苏云金芽孢杆菌肠毒素的研究进展

苏云金杆菌含有多种毒素,与人畜条件病原菌—蜡质芽孢杆菌有紧密的联系。研究表明用PCR等方法可检测到很多苏云金杆菌含有与蜡质芽孢杆菌类似的多种肠毒素基因,而且,商用肠毒素试剂盒也能检测到有些苏云金杆菌肠毒素的产生,基因核苷酸序列分析表明苏云金杆菌肠毒素基因同蜡质芽孢杆菌肠毒素基因有较高的相似性。该文对苏云金杆菌毒素的基因检测、基因序列分析、活性检测及其安全性方面进行了综述。     

烟草甲虫高毒力苏云金杆菌的分离与筛选

对云南7个优质主产烟区收集的450份烤后烟样,运用4%NaCl培养基选择分离法,分离出苏云金芽孢杆菌475株。其中对含毒蛋白基因cryⅠ及cryⅤ的18个Bt菌株用2龄烟草甲虫进行生物毒力测定,试验9 d后,9个Bt菌株生物毒力测定校正死亡率均超过80%;试验12 d后,5个Bt菌株生物毒力测定校正死亡率均超过95%。同时对分离出的Bt菌进行PCR毒素蛋白基因鉴定,含cryⅠ毒素蛋白基因的Bt菌有7株,出菌率为1.47%;含cryⅤ毒素蛋白基因的Bt菌11株,出菌率为2.32%;没有含cryⅢ毒素蛋白基因的Bt菌。因此,为进一步用苏云金芽孢杆菌防治烟叶仓贮害虫提供了科学依据。     

苏云金芽孢杆菌以色列亚种毒素蛋白定量检测方法分析

为完善苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuringrensis subsp. israelensis)毒素蛋白定量检测方法,试验用一定浓度的磷酸缓冲溶液、纯化水洗涤苏云金芽孢杆菌以色列亚种试样,去除培养基残留。用SDS-PAGE电泳法检测离心后收集到的试样菌体毒素蛋白含量。结果表明,通过磷酸缓冲液及水洗涤试样,解决了试样中杂质干扰毒素蛋白含量检测的关键性问题,采用该方法能够准确对苏云金芽孢杆菌以色列亚种两种主要相对分子质量的毒素蛋白进行检测与定量,且重复性好,检测误差可以控制在5%以内,并且检测结果与产品生物效价存在显著相关性。     

大豆DNA导入水稻引起后代种子贮藏蛋白变异

以大豆为外源ＤＮＡ供体，用浸种及灌法和花粉管通道法直接将大豆总ＤＮＡ导入受体水稻，经常规栽培获得水稻后代种子。采用薄层等电聚焦电泳和十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳地，分析了经大豆总ＤＮＡ处理得到的水稻后代种子中的清蛋白，球蛋白，醇溶蛋白各谷蛋白。     

外源瓠瓜DNA导入西瓜的研究初报

采用ＤＮＡ浸胚法和子房注射法，将供体瓠瓜的总ＤＮＡ导入西瓜，后代Ｄ１代分别获得了１株（株系１）和７株变异株，变异率为０．３２％～１．７７％．Ｄ１代的性状变异较小，但株系１的Ｄ２代性状变异特别大，有２２．７％的果实皮色由深绿色变成白色或白皮绿网纹，接近供体皮色；其果实形状有１１．９％由圆形变成长椭圆形，１０．８％变成椭圆形，８．３％变成高圆形；其果实种子的形状和色泽有３３．３％发生变异．而其它株系的Ｄ２代性状变异较小．株系１Ｄ２代变异植株成株期功能叶过氧化物酶同工酶酶谱与受体不同，出现了供体植株的酶带．初步认为西瓜的性状变异是供体瓠瓜ＤＮＡ导入的结果．     

基因工程在作物抗虫育种中的应用

目前在农作物上已能通过椤癌农杆菌、发根农杆菌、花椰菜花叶病毒(CaMV)、ANA病毒等为中介的基因工程方法,将一些抗虫基因如苏云金杆菌(Bacillus thurin、giensis)抗虫毒素基因(B. t毒素基因)、菜豆抗虫蛋白基因(胰蛋白酶抑制蛋白CpTI基因)、蓼草抗虫基因等导入水稻、玉米、棉花、马铃薯、烟草、番茄等的植物细胞,     

Bt基因及其在抗鞘翅目害虫上的应用

苏云金芽孢杆菌是目前研究最深入的杀虫微生物,其杀虫蛋白基因也是应用最广泛和最有发展潜力的抗虫基因。近年来,鞘翅目害虫尤其是金龟甲科害虫对作物的危害日趋严重,是作物生长中最主要的害虫之一。本文介绍了苏云金芽孢杆菌及其抗虫机制,并对该基因在鞘翅目害虫防治方面的研究进展进行了总结。     

棉铃虫对Bt作物抗性新机制被发现

正本报讯近日,从中国农业科学院植物保护研究所获悉,该所经济作物虫害监测与控制团队研究发现,棉铃虫苏云金芽孢杆菌(Bt)毒素受体基因ABCC2的变异可以导致其对Bt作物产生高水平的抗性,但这种变异显著增加了抗性棉铃虫对另外一种生物毒素阿维菌素的敏感性。据悉,苏云金芽孢杆菌(Bt)     

半野生大豆DNA导入栽培大豆其后代过氧化物酶酶谱分析

本文采用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法，对利用花粉管通道途径，导入外源ＤＮＡ所获大豆变异后代，进行过氧化物酶酶谱分析，结果表明；变异后代与亲本的谱带间有明显差异，后代含有供体的谱带，这说明了外源ＤＮＡ片段已整合到受体基因组中并在后代中得到了表达。因此，我们认为可以用同工酶酶谱分析的结果作为鉴定外源ＤＮＡ导入大豆的生化指标之一。     

基因枪法获得转基因小麦植株

 利用适用于禾谷类作物的表达载体 pGU4ABBar,采用基因枪法 ,将人工合成的苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因cryIa导入小麦品种扬麦 15 8,经PCR和Southernblot鉴定 ,证明获得 4株导入cryIa基因的小麦转基因植株 ,转化率约为 0 .7% ,并通过Westernblot鉴定检测到了目的蛋白的表达。     

飞机超低容量喷洒Bt油悬浮剂防治春尺蠖试验

一、试验药物 1．试验药物为8000IU/ul天然菌株苏云金杆菌油悬浮剂。苏云金杆菌简称Bt,是包括许多变种的细菌杀虫剂,属好气性蜡状芽孢杆菌群,在芽孢内产生伴孢晶体。苏云金杆菌制剂是经口中毒的药剂,主要是胃毒作用,可用于防治直翅目、鞘翅目、膜翅目,特别是鳞翅目的多种幼虫。苏云金杆菌可产生两大类毒素：内毒素（即伴孢晶体）和外毒素。伴孢晶体是主要毒素。杀虫有效成分是伴孢晶体和芽孢毒素。     

外源DNA导入转移烟草抗赤星病性状的研究

以烟草赤星病抗源材料净叶黄总ＤＮＡ为供体，感病材料ＮＣ８９为受体，通过涂抹柱头法和注射子房法进行了外源ＤＮＡ导入处理，在人工接种及自然发病条件下，对处理后代进行了赤星病抗性鉴定，结果约２％～４％的处理材料抗性较ＮＣ８９有所提高，个别植株已接近净叶黄。从中选取３株抗赤星病性状及农艺性状均表现较好的单株，自交收种后于次年在大田条件下对其后代（Ｄ２代）的抗性性状进行遗传稳定性分析，结果其中１个株系（ＴＮ     

用花粉管通道将外源DNA导入水稻的研究

以带有ＮＰＴⅡ基因和ＧＵＳ基因的质粒ｐＢⅠ１２１ＤＮＡ为供体,以水稻品种特青２号受体,应用花粉管通道将ＰＢⅠ１２１ＤＮＡ导入受体,获得了１５粒Ｄ０代的种子。扩敏不Ｄ０代种子,得到１５００泣Ｄ１代粒子,在含有卡那霉素的水中萌发,获得１８株绿苗。抽提绿的ＤＮＡ,用ＮＰＴⅡＤＮＡ片段作探针,进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分子杂交,结果呈阳性,表明利用花粉管通道已经将外源的质粒ＤＮＡ导入到特青２号水稻的基因组中。     

苏云金芽孢杆菌vip3A基因的检测

苏云金芽孢杆菌是目前研究最为深人、应用范围最广的杀虫微生物，它主要靠芽孢形成期产生的杀虫晶体蛋白作用于昆虫中肠，导致昆虫死亡。目前，人们发现和鉴定了许多具有不同杀虫活性的苏云金芽孢杆菌。基于氨基酸序列和杀虫特异性建立了Cry蛋白的分类表，并且不但被完善。随后PCR技术以其快捷、灵敏、准确等特点被用于Bt菌株的基因鉴定，     

苏云金芽孢杆菌新分离株S_(18-4) δ-内毒素基因在Btk·BE_(20)中的克隆和表达

选用土壤新分离株Ｓ１８－４为供体菌,以ＰＨＴ３１０１穿梭质粒为载体,载体和供体ＤＮＡ用Ｐｓｔｌ酶切后进行连接,用电激法将重组质粒转入苏云金芽孢杆菌无晶体突变株Ｂｔｋ·ＢＥ２０中。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳及扫描电镜观察,证明δ－内毒素基因得到了表达,并具有很高的表达量。生物测定结果显示,重组株对夜蛾科幼虫具有比野生株Ｓ１８－４更强的杀虫毒性。     

苏云金芽孢杆菌8010蛋白酶基因保守区克隆及序列分析

通过设计蛋白酶基因引物,对苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)库斯塔克亚种菌株8010蛋白酶基因进行克隆,获得了6个蛋白酶基因片段,即中性蛋白酶A、色氨酸合成酶β链、色氨酸合成酶α链、碱性蛋白酶A、磷酸化水解酶和糖原磷酸化酶基因,以及1个未知功能的DNA片段(可能是编码蜡质芽孢杆菌组特有蛋白的基因).     

高粱DNA导入水稻的RAPD分子验证

对以密穗型高梁ＤＮＡ为供体、通过共继任这通道技术导入水稻所获得的水稻后代进行了ＲＡＰＤ分子验证。结果表明：从１２２个引物中找到９个引物检测出ＤＮＡ的多态性,证明外源ＤＮＡ导入受体后引起后代基因组的显著变异。     

cry1Ia1基因转化大豆及抗虫性的初步评价

cry1Ia1基因编码的是苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)的杀虫晶体蛋白(ICPs),产物对鳞翅目(Lepidoptera)和鞘翅目(Coleoptera)昆虫具有毒害作用,可防治大豆食心虫等害虫.利用农杆菌介导的方法将cry1Ia1基因转入大豆栽培品种黑农35中,并获得了5株转cry1Ia1基因的株系.PCR、Southem blotting和RT-PCR检测结果表明cry1Ia1基因已经整合到大豆基因组中并稳定表达.通过人工接种的方法对转基因植株抗大豆食心虫的水平进行了初步的评价,结果表明其中的2株对大豆食心虫具有高度的抗性,2株具有中等程度的抗性,1株与对照无明显差异.cry1Ia1基因首次成功导入大豆栽培品种黑农35中并获得抗大豆食心虫的转基因植株.     

棉铃虫对苏云金芽胞杆菌室内抗性初报

经室内10代筛选,棉铃虫对苏云金芽胞杆菌菌株YBT-1520和HD-73伴胞晶体产生了一定水平的抗性,F10代的抗性指数分别为1.30和2.07。从中可以看出棉铃虫对苏云金芽胞杆菌抗性发展的初步规律,即棉铃虫对多基因毒素(YBT-1520ICPs)的抗性发展比对单基因毒素(HD-73ICPs)的抗性发展速度要慢得多。     

大豆铁结合蛋白基因在旱稻中的表达及铁含量分析

【目的】尝试利用转基因方法提高旱稻铁含量。【方法】采用基因枪和农杆菌转化法，将水稻胚乳特异表达的谷蛋白基因启动子GluB-1驱动下的大豆铁结合蛋白基因转入2个优良旱稻品种“旱稻297”和“旱稻277”。利用PCR、Southern杂交分析方法验证转化结果。【结果】转基因植株T1代RT-PCR证明，外源基因在种子中特异表达。T1～T3代的PCR检测证明铁结合蛋白基因已经稳定遗传。多数转基因植株T0～T3代种子中铁含量高于未转化植株，最高达到未转化对照的2倍以上。【结论】利用基因枪和农杆菌转化法可将大豆铁结合蛋白基因导入旱稻基因组中，并使转基因稻米铁含量增高。