感基线为6.9749μg/mL。全省没有出现对稻瘟灵产生高抗药性和中抗药性菌株,大部稻瘟病菌株都表现为低抗水平（≤3）,有的地区低抗菌株出现频率为0。因此,只要加强田间抗药性监测,稻瘟灵在四川水稻生产上仍可作为防治稻瘟病的有效药剂使用。     

贵州省稻瘟病菌对稻瘟灵的抗药性监测

为了明确贵州省稻瘟病菌对稻瘟灵的抗药性。利用菌丝生长速率法,测定贵州省9个不同地区171个水稻稻瘟病菌单孢菌株对稻瘟灵的抗药性。结果表明：稻瘟病菌各菌株对稻瘟灵的敏感性呈连续性分布,最小EC₅₀与最大EC₅₀分别为1.36 mg/L和13.06 mg/L;各地区平均EC₅₀值为4.79～6.62 mg/L;最低抗性水平为0.2,最高抗性水平为1.92,相差9.6倍,平均抗性水平为0.7～0.97。贵州省稻瘟病菌对稻瘟灵的抗药性仍然处于敏感或低抗水平,目前可继续将稻瘟灵作为防治水稻稻瘟病的主要药剂。     

中华蟾蜍指名亚种蝌蚪和花姬蛙蝌蚪捕食藻类的效应

为摸清蝌蚪控制藻类生长的效果,用中华蟾蜍指名亚种蝌蚪和花姬蛙蝌蚪在实验室内用红枫湖水进行塑料盆养殖试验.结果表明,随着蝌蚪密度的增加,对蓝藻的总捕食量明显增加,但每只蝌蚪的平均捕食量随蝌蚪密度的增加而下降.中华蟾蜍指名亚种蝌蚪不喜食绿藻,蓝藻密度降低使绿藻获得较多的营养源而大量繁殖,导致绿藻密度增加.同时展望了蝌蚪在水...     

农药乐果对昭觉林蛙蝌蚪的急性毒性研究*

 用水生生物急性毒性试验方法，研究乐果对昭觉林蛙（Rana chaochiaoensis）蝌蚪的急性毒性影响。结果表明：在水温（20.5±0.5）℃条件下，乐果对昭觉林蛙蝌蚪24h，48h，72h，96h的半致死浓度（LC50）分别为：76.97mg/L，67.85mg/L，56.61mg/L,52，80mg/L，并呈现出线性关系，安全浓度 （SC） 为5.28mg/L。由此得出，乐果对昭觉林蛙蝌蚪属于低毒性农药，当乐果残留量超过安全浓度时，将会影响昭觉林蛙蝌蚪的正常生长发育。     

杀虫剂锐高和飞网对中华大蟾蜍蝌蚪的联合毒性

研究了两种杀虫剂对中华大蟾蜍蝌蚪的毒性。结果表明,在急性毒性试验中,锐高对中华大蟾蜍蝌蚪的24、48、72h半致死浓度(LC50)分别为37.279、35.515、35.006mg/L;飞网对中华大蟾蜍蝌蚪的24、48、72h半致死浓度(LC50)分别为64.423、62.781、62.301mg/L。在联合毒性试验中,锐高对中华大蟾蜍蝌蚪的24、48、72h半致死浓度(LC50)分别为16.205、15.315、13.749mg/L,飞网对中华大蟾蜍蝌蚪的24、48、72h半致死浓度(LC50)分别为30.441、28.797、25.898mg/L,两种杀虫剂表现为协同作用。     

SDS,Cu2+污染对蟾蜍蝌蚪的急性毒性及肝脏Na+-K+-ATPase活性的影响

以中华大蟾蜍(Bufo gargarizans)蝌蚪为试验材料,采用联合指数相加法,研究了阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)、重金属Cu²⁺对蟾蜍蝌蚪的急性毒性和联合毒性效应;并在急性毒性试验的基础上,研究了亚急性条件下SDS,Cu²⁺及其复合污染对蝌蚪肝脏Na⁺-K⁺-ATPase活性的影响。试验结果表明,SDS对蝌蚪的48,72,96 h的半致死浓度(LC₅₀)分别为27.38,26.45,25.57 mg/L;Cu²⁺对蝌蚪的48,72,96 h的半致死浓度(LC₅₀)分别为0.475,0.323,0.285 mg/L。SDS,Cu²⁺对蝌蚪的联合毒性作用48 h内表现为毒性增强的协同效应,96 h后表现为拮抗作用。蝌蚪在亚急性浓度的SDS,Cu²⁺条件下暴露4 d后,SDS,Cu²⁺及复合污染均对蝌蚪肝脏的Na⁺-K⁺-ATPase活性产生明显影响,SDS,Cu²⁺复合污染在Na⁺-K⁺-ATPase水平上表现为一定的协同作用。     

中华大蟾蜍的食性研究

[目的]了解中华大蟾蜍的食性,为其利用和保护提供依据。[方法]2008年4-6月对牡丹江地区中华大蟾蜍的食物状况进行调查,并对食物多样性进行分析。[结果]中华大蟾蜍摄食较广,雌性中华大蟾蜍的食物多样性指数H1=3.786 7,小于雄性（H2=3.838 2）。[结论]中华大蟾蜍对人类的有益性指数较高,对维持生态平衡、消灭农业害虫有重要作用。     

中华大蟾蜍的胚胎发育观察

对沈阳地区中华大蟾蜍的胚胎发育进行观察,并拍摄各期图片,对各时期的形态特征进行了描述.结果表明:在19～20℃的水温条件下.从受精卵期至鳃盖完全愈合期胚胎发育可分为26期,明确孵化期单独作为胚胎发育的一个时期,胚胎发育历时198.46h.     

中华大蟾蜍皮肤galectin-3 cDNA分子多样性及氨基酸变异分析

 以中华大蟾蜍Bufo gargarizans皮肤总核糖核酸（RNA）反转录第1链互补脱氧核糖核酸（cDNA）为模板,以聚合酶链式反应（PCR）扩增出galectin-3基因片段并通过TA克隆将其插入到pGM-T载体,通过DNA测序确定该基因片段序列,然后利用美国国家生物技术信息中心（NCBI）中ORF finder查找基因的全长开放阅读框（ORF）。筛选到9个编码galectin-3的cDNA序列,其中2个序列编码N-端截短型galectin-3（galectin-3C）。Clustal X2.0多序列比对和DnaSP 4.0分析cDNA序列的多样性。结果发现：中华大蟾蜍galectin-3C区域具有高密度的单核苷酸多态性（SNP）,频率为每20 bp为1个单核苷酸多态性。推导的氨基酸序列比对显示这9个基因在N端和糖识别结构域（CRD）有较高同源性,包括磷酸化位点、糖基结合位点和相关基序,而在串联重复区则存在较大差异。galectin-3基因及其编码蛋白的多样性很可能赋予中华大蟾蜍很强的环境适应能力。图3表1参24     

威宁中华蟾蜍的分子鉴定

为明确威宁中华蟾蜍的分子分类学地位,对采自贵州省威宁县的蟾蜍标本（标本号：LPSWN01A）进行线粒体12S rRNA 基因扩增和双重单系法分析。结果表明：该标本的序列大小为906 bp （GenBank 登录号：KJ803016）,基于数据集 A 构建的系统发育树中,威宁中华蟾蜍与7条中华蟾蜍同源序列聚为一个单系（中华蟾蜍支系）,威宁中华蟾蜍以较低的最大似然率独立为一个支系;基于数据集 B 构建的系统发育树中,威宁中华蟾蜍与2个中华蟾蜍华西亚种种群聚为一支,因此推断威宁产蟾蜍属于中华蟾蜍华西亚种（Bufo gararizans andrewsi ）。另外,威宁中华蟾蜍与云南怒江种群的遗传距离最近,为0．0093,说明威宁中华蟾蜍属于中华蟾蜍华西亚种,与之前的传统分类文献记载一致。     

丙线磷对中华大蟾蜍早期胚胎发育的影响

用3种不同浓度的丙线磷分别处理中华大蟾蜍的处于受精卵、8-细胞、囊胚晚期、原肠晚期4个不同时期的早期胚胎5h。结果发现,丙线磷对中华大蟾蜍的早期胚胎发育有致死致畸效应,各个时期其发育异常比例随丙线磷浓度的增加而升高,在其发育过程中出现了两种异常类型:原肠外突和畸形神经胚,并且各个时期对丙线磷的敏感性不同,其中原肠晚期的胚胎对丙线磷最为敏感,同等浓度下,发育异常比例最高,这与原肠晚期胚胎的发育特点有关。     

比较中华大蟾蜍不同个体间galectin-3 cDNA分子多样性

从中华大蟾蜍(Bufo gargarizans)某一个体的皮肤第一链cDNA中克隆到多个编码半乳糖凝聚素3(Gal-3)的cDNA。为分析该现象在中华大蟾蜍中的普遍性,分离并纯化3个不同个体的皮肤总RNA并合成其第一链cDNA,然后以此为模板,通过DNA聚合酶链式反应(PCR)扩增gal-3的开放阅读框序列。序列分析结果表明,从3个不同个体中均克隆到多个不同的gal-3 cDNA的ORF,在3组不同的试验中,出现完全相同的克隆或者完全相同的缺失以及相同的多核苷酸多态性位点,支持gal-3 cDNA多样性的客观存在,揭示gal-3cDNA的多样性是该物种的特征。