苏云金芽孢杆菌的生物活性物质及其蛋白基因

苏云金芽孢杆菌 (Bt)研究的热点正逐步转向新资源的收集和开发 .本文就其杀虫、抑菌、抑癌细胞等 6种主要生物活性物质、蛋白及其编码基因作一回顾与展望     

苏云金芽孢杆菌外孢囊蛋白基因敲除载体的构建

以苏云金芽孢杆菌(Bt)库斯塔克亚种(subsp.kurstaki) 8010为研究材料,通过PCR技术获得Bt8010的外孢囊蛋白基因上下游序列,以含有卡那基因的pDG780质粒为中间载体,通过酶切、连接和PCR,构建含外孢囊蛋白基因上游序列、卡那基因、外孢囊蛋白基因下游序列的基因敲除载体pRN5101UKD,为后续...     

苏云金芽孢杆菌的生物活性物质及其蛋白基因

苏云金芽孢杆菌（Bt)研究的热点正逐步转向新资源的收集和开发，本文就其杀虫，抑菌、抑癌细胞等6种主要生物活性物质，蛋白及其编码基因作一回顾与展望。     

苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因定位研究进展

苏云金芽孢杆菌是目前应用最广泛的杀虫微生物,其活性成分主要是杀虫晶体蛋白、营养期杀虫蛋白和几丁质酶等,本文对编码这些蛋白的基因的定位作一综述,有助于进一步研究基因结构、功能、表达和调控.     

苏云金芽孢杆菌CrylAc原毒素、毒素制备及其对棉铃虫的毒力测定

对提取苏云金芽孢杆菌CrylAc原毒素与活化毒素的制备方法进行了改进,经牛胰蛋白酶作用后用等电点沉淀法和纯化法获得毒素。对样品进行SDS-PAGE分析,并测定其对棉铃虫初孵幼虫的毒力。结果表明制备的CrylAc原毒素和毒素降解较少,杀虫活性高。     

苏云金芽孢杆菌以色列亚种毒素蛋白定量检测方法分析

为完善苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuringrensis subsp. israelensis)毒素蛋白定量检测方法,试验用一定浓度的磷酸缓冲溶液、纯化水洗涤苏云金芽孢杆菌以色列亚种试样,去除培养基残留。用SDS-PAGE电泳法检测离心后收集到的试样菌体毒素蛋白含量。结果表明,通过磷酸缓冲液及水洗涤试样,解决了试样中杂质干扰毒素蛋白含量检测的关键性问题,采用该方法能够准确对苏云金芽孢杆菌以色列亚种两种主要相对分子质量的毒素蛋白进行检测与定量,且重复性好,检测误差可以控制在5%以内,并且检测结果与产品生物效价存在显著相关性。     

苏云金芽孢杆菌Cry1Ac原毒素、毒素制备及其对棉铃虫的毒力测定

对提取苏云金芽孢杆菌Cry1Ac原毒素与活化毒素的制备方法进行了改进,经牛胰蛋白酶作用后用等电点沉淀法和纯化法获得毒素.对样品进行SDS-PAGE分析,并测定其对棉铃虫初孵幼虫的毒力.结果表明制备的Cry1Ac原毒素和毒素降解较少,杀虫活性高.     

苏云金芽孢杆菌几丁质酶基因chiA在枯草芽孢杆菌中的分泌表达

[目的]研究来源于苏云金芽孢杆菌的几丁质酶基因chiA在枯草芽孢杆菌中的表达情况。[方法]以苏云金芽孢杆菌染色体DNA为模板,PCR扩增获取几丁质酶基因chiA,将其与枯草芽孢杆菌表达载体pHSG连接,构建重组菌,经IPTG诱导后,检测培养液中的几丁质酶活性。[结果]扩增得到几丁质酶基因chiA大小为2.5 kb。构建的重组菌对底物[4-MU-(GlcNAc)3]显示出一定的水解活性,培养液酶活约为2.8 U/ml,而pHSG空质粒转化子在同样条件下其培养液没有明显酶活。该重组酶的最适pH值为6.5,最适反应温度为50℃,与苏云金芽孢杆菌自身产生的几丁质酶性质一致。[结论]几丁质酶基因chiA能在枯草芽孢杆菌中成功表达,表达产物可成功分泌到细胞外。     

3种肠毒素基因在苏云金芽孢杆菌中的分布

采用PCR方法对引自美国俄亥俄州立大学芽孢杆菌遗传保存中心(BGSC)的45个苏云金芽孢杆菌(B t)进行了hblA、bceT及entS 3种蜡状芽孢杆菌(Bc)肠毒素基因的检测.结果表明,hblA、bceT及entS的检出率分别为60%、66.7%和44.7%.这45个准菌株涉及到44个B t亚种,说明Bc肠毒素的基因在B t中是普遍存在的,B t的安全性问题仍需继续关注.     

苏云金芽孢杆菌发酵培养基的筛选

采用正交试验对BtWB7菌株发酵培养基进行筛选,结果表明,不同原料对发酵液菌数影响相差较大,其中酵母粉和鱼粉影响最大.本试验获得的最佳摇瓶发酵配方为:玉米粉4%、黄豆饼粉1%、酵母粉2%、鱼粉2.5%和蛋白胨0.1%(质量分数).     

苏云金芽孢杆菌cry基因PCR-RFLP鉴定体系的建立

根据苏云金芽孢杆菌（Bt）cry2、cry3、cry4/cry10型基因的保守区分别设计了3对通用引物S5un2/S3un2、S5un3/S3un3和S5un4/S3un4。PCR扩增产生约1.2kb、1.4kb和1.5kb的产物,然后分别用HincⅡ/MspⅠ、Bg1Ⅱ/PstⅠ和BstEⅡ/DraⅠ酶切,并经RFLP分析鉴定Bt菌株的cry基因型。利用该方法对含已知cry2、cry3、和cry4/cry10型基因的Bt菌株和遗传工程菌进行基因分析,得到的结果与预测的RFLP相符,证明该方法可行。在此基础上对14株Bt分离株的基因型进行了鉴定,其中有9株分离株含cry2型基因;仅菌株Bt22含cry3型基因;所有被测菌株均不含cry4/cry10型基因。     

苏云金芽孢杆菌vip3A基因的检测

苏云金芽孢杆菌是目前研究最为深人、应用范围最广的杀虫微生物，它主要靠芽孢形成期产生的杀虫晶体蛋白作用于昆虫中肠，导致昆虫死亡。目前，人们发现和鉴定了许多具有不同杀虫活性的苏云金芽孢杆菌。基于氨基酸序列和杀虫特异性建立了Cry蛋白的分类表，并且不但被完善。随后PCR技术以其快捷、灵敏、准确等特点被用于Bt菌株的基因鉴定，     

苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因的研究进展

从Bt基因的分类、结构和特性、杀虫机理、在农业上的应用及昆虫对Bt产生抗性的机制等方面进行了论述。     

河北省不同生态区的苏云金芽孢杆菌cry基因多样性研究

为了明确苏云金芽孢杆菌在河北省不同生态区的分布特点和cry基因的多样性,研究从河北省不同生态地区(阜平天生桥、涞源白石山、安新白洋淀、保定郊区大田和安国中草药田)采集土样806份,采用温度-抗生素法分离获得Bt菌株46株,利用PCR-RFLP技术对46株Bt进行了基因型研究,结果表明从这些菌株中发现7种不同的基因型cry1、cry2、cry3、cry4、cry8、cry30和cry32,11株未鉴定出基因型;通过SDS-PAGE分析发现这些菌株主要表达130-150kDa、70-80kDa、60kDa和30kDa蛋白,实验结果说明了苏云金芽孢杆菌在河北省不同生态区均有分布,并且其cry基因类型是复杂多样的。     

苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因工程研究进展

概述苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的结构、功能及其基因分类,综述苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白的基因工程研究及应用。     

三亚地区苏云金芽孢杆菌的筛选与生物活性测定

[目的]从来自三亚地区的102份土壤样品中筛选苏云金芽孢杆菌,并进行生物活性测定。[方法]采用温度筛选法进行苏云金芽孢杆菌的分离,采用形态观察、生物活性分析手段对菌株进行研究。[结果]经过筛选获得21株菌株,分离频率为20．6％,镜检可观察到球形、菱形、方形、不规则形等主要形态的伴孢晶体。室内生物活性测定结果表明：J24-1菌株对小菜蛾具有高感染力。[结论]分离到的菌株产生的伴孢晶体形态各异,体现了三亚地区Bt资源的多样性;出土率较高说明三亚地区可能蕴含着大量未知的Bt资源。     

苏云金芽孢杆菌分子生物学的研究与应用

本文简要描述了苏云金芽孢杆菌的形态特征与培养特性,对近年来有关其分子生物学研究的进展情况作了简要回顾,分析了目前转基因植物与基因工程菌存在的问题,并对其应用前景进行了展望.     

苏云金芽孢杆菌肠毒素的研究进展

苏云金杆菌含有多种毒素,与人畜条件病原菌—蜡质芽孢杆菌有紧密的联系。研究表明用PCR等方法可检测到很多苏云金杆菌含有与蜡质芽孢杆菌类似的多种肠毒素基因,而且,商用肠毒素试剂盒也能检测到有些苏云金杆菌肠毒素的产生,基因核苷酸序列分析表明苏云金杆菌肠毒素基因同蜡质芽孢杆菌肠毒素基因有较高的相似性。该文对苏云金杆菌毒素的基因检测、基因序列分析、活性检测及其安全性方面进行了综述。     

降解大豆抗原蛋白枯草芽孢杆菌的筛选及发酵条件

用不同来源的10株枯草芽孢杆菌菌株P1～P10发酵生豆粕,筛选到1株对大豆抗原蛋白7S伴球蛋白和11S球蛋白的降解能力均较强的P3菌株。采用P3菌株发酵生豆粕,对发酵条件进行pH值、接种量、料水比三因素三水平研究,发现在pH值为6.5,接种量为4%,料水比为1.0∶0.6,P3菌株可降解90%以上的抗原蛋白。     

苏云金芽孢杆菌新菌株GGD-4杀虫晶体蛋白基因分析

利用稀释平板培养法从连云港地区的土壤中分离了一株苏云金芽孢杆菌新菌株GGD-4,通过PCR-RFLP鉴定体系和SDS-PAGE方法分析了此菌株中cry基因类型和表达蛋白。结果表明:该菌株中含有cry1Aa基因型,同时表达130~140kD的蛋白;但EcoRⅠ和PstⅠ酶切结果不同于正常的cry1Aa基因,实验中利用生物信息学方法设计的cry1Aa基因特异引物对扩增后也证明含有cry1Aa基因。室内生测结果显示,该菌株对重要的农业害虫甜菜夜蛾、菜青虫等均有较高的杀虫毒力。