中性植酸酶的克隆、表达、纯化及酶学性质研究

基于454高通量测序枯草芽孢杆菌I4全基因组,获得一个编码中性植酸酶的基因Bpp,该基因全长为1 149 bp,编码382个氨基酸组成的多肽,成熟蛋白的理论相对分子质量为42 590.将基因Bpp克隆到表达载体pET28a(+),并在大肠杆菌BL21( DE3)中表达,表达产物具有植酸酶活性,利用组氨酸标签纯化并初步研究其酶学性质.结果表明:酶作用的最适pH为7.5,最适温度为55℃,Km为38.76 mmol/L,Vmax为2.34 U/mg,比活力为6.054 U/mg,中性植酸酶活性依赖Ca2+.     

耐热植酸酶的酶学性质研究

采用钒钼酸铵法对耐热植酸酶的酶学性质进行研究,结果表明,该酶的最适反应温度为65℃;最适反应pH4.0,pH2.0～5.5之间有较大的活性区间;有较强的耐酸性,pH2.0～6.5之间处理1h仍有超过90%的活性;具有很强的耐热性,干热处理对酶活没有影响;经湿热试验箱85℃和95%RH处理5min,酶活能保存约80%;金属离子和螯合剂对酶活没有明显的激活或抑制作用;该酶抵抗胃蛋白酶和胰蛋白酶的能力较强;该酶的米氏常数Km=1.737mmol/L,最大反应速度Vmax=52.632μmol/（mg.min）。     

耐热植酸酶的酶学性质研宽

采用钒钼酸铵法对耐热植酸酶的酶学性质进行研究,结果表明,该酶的最适反应温度为65℃;最适反应pH 4.0,pH 2.0～5.5之间有较大的活性区间;有较强的耐酸性,pH 2.0～6.5之间处理1 h仍有超过90%的活性;具有很强的耐热性,干热处理对酶活没有影响;经湿热试验箱85℃和95%RH处理5 min,酶活能保存约80%;金属离子和螯合剂对酶活没有明显的激活或抑制作用;该酶抵抗胃蛋白酶和胰蛋白酶的能力较强;该酶的米氏常数Km=1.737 mmol/L,最大反应速度V<,max>=52.632μmol/(mg·min).     

芽孢杆菌中性植酸酶基因的原核表达及酶学性质分析

植酸酶作为饲料添加剂能够有效提高动物对饲料中磷的利用率及减少粪便中磷排放对环境的污染,并降低植酸的抗营养作用。为了获得性能稳定的高活性植酸酶,采用PCR扩增芽孢杆菌(Bacillus sp.)中性植酸酶基因phyC(GenBank登录号:FJ986327)的成熟肽编码序列,将其克隆进原核表达载体pET-28a(+),并转化E.coli BL21(DE3)进行表达。在37℃条件下以0.5 mmol/L IPTG诱导4 h能够获得大量包涵体蛋白,在25℃条件下以0.5 mmol/L IPTG诱导6 h有利于可溶性蛋白的获得。利用Ni-NTA亲和层析柱纯化重组植酸酶产物,获得的中性植酸酶的部分酶学特性为:耐热性较好,最适反应温度55℃,在70℃处理10 min可保持20%以上的酶活性;耐酸、碱能力较强,最适pH 6.0～7.0,pH 5.5～9.0时能保持80%以上的酶活性,pH 5.0～10.0时处理60 min仍能保持70%以上的酶活性,在pH 2.0～4.0时能保持40%以上的酶活性。利用构建的切除芽孢杆菌中性植酸酶基因phyC信号肽编码序列的原核表达载体及优化的诱导表达条件,能够在大肠杆菌中高量表达性能稳定的芽孢杆菌中性植酸酶。     

产植酸酶菌株的筛选及酶学性质的研究

从100多个自然样品中,分离、筛选出一株高产植酸酶的曲霉(Aspergillus sp.)茵株.在30℃摇瓶发酵4 d时酶活达到6105.5 IU/mL,并对其粗酶液的性质作了研究:该酶作用的最适温度为45 ℃;最适pH为5;该酶在55℃、pH为3～7时,相对酶活大于80%;金属离子Zn2+"、Al3+、Mn2+,Cu2+等对该酶有较强的抑制作用,而Mg2+等则有一定的激活作用.     

细菌性植酸酶的酶学性质研究

植酸酶是一种绿色饲料添加剂．是一类特殊的酸性磷酸酶．它能水解植酸．消除植酸抗营养作用，释放出磷，减少饲料中无机磷的用量，进而降低饲料成本，显著降低猪、禽粪便排泄物中磷的含量，减少对环境的污染。     

中性植酸酶及其基因工程研究

随着饲料工业和养殖业的迅猛发展，饲料中未被消化利用的植酸磷对环境的污染日益严重，能降解植酸磷的植酸酶(myo-Inositol-hexaphosphate phosphohydrolase，EC3．1．3．8)已成为饲用酶制剂研究的热点。以往植酸酶的研究主要集中在酸性植酸酶上，酸性植酸酶适用于胃pH值呈酸性的单胃动物以及少数鱼类如虹鳟等，但不适用于消化道为中性的淡水鲤科鱼类和畜禽消化道中呈中性的部位。     

植酸酶的酶学性质及其基因工程生产研究

在畜牧生产中,磷对于家畜来说是一种极其重要的矿物质,谷物饲料中也含有相当比重的磷,其中1/3的磷以可消化的无机磷存在,而2/3的磷是以植酸钙镁(植酸)的形式存在.动物尤其是单胃动物,肠道内不含有水解植酸的酶,因此造成磷的浪费.植酸酶作为一种添加剂应用于饲料生产的市场很大.     

瘤胃微生物植酸酶的分类与酶学性质研究进展

反刍动物能很大程度上依靠瘤胃微生物来消化利用饲料中的植酸盐,但目前国内有关瘤胃微生物植酸酶的研究报道较少.本文对瘤胃微生物植酸酶的主要来源和活性进行了综述分析,发现主要有5种瘤胃细菌能分泌植酸酶,其中,反刍兽新月形单胞菌(Selenomonas ruminantium)分泌的植酸酶活性最高(199.1～703.6 U·mL-1);根据酶促反应的最适pH和催化机理,可将瘤胃微生物植酸酶分别归类为酸性植酸酶和半胱氨酸磷酸酶植酸酶;根据植酸酶水解植酸时的立体专一性,发现瘤胃微生物植酸酶中可能同时存在3-植酸酶和5-植酸酶2类植酸酶.最后本文论述了瘤胃微生物植酸酶酶促反应动力学特性,发现反刍兽新月形单胞菌植酸酶的最适pH为4.0～5.5、最适温度为50～55℃、对植酸和ATP表现出较强的活性;埃氏巨形球菌植酸酶的最适pH为5,0、最适温度为60℃、仅对植酸表现出活性.     

米曲霉ZW-06中性蛋白酶的粗分离及酶学性质研究

从米曲霉(Aspergillus oryzae)ZW-06发酵干曲中对中性蛋白酶进行粗分离,并对其酶学性质进行研究。结果表明:用硫酸铵沉降法所得粗酶粉的酶活力高达264443U/g;该酶的最适反应温度为45℃,最适作用pH为6.5和9.0;该酶在常温及pH6～10的环境下比较稳定;Mg2+、Mn2+和Ca2+对蛋白酶有强烈的激活作用,Fe2+和Cu2+则对其表现出强烈的抑制作用。动力学研究表明,该中性蛋白酶在pH 6.5和45℃条件下,Km为3.82mg/mL,Vmax为541U/mg·min。     

中性植酸酶在水产中的应用

本文综述了芽孢杆菌植酸酶的酶学性质、催化机制以及中性植酸酶在淡水鲤科鱼类饲料中的应用效果,并对其研究前景作了展望。     

植酸酶活性测定方法的研究进展

本文综述了植酸酶的分析测定方法,包括传统的分光光度法及近年来新发展起来的近红外光谱法、琼脂平板法、酶联免疫吸附法、生物传感器法、反相高效液相色谱法等。     

中性植酸酶分子生物学研究进展

植酸酶是催化植酸及植酸盐水解成肌醇与磷酸（或磷酸盐）的一类酶的总称,其对单胃动物的饲喂效果已得到广泛的证实。添加植酸酶能够显著提高植物性饲料中磷的利用率,减少饲料中无机磷的添加量以及动物粪便中无机磷的排出,降低植酸磷的抗营养作用,促进动物生长发育,减轻环境的磷污染,提高畜牧生产和生态效益。     

植酸酶的研究进展

植酸磷是一类能分解植酸 (肌醇六磷酸 )释放无机磷的生物酶 ,它可以降解饲料中的植酸盐 ,生成无机磷和肌醇以及与植酸结合的蛋白质、氨基酸、微量元素等 ,从而减少单胃动物饲料中无机磷的添加量 ,降低动物粪便中植酸磷的排放。植酸酶的研究是从 2 0世纪 60年代开始的 ,现在对植酸酶的研究已进入到分子水平 ,多种微生物来源的植酸酶已得到分离纯化并进行了较深入的生理生化研究 ,多种植酸酶编码基因已从不同的微生物中得到分离。目前研究的主要思路集中在通过基因工程的手段克隆植酸酶基因 ,然后在生物反应器中高效表达植酸酶基因 ,以解决植…     

植酸酶的研究与应用

植物性饲料中磷的含量相对较少,而其中约有60％～75％的磷以植酸的形式存在（Markus等,1999;Pasamontes等,1997;Ostanin等,1968;Nelson等,1968）,饲料植酸中的磷必须在消化道内水解成无机磷酸盐才能被动物利用。反刍动物瘤胃微生物能产生植酸酶,可有效地分解植酸磷并利用释放出的磷,利用率一般为60％,成年反刍动物可高达90％;而单胃动物缺乏能水解植酸的酶或其酶的活性极低（Pointillart等,1984;Markus等,1999）,因而单胃动物对植物饲料中的磷利用率很低。研究表明,猪只能利用玉米中磷的10％～12％：利用豆粕中磷的25％～35％（Cromwell,1993）。典型猪13粮中磷的利用率只有15％,而85％的磷随粪便排出。     

饲粮中添加植酸酶对生长肥育猪矿物元素利用和排泄的影响

选用60头平均体重28.3 kg的杜洛克×长白×大约克夏三元杂交猪,随机分成2组,每组30头,研究在饲粮中添加植酸酶(750 FTU/kg)对生长肥育猪矿物元素利用和排泄的影响。结果表明:1)添加植酸酶使生长猪对铜和锌的消化率、肥育猪对粗灰分、磷、铜和锌的消化率显著提高(P<0.05或P<0.01)。2)添加植酸酶使生长猪对铜和锌的吸收量、肥育猪对粗灰分、磷、铜和锌的吸收量显著提高(P<0.05或P<0.01)。3)添加植酸酶显著降低生长猪粪中铜、肥育猪粪中粗灰分和磷的排泄量(P<0.05)。     

植酸酶磷当量的研究

<正>1植酸酶活性与磷当量之间的关系酶活指酶催化其底物能力的大小,通常用活力单位来表示。目前国际上通用的植酸酶酶活定义为37℃及pH值5.5的条件下,1min内从5.1mmol/l的植酸钠溶液中水解1μmol无机磷所需要的酶量为一个酶活单位。所谓当量关系就是不同物质之间针对某一共     

植酸酶发酵生产的研究进展

<正>植酸酶(EC 3.1.3.8或者EC 3.1.3.26,肌醇六磷酸盐磷酸水解酶)是催化植酸及植酸盐水解为肌醇和磷酸(或磷酸盐)的一类水解酶的统称。目前已知的植酸酶包括肌醇六磷酸3-磷酸水解酶、肌醇六磷酸6-磷酸水解酶[1-2]。植酸酶在饲料、食品、医药等领域有着广泛的作用。植酸酶是一种环保型饲料添加剂,能使饲料中植