MTS法在磁控加载环境中细胞增殖测定中的应用

以人肝实质细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞SMCC-7721为研究对象,比较了在磁控加载环境中细胞增殖的3种测定方法.结果表明,由于微球的干扰,台盼蓝法在此环境下的测定容易出现错误统计,同时需时较长.MTT法由于显色物质为非水溶性,在有机溶剂中的再次溶解的均匀度不好掌握,测定结果偏差较大,且容易因溶解过程造成微球漂浮而导致取样点失效.而MTS法在保持测定结果与传统的台盼蓝法无显著差异的前提下,却更为简单快速,特别是能够避免微球对于测定的多种干扰,因此对研究这种加载环境中的细胞增殖,是一种最为适用的方法.     

纤维素微球的分子质量及其分布

[目的]采用黏度法和凝胶渗透色谱法(GPC)测定纤维素和纤维素微球的分子质量,为研究纤维素微球的结构和性能关系提供基础数据。[方法]黏度法以镉乙二胺溶液为溶剂,通过乌式粘度计,25℃下测定溶液的特性粘数η来计算纤维素分子量;GPC法以8%的LiCl-N,N-二甲基乙酰胺(LiCl-DMAc)为溶剂,0.5%的LiCl/DMAc为流动相,测定纤维素和纤维素微球的相对分子质量及其分布。同时通过对测定结果的分析,对2种方法进行对比研究。[结果]黏度法测定纤维素和纤维素微球的粘均分子量Mη分别为224 532和16 686;GPC测定纤维素和纤维素微球的重均分子量Mw分别为284 196和22 345。[结论]GPC的测定结果较接近真实值,能够真实地反映纤维素和纤维素微球分子量分布的特性。     

狂犬疫苗壳聚糖微球制备及细胞免疫特性研究

通过喷雾干燥法制备狂犬疫苗壳聚糖微球冻干粉,以微球吸附疫苗原液的吸附率为主要评价指标,运用均匀设计试验确定制备微球的最佳处方并对最佳处方得到的微球进行粒度分布、吸附率及免疫原性考查;用狂犬疫苗壳聚糖微球、狂犬疫苗脂质体、空白壳聚糖微球和生理盐水分别免疫小鼠,通过脾淋巴细胞增殖试验检测脾淋巴细胞增殖能力。结果表明:采用优化工艺制备的狂犬疫苗壳聚糖微球冻干粉复溶后于显微镜下观察呈圆形或近似球形,分散性好,粒度分布均匀,平均粒径为4.71μm,吸附率为74.21%;在小鼠免疫第7天时狂犬疫苗壳聚糖微球组和狂犬疫苗脂质体组产生的脾淋巴细胞增殖水平(SI值)无显著差异,分别与空白微球组和生理盐水组比较均有极显著差异,说明壳聚糖微球作为疫苗佐剂也可增强机体的细胞免疫。     

多聚赖氨酸-量子点微球在细胞标记中的应用

以戊二醛为交联荆,将在水相合成的带负电的CASe/Cds核壳量子点与带正电的多聚赖氨酸结合制备得到稳定性微球(PL-QDs).将该微球与肝癌细胞SMMC-7721共培养,并用荧光显微镜跟踪观察以研究量子点微球在细胞标记中的作用.结果显示,微球对细胞无毒性,而且能有效地将量子点释放至细胞内并使细胞在绿光光照下发出红色荧光,荧光能稳定存在6 d以上.研究表明,该微球细胞毒性低,可用于生物学标记的量子点载体.     

微流控芯片平台上细胞胞吞性能的研究

[目的]考察流速对细胞吞噬二氧化硅荧光微球能力的影响。[方法]在自制微流控芯片上进行细胞培养以研究流动状态下细胞对二氧化硅微球的胞吞性能。[结果]显微镜照片显示,对照细胞发出强烈的红光,表明细胞吞噬了大量的二氧化硅微粒;在通道中培养的细胞在流动状态下传输二氧化硅微粒,其荧光强度比对照组低,随着通道内流速增大,其荧光强度下降,表明流动状态下细胞对二氧化硅的摄入量降低。以在细胞瓶中与二氧化硅微粒共培养6h后的细胞为对照组,以其荧光强度为100%,微通道中液流流速从0.023mm/s增加到0.079mm/s时,荧光强度从51.2%下降到28.2%,表明随着流速的增加,细胞对二氧化硅微球的吞噬量明显下降。[结论]该实验为研究细胞的胞吞性能提供了新方法。     

EDC交联的明胶微球支架制备及其生物相容性研究

目的制备EDC交联的明胶微球作为支架材料,并对其生物相容性进行评价,为构建工程化的脂肪组织奠定基础．方法制备明胶微球,并利用5mmol EDC对其进行交联,获得75—150μm粒径大小的微球;扫描电镜观察,检测微球的细胞相容性和组织相容性．结果经EDC交联的明胶微球均呈圆球体,大小比较均匀,粒径75～150μm,细胞毒性等级为0～I级;将微球植入sD大鼠皮下,植入部位未见明显红肿,伤口无红肿、渗液等炎性反应,组织学观察植入明胶微球局部无明显炎症细胞浸润,静态培养时脂肪组织来源干细胞（ADSCs）在微球上生长状态良好．结论EDC交联的明胶微球是一种具有较好的细胞亲和性、生物相容性和生物可降解性的天然高分子支架材料,以脂肪组织来源干细胞为种子细胞,可以为临床使用提供一种工程化脂肪组织填充物．     

肿瘤细胞三种药敏测试方法的比较研究

以人早幼粒白血病细胞系ＨＬ－６０为对象，进行了ＭＴＴ法细胞浓度曲线和五种抗癌药物的敏感试验，并与台盼蓝拒染法、￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入法进行了比较，结果表明在一定活细胞范围内（１．２５×１０￣４～２×１０￣５），ＭＴＴ法所测光密度与细胞数成线性关系（ｒ＝０．９９８０，Ｐ＜０．０５）；三种方法测定的５－Ｆｕ、ＭＴＸ、ＶＣＲ、Ｈ、Ａｒａ－Ｃ药物敏感性结果一致，ＭＴＴ法灵敏度与台盼蓝拒染法相似（Ｐ＞０．０５），但低于￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入法（Ｐ＜０．０５）。     

血根碱壳聚糖微球的制备工艺优化及体内外性能研究

本研究旨在探讨血根碱壳聚糖微球的最优制备方法,并对微球进行外观粒径表征和体内外研究。本研究建立了血根碱含量测定的HPLC法,运用乳化交联法制备血根碱壳聚糖微球,以载药量、包封率和平均粒径为评价指标,应用单因素试验和星点设计-响应面法优化制备处方。利用显微镜和扫描电镜观察微球外观形态,通过激光粒度仪测定微球粒径及其分布。采用动态透析法取不同时间点的血根碱原料药溶液和血根碱壳聚糖微球溶液,并考察两种溶液的体外释放度,最后进行药动学方程拟合。对不同组小鼠注射血根碱原料液和血根碱微球液,不同时间取组织血测定,观察体内分布及靶向性。结果表明:血根碱HPLC含量测定得曲线方程y=2.530 0x+43.323 1(R²=0.999 8,线性范围为10.0～50.0μg/mL)。单因素试验和星点设计-响应面法得最优处方:血根碱投药量60 mg,壳聚糖用量70mg,乳化剂用量5%,戊二醇用量0.25mL、水油体积比3:10,醋酸浓度2%、搅拌速度500r/min和交联时间3.5h。观察到血根碱壳聚糖微球形态近似球形及表面较光滑,测定得平均粒径(8.17±0.16)μm,粒径分布为...     

高锰酸钾滴定法测定补钙制品中的钙含量

[目的]为了准确测定补钙制品中的钙含量。[方法]建立了高锰酸钾容量滴定法测定补钙制品中钙含量的方法。[结果]该法是在含有EDTA的pH值为3.5￣4.5的氨性溶液中,先用草酸盐选择性地沉淀钙离子。沉淀物经过滤、洗涤后,用稀硫酸将所得草酸钙沉淀物溶解,然后在75￣85℃条件下用高锰酸钾标准溶液滴定。测定结果的相对标准偏差(RSD)为0.30%(n=5),回收率(R)在96.30%￣101.12%。[结论]用高锰酸钾滴定法测定补钙制品中的钙含量,简单、快捷,准确、干扰小。     

磁性靶向药物的制备与性能分析

采用化学共沉淀法制备磁性Fe3O4纳米粒子;用乳化-交联法制备环丙沙星磁性明胶微球;在高倍显微镜下观察微球粒径大小及形态,用紫外分光光度法检测微球中环丙沙星的含量;观察磁响应性;绘制药物微球体外释放曲线.结果显示:环丙沙星磁性明胶微球粒径40~58μm,在外加磁场的作用下动作距离为65~70 mm,微球载药率为16.5%,240 min.体外累积释放量为90%以上.说明环丙沙星磁性明胶微球成球性好,具有较好的磁响应性和一定缓释性,是一种较好的靶向药物.     

Protein digestion in isolated lysosomes inhibited by intralysosomal trypan blue

Control rats and rats treated with subcutaneous trypan blue were injected intravenously with denatured albumin-I(125). Lysosome-rich fractions of their livers, when incubated at 22 degrees C in osmotically protected medium (pH 7.4), retained their capacit to digest albumin-I(125). The rate of digestion was lower in suspensions pre-pared from rats treated with trypan blue than in control suspensions, but rates of lysosome breakage were not different. T'hese results and other experimental evidence suggest that trypanblue concentrated within lysosomes can inhibit intralysosomal digestion, probably by inhibition of lysosomal proteinases.     

Lysosomal enzyme inhibition by trypan blue: a theory of teratogenesis

A mechanism of mammalian teratogenesis involving inhibition of embryotrophic nutrition is suggested and exemplified by the action of trypan blue on pregnant rats. There is evidence for the localization of trypan blue in heterolysosomes of the epithelium of the visceral yolk sac, and our experiments indicate that the dye is an inhibitor of a selection of hydrolytic enzymes present in lysosomal fractions from homogenates of rat visceral yolk sac. It seems likely that trypan blue inhibits the intracellular digestion of embryotroph by the visceral yolk-sac epithelium; the conceptus may therefore be deprived of essential nutrients at critical stages of development.     

不同盐离子对单核细胞炎症反应的影响

[目的]研究NH4＋引起炎症反应的机制。[方法]利用倒置显微镜观察不同盐离子引起单核癌细胞THP-1形态的变化,乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测细胞培养上清中LDH,台盼蓝染色检测细胞形态和存活情况,Western blot检测炎症反应相关细胞因子的产生和分泌。[结果]通过体外研究发现NH4＋能够激活caspase-1和下游的IL-1β,IL-1β是炎症反应的重要细胞因子;K＋能够抑制NH4＋引起的caspase-1和IL-1β的激活。[结论]Na＋、SO24-、Cl-都不引起炎症反应,对THP-1细胞没有影响;NH4＋能够引起单核细胞的炎症反应,并且可以被K＋抑制,为氨基酸代谢紊乱引起的疾病的治疗提供了一定的依据。     

γ射线对舞毒蛾虫卵处理效果的研究

为检验物理灭虫的效果,以林木害虫舞毒蛾(Lymantria dispar)虫卵为试验材料,用不同剂量的γ射线照射舞毒蛾虫卵,研究照射后幼虫孵化率的宏观变化情况和经过台盼蓝活体染色后幼虫细胞的微观变化情况.结果表明,随着γ射线辐照剂量的增加,幼虫孵化率逐渐降低,幼虫细胞的死亡数量逐渐上升;总体上看,宏观试验和微观试验所得...     

Dispersal of rabbit lung into individual viable cells: a new model for the study of lung metabolism

This new enzymatic method disperses rabbit lung into morphologically intact, viable individual cells. The scattered cells constitute more than 50 percent of the original tissue. At least 90 percent of the cells exclude trypan blue from the nucleus. The dispersed lung cells consumed 6.2 microliters of oxygen per hour per milligram, dry weight. They incorporated [1-(14)C]palmitate into lecithin.     

小流域集水效率的径流系数算法

小流域的农业生产多以雨养农业为主，其集水效率是雨水集蓄利用工程的关键。本文首先讨论了径流系数法，其次以山东安口小流域为例．通过野外观测数据计算出其上的径流系数。安口流域径流系数较高．平均为0．46，实例检验表明径流系数法对集水量进行估算具有较高的准确性，因而在类似于安口流域的这类区域，利用(天然)径流场收集雨水发展雨养农业则极为有利。     

菊花染色体倍性鉴定研究

[目的]综述菊花染色体倍性鉴定的常用方法及其在育种中的应用。[方法]重点介绍了染色体计数法和流式细胞术法,简要介绍了染色体倍性鉴定在菊花品种鉴定和育种中的应用情况。[结果]染色体计数法一般分为取材、预处理、固定、解离、染色、制片、镜检和制作永久玻片等步骤。流式细胞术鉴定法目前已成为倍性鉴定的主要方法,尤其适合大量样品的染色体倍性分析。介绍了流式细胞仪的结构与工作原理、使用方法与操作步骤。染色体倍性鉴定方法在菊花品种鉴定和育种中的应用主要在品种鉴定、杂交组合的选配、杂交后代材料的提前筛选和亲缘关系的鉴定4个方面。[结论]染色体计数法和流式细胞术法2种方法的结合有利于提高染色体倍性鉴定的效率和准确性。     

七日龄小鼠生精小管及睾丸的冷冻保存*

 在DMEM培养液中添加10%小牛血清（NBS）及10%二甲基亚砜（DMSO）作为冻存液，慢速降温冷冻，液氮保存7日龄小鼠生精小管及完整睾丸，37 ℃水浴复苏，0.25%胰蛋白酶消化成单细胞，台盼蓝染色测定细胞复苏率。结果：生精小管及完整睾丸冷冻复苏后细胞复苏率分别为87.3%及85.0%，两复苏率之间无显著差异，与生精小管单细胞对照组相比也无显著差异。冷冻损失率分别为10.1%及12.4%。结果表明，对于7日龄小鼠生精小管及完整睾丸，以10% DMSO为抗冻剂，慢速降温冷冻，液氮保存，37 ℃水浴复苏是一种适宜的冷冻保存方法。     

猪卵母细胞室温保存与成熟培养

猪卵母细胞在TCM—199培养基中,20℃和37℃(对照)下,分别培养24h和48h。培养基中加入20%混合的3个犊牛血清、5%的猪卵泡液。气体浓度为90%N_2,5.2%O_2和4.8%CO_2。24h,20℃和37℃培养的卵母细胞经台盘蓝鉴别后,存活率分别为71%和69%。当培养到48h,20℃组的成活率明显高于37℃组,分别为61%和25%。电镜观察,20℃组卵母细胞的线粒体较完整,微绒毛较多。而37℃组则相反。当20℃培养24h 后,把卵母细胞移到37℃下继续培养24h,仍有45%的存活率,11%的颗粒细胞扩散程度较好。染色后,可见第1极体和染色体,说明处于第2次成熟分裂的中期。实验说明,20℃保存24h 仍有继续发育成熟的潜力。     

酒酒球菌膜脂肪酸成分分析的样品处理方法比较

为筛选较适合的酒酒球菌膜脂肪酸提取和皂化方法,采用5种不同脂肪酸分析样品前处理方法,结合气相色谱质谱联用仪(GC/MS),分析酒酒球菌SD-2a膜脂肪酸成分,比较不同处理方法的效果。结果表明,先提取脂肪酸再采用NaOCH3甲酯化脂肪酸的方法能够较为准确和完整地检出酒酒球菌SD-2a的12种膜脂肪酸,相对标准误差(RSD)≤5%,特别对于环丙烷脂肪酸的检测效果较好,RSD=2%;独立的脂肪酸提取步骤对细菌膜脂肪酸分析是必要的,包含脂肪酸提取的样品处理方法比不包含脂肪酸提取的方法多检出3种脂肪酸,RSD均≤5%。