应用三分域模型测定山羊小肠氨基酸消化率

介绍了根据分域理论建立测定山羊小肠氨基酸消化率的三分域模型的可行性及试验实施的方法和步骤.将山羊消化道消化吸收氨基酸的过程分为3个分域:真胃、空肠和回肠.试验分为3步:一是测定回肠体积,二是测定各分域的流率,三是测定真胃和回肠食糜中氨基酸含量和计算小肠氨基酸消化率.     

香蕉14-3-3蛋白基因Ma-14-3-3d的克隆及序列分析

[目的]克隆分析香蕉中14-3-3蛋白编码基因。[方法]采用PCR与RACE技术相结合的方法克隆香蕉14-3-3基因,并进行CDNA测序及同源性分析。[结果]所克隆cDNA全长866 bp,编码197个氨基酸残基,具有植物14-3-3蛋白基因的特征结构域,并与其他植物来源的14-3-3蛋白具有很高的序列相似性,将其命名为Ma-14-3-3d(Musa acuminate14-3-3gene)。[结论]Ma-14-3-3d蛋白与来源于单子叶植物的14-3-3蛋白位于同一进化枝上。     

重组小鼠14-3-3蛋白theta亚型的构建

目的克隆编码14—3—3蛋白质θ亚型的cDNA，制备该蛋白质的基因重组蛋白质．方法参照小鼠14—3-3蛋白质θ亚型mRNA结构设计引物，以小鼠脑总RNA为模板，RT—PCR法克隆编码14—3—3蛋白质θ亚型的cDNA，插入原核表达质粒pGEX-4T-1，转化大肠杆菌BL21（DE3）使其表达谷胱甘肽S转移酶（GST）为标签的融合蛋白质，以凝血酶定点分解融合蛋白并采用GlutathioneSepharose4B亲和层析纯化目的蛋白．结果RT—PCR扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳分离可见约800bp条带，序列分析表明重组质粒pGEX-1433theta中的插入子为738bp，编码245个氨基酸，其核苷酸及氨基酸序列与PubmedNM-011739展示的结果一致．重组质粒pGEX-1433theta在BL21（DE3）中的表达量随IPTG诱导时间递增，融合蛋白质为可溶性组分．亲和层析纯化的14—3—3theta在SDS．PAGE上表现为单一条带，表观相对分子质量为30ku．每L培养菌液可收获4mg基因重组型小鼠14—3—3theta．结论克隆了编码小鼠14—3-3蛋白质θ亚型的cDNA，制备了高纯度基因重组型小鼠14—3—3theta，为进行单克隆抗体的制备奠定了坚实的基础．     

基于ARIMA模型的内蒙古羊产业分析与预测

羊产业是内蒙古畜牧业最具竞争优势的产业。为支持羊产业的结构调整,对一定时期内羊存栏量的预测显得尤其重要。但是,影响养羊的因素很多,不能利用传统的方式进行简单回归分析。采用ARIMA模型对内蒙古羊产业现状进行分析预测,并得出内蒙古羊产业短期内呈持续增长趋势。     

油茶14-3-3蛋白基因的cDNA克隆及序列分析

以构建的油茶近成熟种子cDNA文库和EST文库为基础,采用分子克隆技术,分离克隆1个14-3-3蛋白的全长cDNA序列,由1 156个核苷酸组成,5'非编码区57 bp,3'非编码区301 bp,开放阅读框长777 bp,编码259个氨基酸.该基因编码蛋白的分子质量为29.466 ku,等电点4.78,无信号肽序列,是非分泌蛋白,命名为Co-14-3-3a.推测的二级结构有9个α-螺旋,1个反平行的β-折叠,位于αC和αD之间.     

茶树花蕾14-3-3蛋白基因的分子克隆及差异表达分析

【目的】从分子水平研究茶树花蕾发育阶段的相关基因表达,了解茶树花蕾的发育机理,利用分子生物学技术抑制茶树的生殖生长、促进营养生长。【方法】利用cDNA-AFLP技术对茶树花蕾发育早期和晚期的差异表达进行分析。采用RACE技术克隆到花蕾发育晚期阶段特异表达的、在花蕾发育中可能起重要作用的14-3-3基因,通过RT-PCR和Western-blot方法研究该基因转录水平和蛋白质表达水平的特点。【结果】在测定的大约1 110个茶树花蕾cDNA片段中,122个（10.9%）是差异性表达的,其中87个在发育晚期特异表达,包括茶树14-3-3蛋白基因（GenBank登录号：DQ444463）,其全长为1 072 bp,包含1个由783个核苷酸组成的ORF,编码260个氨基酸,5′非翻译区和3′非翻译区分别有67和222个核苷酸,该基因与其它植物的14-3-3蛋白基因在核苷酸序列和推导的氨基酸序列方面均有着比较高的相似性。RT-PCR和Western-blot分析表明该基因在茶树的晚期发育花蕾中特异表达。【结论】14-3-3蛋白仅存在于茶树发育晚期的花蕾中。cDNA-AFLP技术能用于茶树花蕾不同发育时期的基因分离研究。     

梭梭14-3-3蛋白基因HaFT-9的克隆及特性分析

【目的】分析梭梭14-3-3蛋白基因HaFT-9在不同胁迫下的表达模式,解析HaFT-9蛋白结合特性,为研究梭梭抗逆分子机制提供理论基础。【方法】以梭梭cDNA为模板克隆14-3-3蛋白基因HaFT-9,利用qRT-PCR技术对该基因在不同胁迫下的表达模式进行分析,并通过酵母双杂交实验验证HaFT-9蛋白结合特性。【结果】克隆得到ORF长度为789 bp的梭梭14-3-3蛋白基因,命名为HaFT-9。梭梭幼苗在20% PEG6000、200 mmol/L NaCl和100 μmol/L ABA处理下,HaFT-9的表达量均在胁迫6 h时达到峰值,在20 μmol/L IAA处理下,HaFT-9的表达量在胁迫1 h时达到峰值。梭梭幼苗经40、55℃和55、65℃模拟地表高温胁迫,高温胁迫适应性试验中的常温复原阶段HaFT-9均上调表达。酵母双杂交实验表明HaFT-9可与自身形成同源二聚体。【结论】克隆得到HaFT-9基因(登录号为API85525.1),该基因可响应干旱胁迫、盐胁迫、ABA和IAA处理,并与高温胁迫适应性相关,HaFT-9蛋白能与自身互作形成同源二聚体。     

松材线虫和拟松材线虫14-3-3蛋白基因全长cDNA克隆与分析

[目的]对松材线虫和拟松材线虫的14-3-3蛋白基因进行全长cDNA克隆,并进行序列分析。[方法]根据GenBank数据库中14-3-3蛋白EST序列BXC56（登录号为FG589472）、BMCl20（登录号为FG589351）,采用RACE技术获取松材线虫和拟松材线虫14-3-3蛋白的全长cDNA克隆Bxl4-3-3a和Bml4-3-3a,并对克隆片段序列进行分析。[结果]Bx14-3-3a全长1039bp,包含一个756bp的开放阅读框,编码蛋白含有251个氨基酸残基,包含2个14-3-3蛋白标签,编码蛋白分子量为61．43kD,等电点为4．88。Bx14-3-3a基因组结构中包含4个外显子和3个内舍子序列。Bm14-3-3a全长992bp。有与Bx14-3-3a编码完全相同的氨基酸序列。序列比对结果表明,14-3-3在真核生物间高度保守,Bx14-3-3A和Bm14-3-3A蛋白在系统进化上与线形动物门（Nematomorpha）的物种近缘关系较近,与植物线虫南方根结线虫（Meloidogyneincognita）系统发育关系上最为亲近。[结论]Bx14-3-3a和Bm14-3-3a的成功克隆,为进一步研究其功能及其调控因子对形态、致病力、繁殖力和环境适应性等方面的分子调控机制奠定了重要基础。     

普通菜豆14-3-3蛋白基因PvGF14h的克隆及冷胁迫诱导表达分析

根据14-3-3蛋白的保守性及菜豆基因组信息,从普通菜豆品种东北小油豆中克隆了一个14-3-3蛋白基因PvGF14h.生物信息学分析表明,该基因编码的蛋白以α螺旋为主导结构,具有典型的14-3-3蛋白结构域,主要分布在细胞质与过氧化体中,具有磷酸化位点;序列比对及进化树分析表明,它与大豆14-3-3蛋白SGF14h有较高的同源性(可达98.1％);进一步利用实时定量RT-PCR分析PvGF14h响应冷胁迫的表达模式,结果表明该基因的表达随着冷胁迫处理时间的增长而增加,因此推测PvGF14h可能参与了冷胁迫的信号转导过程.这些关于菜豆14-3-3蛋白基因的基本信息为进一步研究其功能尤其在响应低温胁迫方面奠定了基础.     

4个微卫星标记对3个绵羊品种肉用性状多态性的研究

选用无角陶赛特、萨福克与中国美利奴肉用绵羊161只,经耳组织提取其基因组DNA,并通过4对微卫星引物对其进行PCR扩增,然后通过电泳分型、凝胶成像系统分析各位点等位基因及全部个体的标记基因型,计算基因频率、多态信息含量(PIC)和杂合度等遗传多态性指标.结果表明,BM3413,BP33,MCM38,MCMA26位点的等位基因数分别为12、15、13、13,多态信息含量丰富,杂合度高,均属于高度多态性位点,用于绵羊肉用形状较理想的遗传标记.     

Molecular analysis of protein assembly in muscle development

The challenge presented by myofibril assembly in striated muscle is to understand the molecular mechanisms by which its protein components are arranged at each level of organization. Recent advances in the genetics and cell biology of muscle development have shown that in vivo assembly of the myofilaments requires a complex array of structural and associated proteins and that organization of whole sarcomeres occurs initially at the cell membrane. These studies have been complemented by in vitro analyses of the renaturation, polymerization, and three-dimensional structure of the purified proteins.     

Estimation of rice protein content before harvest using ground-based hyperspectral imaging and region of interest analysis

Protein content, which represents rice taste quality, must be estimated in order to create a harvesting plan as well as next year’s basal dressing fertilizer application plan. Ground-based hyperspectral imaging with high resolution (1 × 1 mm per pixel) was used for estimating the protein content of brown rice before harvest. This paper compares the estimation accuracy of rice protein content estimation models generated from the mean reflectances of five regions of interest (ROIs): the overall target area, dark area (less illuminated parts of the rice plants), canopy area (leaves, yellow leaves, and ears), leaf area, and ear and yellow leaf area. The size of the target sampling area was 0.85 × 0.85 m. An R + G + B histogram and a GNDVI–NDVI image were used to separate the target area into the individual ROIs. The values of the coefficient of determination R ² and the root mean square error of prediction (RMSE) were similar for each model: R ² ranged from 0.83 to 0.86 and RMSE ranged from 0.27 to 0.30% for all models except for the dark area model, where R ² = 0.76 and RMSE = 0.35%. There were no significant differences in the magnitude of the estimation error among all models. This result indicates that it is not necessary to obtain an image with a ground resolution that is greater than 0.85 × 0.85 m per pixel to estimate rice protein content before harvest. This result should provide useful information when deciding the altitude of platforms for imaging rice fields.     

Plant development: regulation by protein degradation

Many aspects of eukaryotic development depend on regulated protein degradation by the ubiquitin-proteasome pathway. This highly conserved pathway promotes covalent attachment of ubiquitin to protein substrates through the sequential action of three enzymes called a ubiquitin-activating enzyme (E1), a ubiquitin-conjugating enzyme (E2), and a ubiquitin-protein ligase (E3). Most ubiquitinated proteins are then targeted for degradation by the 26S proteasome. Recent studies have also shown that the ubiquitin-related protein RUB/Nedd8 and the proteasome-related COP9 signalosome complex cooperate with the ubiquitin-proteasome pathway to promote protein degradation. Most of these components are conserved in all three eukaryotic kingdoms. However, the known targets of the pathway in plants, and the developmental processes they regulate, are specific to the plant kingdom.     

苏尼特羊不同生长时期肌肉组织lncRNA的差异表达分析

为鉴定和分析苏尼特羊肌肉不同发育时期lncRNA的差异表达,利用RNA-seq技术对120d苏尼特羊胎儿和5月龄羔羊肌肉组织进行了lncRNA比较分析,筛选出差异表达的lncRNA及其靶基因,并对预测的mRNA进行了GO和KEGG分析,同时对随机筛选的差异表达lncRNA进行qRT-PCR验证。结果显示,120d和5月龄羔羊肌肉之间差异表达的lncRNA数共为626个,共靶向1 273个mRNA编码基因。GO和KEGG分析表明,这些差异基因主要涉及代谢过程的调控,生物合成,基因表达,蛋白结合以及mTOR信号通路、FoxO信号通路、胰岛素信号、肌动蛋白细胞骨架的调节、Wnt信号通路和间隙连接等信号通路。qRT-PCR验证证明,随机选取的8个lncRNA在肌肉组织中的表达量与RNA-seq结果一致。综上,本研究利用RNA-Seq技术分析了苏尼特羊120d胎儿和5月龄羔羊的差异表达lncRNA及其靶基因,发现其参与了不同生长时期苏尼特羊的肌肉发育和生长过程,为从lncRNA的角度更好地理解苏尼特羊肌肉生长发育的遗传调控机制提供了理论基础,也为绵羊分子辅助育种提供参考。     

宁夏土地退化经济损失估算

土地退化现场损失用成本替代法(计算产量的损失,收益下降,土壤中的有机质及N,P,K的损失)估算.现场外损失用工程替代法(建淤泥坝的工程费用或水库清淤的工程费用,治理盐渍化土地的工程费用)估算,经估算宁夏由于土地退化,每年造成直接经济损失和生态损失折合人民币58.13亿元,占2005年宁夏GDP总量的近10%.     

Targeted protein degradation and synapse remodeling by an inducible protein kinase

Synaptic plasticity involves the reorganization of synapses at the protein and the morphological levels. Here, we report activity-dependent remodeling of synapses by serum-inducible kinase (SNK). SNK was induced in hippocampal neurons by synaptic activity and was targeted to dendritic spines. SNK bound to and phosphorylated spine-associated Rap guanosine triphosphatase activating protein (SPAR), a postsynaptic actin regulatory protein, leading to degradation of SPAR. Induction of SNK in hippocampal neurons eliminated SPAR protein, depleted postsynaptic density-95 and Bassoon clusters, and caused loss of mature dendritic spines. These results implicate SNK as a mediator of activity-dependent change in the molecular composition and morphology of synapses.     

新疆巴什拜羊BPI基因cDNA全长的克隆及序列分析

【目的】克隆巴什拜羊杀菌/通透性增强蛋白(BPI)的cDNA序列,为研究该蛋白的结构和功能奠定基础。【方法】采集巴什拜羊外周血液,从中分离得到中性粒细胞后提取RNA。根据GenBank中牛BPI基因的cDNA序列设计兼并引物,用RT-PCR方法扩增巴什拜羊BPI基因部分序列,再根据已知的巴什拜羊BPI基因部分序列设计RACE引物,分别扩增出5′和3′端目的片段,分别回收克隆的目的基因片段,再与pMD18-T载体连接,分别转化到大肠杆菌DH5α中,筛选阳性克隆,将重组菌测序后进行拼接,获得巴什拜羊BPI基因全长cDNA序列,并对序列进行分析。【结果】克隆的巴什拜羊BPI基因cDNA序列全长1 922bp,其中开放阅读框为1 452bp,共编码483个氨基酸;BLAST分析表明,巴什拜羊BPI基因的核苷酸序列与绵羊、牛、虎鲸、野猪、猕猴、人、家兔、小鼠、非洲爪蟾核苷酸的一致性分别为99%,91%,78%,74%,64%,61%,58%,53%和50%;氨基酸进化分析显示,巴什拜羊首先与绵羊聚为一类,其次与牛聚为一类,该聚类分析结果与生物学分类结果表现一致。【结论】通过RACE方法成功地克隆了1 922bp的巴什拜羊BPI基因cDNA全长序列,且基因进化树聚类结果与生物学分类结果相一致。     

岷县黑裘皮羊血液蛋白多态性的研究

采用不连续非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对42只岷县黑裘皮羊的血红蛋白(Hb)和转铁蛋白(Tf)基因座的多态性进行了研究。结果表明:岷县黑裘皮羊的Hb、Tf位点均存在多态性;Hb位点共检测到HbA、HbB和HbC 3个等位基因,共构成HbAA、HbBB、HbAC和HbBC 4种基因型,其中HbBB和HbB为优势基因型和优势基因;Tf位点共检测到TfBB、TfCC、TfAB、TfAC、TfAD、TfBC、TfCD 7种基因型,受TfA、TfB、TfC、TfD 4个复等位基因控制,其中TfCC和TfC为优势基因型和优势基因。