山羊FSH类似物基因构建及其表达

以HCGβ亚基羧基末端延长肽CTP基因为连接序列，重组山羊FSHα和β亚基基因，获得单链gFSHβ-CTP-α，克隆人表达载体pVITRO，测序后转染CHO细胞。结果表明，成功完成了单链山羊FSH类似物表达载体的构建，并得到稳定表达的CHO细胞株，其表达量为0．120mIU／mL，为进一步研究CTP结构与功能的关系，以及长效FSH制剂的研制奠定了分子基础。     

山羊FSH真核表达载体pVITRO-FSHαβ构建及在CHO细胞内稳定表达

在对山羊促卵泡素α、β亚基基因克隆和瞬时表达的基础上，构建促卵泡素αβ双表达载体，并转染中国仓鼠卵巢细胞（Chinese Hamster Ovary Cells，CHO），在潮霉素B的抗性筛选下，进行稳定表达，获得了稳定表达的CHO细胞株，为重组激素制剂的研制提供了必备条件。     

刺五加对糖尿病动物模型的降血糖影响初探

为了探讨长白山天然野生刺五加对实验性糖尿病小鼠血糖的影响,试验选用昆明种小鼠,禁食12h,腹腔注射四氧嘧啶,选择性破坏胰岛β细胞,造成小鼠实验性糖尿病模型。取40只糖尿病模型小鼠随机分为刺五加高、中、低剂量组和四氧嘧啶模型组,另取重量相近的正常10只昆明种小鼠作为空白对照组。刺五加高、中、低剂量组分别给予5.00,1.25,0.25g/kg的刺五加水煎液灌胃,四氧嘧啶模型组和空白对照组给予同体积的生理盐水。连续灌胃15d,测定其空腹血糖,观察模型小鼠血糖变化。结果表明,刺五加高、中剂量组的血糖值分别为（13.51±1.42）mmol/L、（15.39±0.79）mmol/L,与模型对照组（19.62±1.28）mmol/L相比,极显著降低血糖水平（P＆lt;0.01）。低剂量组（17.39±0.64）mmol/L与模型对照组相比,差异显著（P＆lt;0.05）。由此可见,长白山野生刺五加对实验性小鼠具有降血糖作用。     

甲砜霉素在鸡体内的药动学

20只健康杂交肉鸡,随机分成2组,每组10只,雌雄各半,分别进行静脉注射和口服甲砜霉素给药的药动学研究。静注和口服的给药剂量分别为15、30 mg/kg。以反相HPLC测定血浆中甲砜霉素的浓度,药物浓度-时间数据用3P97药动学程序软件处理。鸡单剂量静注给药后,血药浓度-时间数据符合无吸收二室开放模型,其主要动力学参数分别为:V(c)(0.92±0.01)L/kg,t1/2α(0.27±0.02)h,t1/2β(3.46±0.74)h,AUC(11.67±0.57)mg/(L.h),CL(s)1.29 L/(kg.h)。鸡单剂量口服给药血药浓度-时间数据符合一级吸收一室开放模型,其主要动力学参数分别为:Lagtime(0.04±0.01)h,t1/2ka(0.76±0.11)h,t1/2ke(2.16±0.58)h,T(peak)(1.73±0.11)h,C(max)(6.03±0.92)mg/L,AUC(32.43±0.75)mg/(L.h),F(138.58±0.07)%。甲砜霉素在鸡体内的药动学特征表现为分布广泛,消除迅速;口服给药吸收迅速且完全,生物利用度高。     

牛BLG基因5′调控序列控制GFP基因在原代乳腺上皮细胞中的表达

采用胶原酶分阶段消化法对家兔的原代乳腺上皮细胞进行了分离培养 ,并且构建了以牛 β-乳球蛋白 (BL G)基因5′调控序列为启动子、以绿色荧光蛋白 (GFP)基因为报告基因的真核表达载体。将该载体转染兔原代乳腺上皮细胞 ,然后用不同质量浓度的皮质醇、胰岛素和催乳素诱导。结果表明 ,用 5 mg/ L 催乳素 5 mg/ L 胰岛素 1m g/ L 皮质醇诱导 ,在诱导 36 h后开始有荧光出现 ,诱导 4 8～ 6 0 h时荧光更强一些 ,而未经诱导的细胞 GFP则不表达     

芹菜素通过NF-κB和MAPK通路抑制MAC-T细胞和小鼠乳腺的炎性反应

为揭示芹菜素对奶牛乳腺炎的抑制作用及其机制,本研究采用脂多糖(LPS)刺激MAC-T细胞,MTT方法检测芹菜素对奶牛乳腺上皮细胞MAC-T的毒性;real-time PCR和Western blot方法检测炎性因子白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及氧化应激因子诱生型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧酶2(COX-2)的表达水平;Western blot检测核因子κB(NF-κB)和促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路关键蛋白的表达水平和磷酸化水平;免疫荧光检测NF-κB的核转移情况。结果表明：芹菜素(1,7,15 mg/L)显著降低了MAC-T细胞和小鼠乳腺中LPS诱导的COX-2、iNOS、IL-1β、IL-6的mRNA与蛋白质的表达水平(P<0.01)。而且,芹菜素显著降低了MAC-T细胞以及小鼠乳腺中LPS诱导的NF-κB(p65和IκBα)(P<0.05)和MAPK(p38、JNK1/2和ERK1/2)(P<0.01)的磷酸化水平,抑制了NF-κB p65的核转移。这些结果说明芹菜素通过抑制NF-κB和MAPK信号...     

小鼠乳清酸蛋白上游调控序列的克隆及其指导下CAT基因在家兔乳腺中的表达

应用PCR技术，从小鼠基因组中克隆了1．6kb乳清酸蛋白(WAP)基因5’上游调控序列，经酶切和测序证实与已知序列基本一致。为了证实此调控序列能否指导外源基因在乳腺中的表达，将此序列与报告基因CAT融合，构建了pWAP—CAT—polyA乳腺定位表达载体，脂质体包裹后，经乳导管将其注入到妊娠中后期家兔乳腺中进行暂时表达。分别于家兔分娩后1—10d采奶，用ELISA检测乳汁中CAT含量。结果表明，所构建的载体在家兔乳腺中能够表达，表达水平在家兔分娩后1—5d较高。     

抗菌肽天蚕素B基因的克隆及其在山羊乳腺中的暂态表达

根据已发表的天蚕素B的cDNA序列化学合成4务引物,以重叠延伸PCR的方法合成了真核细胞偏爱密码子编码的抗菌肽天蚕素B基因,将其克隆于pMD18-T栽体,DNA序列分析证实合成的抗菌肽基因的碱基序列与设计的序列完全一致.利用山羊-β酪蛋白基因5'侧翼调控序列和真核基因表达栽体plRES1-neo,构建抗菌肽天蚕素B的乳腺组织特异性表达载体pbCP-cpin,将该载体溶于生理盐水,注入处于泌乳期的成年母山羊乳腺组织进行暂时表达.通过对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌试验确定了抗菌肽天蚕素B基因在山羊乳腺中的表达和抗菌活性.本试验建立了抗菌肽天蚕素B的乳腺瞬时表达系统,为验证各调控元件以及抗菌肽基因在转基因动物乳汁中分泌表达的有效性和可行性提供了一个快速检测系统.     

真鲷血液生理生化指标的研究

通过对真鲷血液的红细胞数、白细胞数、血红蛋白含量、血清酸性磷酸酶活力、血清碱性磷酸酶活力、血清乳酸脱氢酶活力,以及血清白蛋白、血清总蛋白、血清总胆固醇、血清甘油三酯含量进行测定。其结果经统计学分析表明,真鲷血液的红细胞数为（223.25&#177;14.89）万个/mm^3,白细胞数为（4.55&#177;0.60）万个/mm^3,血红蛋白含量为（65.75&#177;6.85）g/L,血清酸性磷酸酶活力为（2.58&#177;0.45）U/L,血清碱性磷酸酶活力为（42.97&#177;4.17）U/L,血清乳酸脱氢酶活力为（205.28&#177;14.82）U/L,血清白蛋白含量为（31.73&#177;3.53）g/L,血清总蛋白含量为（63.10&#177;3.74）g/L,血清总胆固醇含量为（4.11&#177;0.57）mmol/L,血清甘油三酯含量为（1.10&#177;0.22）mmol/L。     

钙信号转导与缺氧诱发肉鸡心肌细胞c-fos和c-myc基因表达的关系

利用细胞培养、免疫组化、原位杂交、图像分析技术研究钙信号与缺氧诱发心肌细胞癌基因c-fos、c-myc表达的关系,进一步阐明钙信号转导与以右心肥大衰竭为特征的肉鸡腹水综合征(AS)的关系。结果显示,钙通道拮抗剂异搏安(V)、硝苯吡啶(N)、环孢霉素A(C)显著抑制缺氧引起的癌基因c-fos和c-myc mRNA的表达(c-fosmR-NA:常氧149.6&#177;22.4;缺氧205.4&#177;57.6,缺氧+V151.3&#177;20.1,缺氧+N154.5&#177;25.2,缺氧+C 166.5&#177;22.1;c-myc mRNA:常氧155.2&#177;25.7;缺氧197.4&#177;26.2,缺氧+V 160.5&#177;19.4,缺氧+N 171.3&#177;25.4,缺氧+C158.9&#177;23.6)。同时显著抑制缺氧引起的癌基因c-fos和c-myc蛋白的表达(c-fos蛋白:常氧159.1&#177;37.1,缺氧240.3&#177;49.6,缺氧+V 165.2&#177;52.2,缺氧+N 166.5&#177;49.8,缺氧+C 190.8&#177;33.6;c-myc蛋白:常氧149.6&#177;24.9,缺氧236.3&#177;55.4,缺氧+V178.9&#177;42.1,缺氧+N174.4&#177;36.3,缺氧+C 16...