重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗免疫效果试验

禽流感是由A型流感病毒引起的一种禽类急性败血性、高度接触性传染病。对家禽进行禽流感疫苗的预防接种是我国采取防制禽流感的主要措施之一,可以通过检测血清免疫抗体的血凝抑制效价来反映机体的免疫状态和抵抗力。为了了解重组禽流感病毒H5二价灭活疫苗（H5N1,Re-4株＋Re-5株）免疫抗体的消长规律,特制定本试验方案,具体如下：     

重组禽流感H5亚型二价疫苗的免疫监测

A型流感病毒的血凝素（HA）目前已发现16种，神经氨酸酶（NA）有10种，且不同的H抗原或N抗原之间无交叉反应。同时，它们可以以不同的配对组合、变异形成新的毒株。2008年12月初，国内某地监测发现的毒株就是变异的新毒株。农业部为预防控制这一新变异毒株对养鸡业的危害，保障生产安全，决定对鸡群实施重组禽流感H5亚型二价（H5N1，Re-5株＋Re-4株）灭活疫苗的免疫（以下简称禽流感H5亚型二价苗）。按照这一部署要求，     

肉鹅H5亚型禽流感疫苗免疫效果的研究

选用H 5亚型禽流感油乳剂灭活疫苗(H 5N 1,R e1株)对马岗鹅作首免日龄、免疫次数与免疫剂量的免疫试验。结果表明,雏鹅在7、14或21日龄作1次免疫均产生免疫应答,其中14与21日龄免疫组免疫后第5周抗体水平均达4 log2以上,抗体动态变化均值与峰值均高于7日龄免疫组2~3个滴度。用0.5、1和2 m l/只3个剂量对14日龄雏鹅的免疫试验中,0.5m l组抗体水平上升过程缓慢,免疫后4周抗体水平才达4 log2以上,1与2 m l组在免疫1周后上升速度较快,免疫后2周即达4 log2以上,抗体水平相近,但2 m l免疫组免疫后5~7周抗体水平均低于1 m l免疫组。说明接种剂量为1或2 m lH 5N 1油苗比接种0.5 m l的免疫效果好,尤以1 m l免疫剂量效果最好。雏鹅在7、14日龄或14、21日龄作2次免疫和7、14、21日龄作3次免疫,首免后抗体上升速度快,各检测点抗体水平均值相近,均在首免后3周达到4 log2以上,4~5周达6 log2以上,4~7周的抗体水平均高于14日龄1次免疫组,且提前2周达到4 log2以上,说明2次、3次免疫组的抗体水平高于1次免疫组,而2次与3次免疫组的抗体水平无明显差异。以上结果说明,在肉鹅生产的禽流感免疫中,选择以14日龄首免0.5 m l/只,21日龄2免接种1 m l/只可取得较为理想的免疫效果。     

重组H5亚型禽流感病毒三价灭活疫苗免疫效果的评价

为了评价重组H5亚型禽流感病毒三价灭活疫苗的免疫效果,在2016年7月至2017年8月期间,对免疫重组H5亚型禽流感病毒三价灭活疫苗(H5N1,Re-6株+Re-7株+Re-8株)的家禽采集了1 999份血清样品,采用血凝与血凝抑制方法进行检测,结果为H5亚型禽流感病毒Re-6株免疫合格率为86.84%,H5亚型禽流感病毒Re-7株免疫合格率71.44%,H5亚型禽流感病毒Re-8株免疫合格率为67.78%。结果表明,免疫重组H5亚型禽流感病毒三价灭活疫苗后,不同毒株的抗体、不同种类的家禽、不同免疫次数的抗体水平均有差异。     

细胞源H5亚型禽流感病毒灭活疫苗免疫效果试验

为探索细胞悬浮培养法生产H5亚型禽流感灭活疫苗的应用效果,试验选用10日龄四明香鸡100羽,随机分为A组与B组,每组50羽,分别采用由细胞悬浮培养法工艺生产和传统鸡胚繁殖工艺生产的H5亚型禽流感疫苗免疫鸡群,并于首免前、首免后28 d、60 d、90 d抽取血样对鸡群开展禽流感免疫抗体水平监测。结果表明,使用两种疫苗均能诱导产生较高的HI抗体水平,达到防控禽流感的目的。     

重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗田间免疫效果观察

为了解不同厂家重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗现地免疫效果及抗体消长规律,指导实践应用,特进行本试验。1材料和方法1.1疫苗哈药集团生物疫苗有限公司(A公司)重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株),     

H5亚型禽流感疫苗对蛋鸭免疫效果影响的研究

用H5亚型禽流感疫苗对58个养鸭场的150~450日龄产蛋鸭进行2次免疫后,21~180 d随机抽取有效血清674份进行HI抗体水平监测,分析其免疫效价。结果表明：处于产蛋高峰期的300日龄组蛋鸭免疫效果最佳,抗体有效率达到100%,抗体效价达到8.7 log2,除与250日龄组无显著差异（P>0.05）外,与其他各组比较差异显著（P<0.05）;蛋鸭在免疫后21~120 d内均能维持较高的HI抗体效价,并在61~90 d进入高峰期,此期抗体合格率达97.9%,抗体效价为7.7 log2,与免疫后121~150 d及151~180 d比较差异极显著（P<0.01）;同时,经与鸡的免疫效果相比,蛋鸭免疫后所产生的HI抗体效价显著高于鸡（P<0.05）。     

H5亚型禽流感疫苗免疫效果的评估与分析

检测648份不同禽群血样的H5亚型禽流感免疫抗体水平,平均合格率为68.63%。其中规模鸡群血样100份,免疫抗体合格率为77.10%;规模鸭群血样100份,合格率为79.10%,鹅、番鸭群血样30份,合格率为53.33%;农户散养鸡血样104份,合格率为75.96%;散养鸭血样6份,合格率为50.10%,散养鹅、番鸭血样27份,合格率为21.10%;市场鸡血样202份,合格率为58.91%;市场鸭血样79份,合格率为70.42%。     

H5亚型禽流感疫苗免疫快大肉鸡效果观察

快大肉鸡是我区禽类养殖中的主要品种,生长速度快,饲养周期短,40日龄可出栏上市,但如何预防高致病性禽流感的侵袭是养殖过程必须面对的重要课题。本试验根据当地养殖条件和快大肉鸡的的饲养特点,采用不同亚型的禽流感疫苗免疫快大肉鸡,对肉鸡免疫前后的抗体消长规律进行了对比分析,以期获得快大肉鸡理想免疫程序。1材料与方法1.1疫苗1.1.1禽流感灭活油乳剂疫苗(H5N2亚型),生产批号为005003,国产。1.1.2重组禽流感病毒灭活苗(H5N1亚型,RE-1株),生产批号为2005105,国产。1.2试验动物肉鸡:1日龄含H5亚型禽流感母源抗体科宝—500肉鸡900只,广…     

H_5亚型禽流感病毒灭活疫苗免疫效果评价试验

选取我省中标的两种类型6个批次的H5亚型禽流感病毒灭活疫苗,双盲条件下,在黄羽肉鸡中进行免疫效果比对试验。于14、35天龄进行两次免疫,在21、28、35、42、49、56、63、77、91、105和113 d进行抗体检测,结果全期平均免疫抗体水平超过6l og2,各批次疫苗间的免疫抗体水平略有差异。本次试验初步明确了H5亚型禽流感灭活疫苗接种后的抗体消长规律,为疫苗选择和免疫程序的制定提供依据。     

二种重组禽流感H5亚型二价灭活疫苗免疫效果的对比试验

近年来,高致病性禽流感在我国及世界上许多国家暴发流行,给养禽业造成了巨大的经济损失。同时由于禽流感有直接感染人的能力,也给人类的心理和生命健康造成巨大的威胁。     

两个新型H5亚型禽流感疫苗研制成功

在农业部和科技部共同主持及国家“973”、“863”和“攻关”项目资助下,通过30多位科研人员不懈的努力,具有国际先进水平的高效、安全新型H5N1亚型禽流感灭活疫苗和重组禽痘病毒活载体疫苗,近日由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所的农业部动物流感重点开放实验室及国家禽流感参     

两个新型H5亚型禽流感疫苗研制成功

本刊讯 :在农业部和科技部共同主持及国家“973”、“863”和“攻关”项目资助下 ,通过30多位科研人员不懈的努力 ,具有国际先进水平的高效、安全新型H5N1亚型禽流感灭活疫苗和重组禽痘病毒活载体疫苗 ,近日由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所的农业部动物流感重点开放实验室及国家禽流感参考实验室研制成功。新型H5亚型禽流感灭活疫苗系由高度致弱的H5N1亚型疫苗种子株制备 ,该疫苗种子株的研制采用了当前国际先进的流感疫苗株构建策略 -流感病毒反向基因操作技术 ,其决定免疫保护原性的表面基因来自H5N1亚型高致病性禽流感流行株 ,并人…     

H5亚型禽流感病毒多肽疫苗的初步研制

本试验利用生物软件对H5亚型禽流感病毒A/CK/GD/178/04的血凝素进行抗原特性分析,结合关于禽流感病毒血凝素抗原位点的文献报道,选定97～212位氨基酸和369～529位氨基酸两个区域作为多肽表位候选区域.利用本实验室自主研发的原核表达载体pBT载体,串联表达HA的两个区域,经SDS-PAGE和Western Blotting分析,证明重组产物得到表达,Ni2+柱纯化重组蛋白后,对2周龄SPF鸡进行免疫,经HI试验检测该重组蛋白可以刺激机体产生HI抗体.本研究为H5亚型AIV多肽疫苗的进一步研制奠定了基础.     

H5亚型禽流感病毒的危害与疫苗研究进展

H5亚型禽流感病毒（AIV）在全球范围内的广泛传播,对禽类养殖业健康发展与公共卫生安全都造成了巨大威胁。本文阐明了以H5N1、H5N6、H5N8亚型为代表的H5亚型AIV引发的国内外多起家禽和野鸟疫情,使家禽养殖业蒙受严重损失,且H5亚型AIV易变异和重组的特点,增加了疫情防控难度,同时也极易引发跨越物种屏障向人传播事件,危害公共卫生安全等问题;系统阐述了灭活疫苗等不同种类AIV疫苗的研发进展,强调了当前灭活疫苗应用最为广泛,但亚单位疫苗、DNA疫苗、多肽疫苗等新型疫苗正日益获得关注。本文以期为禽流感疫情暴发预警,“同一健康”理念宣贯,以及疫苗研发提供理论支持。     

免疫PCR检测微量H5亚型禽流感病毒

为了有效检测低浓度禽流感病毒,笔者通过将高特异性的抗原-抗体反应与高灵敏性的PCR扩增技术相结合,建立了一种快速检测痕量H5亚型禽流感病毒的间接免疫PCR方法和间接“三明治”抗体夹心免疫PCR方法.以TopYield 96孔板为固相免疫吸附载体,以禽流感病毒H5蛋白为检测对象,通过一系列免疫反应及亲和素-生物素桥联作用,将生物素标记的报告DNA分子和生物素标记的禽流感病毒H5亚型抗体分子连接.充分洗涤后,在TopYield板孔中添加PCR反应液,对板壁偶联的报告DNA进行PCR扩增,间接达到检测微量禽流感病毒H5蛋白的目标.通过优化报告DNA分子和链亲和素的浓度,2种免疫PCR技术都可检测到约1 fg的禽流感病毒H5蛋白,与常规ELISA方法相比,灵敏性提高了近1 000倍.     

快大型商品肉鸡免疫H5亚型禽流感疫苗效果探讨

对不同日龄AA商品肉鸡和SPF鸡接种禽流感-新城疫重组二联活疫苗、重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗以及重组活疫苗和灭活苗联合接种,结果表明,H5亚型禽流感重组活疫苗和灭活疫苗或两者联合免疫商品肉鸡均不能产生良好的免疫效果,建议商品肉鸡高致病性禽流感的防控不仅要进行疫苗接种,还需落实生物安全措施。     

H5N1亚型禽流感病毒HA基因核酸疫苗的构建及免疫效果研究

采用RT-PCR技术扩增了高致病性禽流感病毒A/Goose/HLJ/QFY/04（H5N1）HA基因,然后将其克隆到真核表达载体pCI-neo中,获得重组质粒pCI-HA。在脂质体介导下转染Vero细胞,单抗免疫组化IPMA结果表明,HA蛋白在VeroE6细胞上大量表达。pCI-HA质粒在有或无脂质体佐剂存在下以50μg剂量免疫接种Balb/c小鼠和SPF鸡,对照组只接种50μgpCI-neoDNA,各组以相同剂量加强免疫两次,每次免疫间隔3周。每次免疫前采集血清用ELISA检测抗体效价。最后一次免疫后3周用10^6EID50的高致病性流感病毒A/Goose/HLJ/QFY/04（H5N1）进行攻毒试验。免疫组小鼠抗体效价与对照组相比明显升高,但脂质体佐剂免疫组与非脂质体免疫组小鼠抗体效价差异不显著,基因免疫组小鼠能够抵抗H5N1高致病性禽流感病毒的致死性攻击。该核酸疫苗虽然能够诱导SPF鸡产生抗体应答,但抗体产生缓慢,效价较低。     

H5亚型高致病性禽流感疫苗的免疫效力

利用表达H5亚型禽流感病毒血凝素基因(HA)的重组鸡痘病毒(rFPV-HA)和全病毒灭活疫苗免疫商品鸡，比较两种疫苗的保护效力。结果发现，利用10^3PFU和10^6PFU的rFPV-HA免疫无母源抗体商品鸡和含母源抗体商品鸡，HI抗体应答水平均低于灭活疫苗免疫组。利用H5亚型禽流感病毒经肌肉注射攻毒后，rFPV-HA免疫的无母源抗体商品鸡获得了完全保护(100％)，高于灭活疫苗保护率(94.7％)；但rFPV-HA免疫含母源抗体商品鸡诱导的保护率(11.4％～15.8％)低于灭活疫苗免疫组的保护水平(68.4％)。结果表明，rFPV-HA诱导HI抗体的能力低于灭活疫苗；但rFPV-HA免疫无母源抗体商品鸡的保护率完全达到灭活疫苗保护水平，显示出了良好的应用前景；灭活疫苗和rFPV-HA均受到母源抗体的干扰，不适于在母源抗体处于高峰期时使用。