辣根过氧化物酶催化氧化17β-雌二醇的研究

[目的]优化辣根过氧化物酶（HRP）催化氧化17β-雌二醇（E2）的体系。[方法]研究反应体系pH值、反应温度、H2O2浓度、反应时间、HRP浓度和E2初始浓度对E2去除效果的影响。[结果]HRP能有效催化H2O2氧化水体中的E2。HRP酶催化氧化E2的适宜条件是：pH值为6.5,反应温度25℃,H2O2与E2摩尔反应计量比（MH2O2∶ME2）为1∶2。增大HRP和E2起始反应浓度,以及适度增加H2O2用量,反应速度会明显加快,但过量的H2O2会抑制HRP的催化活性,减小E2去除率。在[E2]初始=0.07342mmol/L,[HRP]=0.07342U/ml,pH值为6.5,反应温度为25℃和MH2O2∶ME2=1∶2条件下,反应60min,E2去除率达到94.8%。[结论]该研究可为提高H2O2氧化水体中E2的去除率提供科学依据。     

海门山羊超排及血浆孕酮和17β-雌二醇浓度

对28只性周期正常山羊分别注射1500iu PMSG(Ⅰ组)、300iu FSH(Ⅱ组)和等量生理盐水(Ⅲ组),比较两种促性腺激素的超排效果;用放射免疫方法测定血浆孕酮(P_4)和17β-雌二醇(E_2-17β)浓度。试验发现:(1)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的排卵率依次为12.00+1.71、21.22+2.25和2.75±0.31,超排效果FSH优于PMSG。(2)PMSG和FSH处理后,P_4和E_2-17β浓度都上升,但PMSG组只有在48h后两浓度达显著水平,FSH处理只经24h就显著升高。注射PGF_(2α)后两组的P_4浓度急剧下降(ρ<0.01)。发情时P_4浓度最低,E_2-17β为最大。(3)处理当日及此后的孕酮浓度与排卵率之间无显著相关(ρ>0.05)。而发情时的E2-17β浓度与排卵率之间呈强相关(r=0.72,ρ<0.001)。     

17β-雌二醇主动免疫对公山羊生殖的影响

１０只公山羊分别于１、３、５月龄用１７β 雌二醇 ６ 人血清白蛋白（实验组）或人血清白蛋白（对照组）为抗原皮下注射进行免疫,６月龄时采集血样和精液进行了分析。结果表明,试验组羊只不同程度地产生了１７β 雌二醇抗体,滴度为１∶１０００～１∶３０００。试验组血浆睾酮含量［（１８７９±１１３４）μｇ·Ｌ－１］极显著地高于对照组［（３２６±０９１）μｇ·Ｌ－１,（Ｐ＜００１）］,射精量和精子密度［（１１６±０１７）ｍＬ和（１９１×１０９个·ｍＬ－１）］均显著大于对照组［（０８４±００９）ｍＬ和１０１×１０９个·ｍＬ－１,（Ｐ＜０１）］,精子活率与精子畸形率两组间差异不显著,表明１７β 雌二醇主动免疫可以提高公山羊的睾酮水平和精子生成能力。     

17β-雌二醇在土壤中迁移特征的研究

[目的]为了研究内源甾体雌激素在土壤中的迁移特征。[方法]以17β-雌二醇为对象,采用模拟土柱开展淋滤试验。[结果]表层土壤雌二醇在淋滤过程向深层土壤迁移,土壤有机质对雌二醇的迁移具有迟滞作用;当滤速为O．05L／（s·m2）、雌二醇添加量为1．25mg、淋滤时间为200min时,砂性土壤和黏性土壤中（距顶层土壤1．0m）雌二醇的残留浓度分别为0．06和0．18mg／kg;淋滤液中的腐植酸与土壤中的有机质发生竞争吸附,对E2的迁移起促进作用;而淋滤液中的无机盐（KCI）因促进土壤对E2的吸附,使得雌二醇在土壤中的迁移性能减弱。[结论]该研究可为土壤环境中雌激素污染控制提供科学依据。     

17β-雌二醇-黄素腺嘌呤二核苷酸结合物的合成

根据ＡＲＩＳ的需要,设计出标题物的分子结构模型。以黄素－５′－单磷酸、６－酮－１７β－雌二醇羧甲基肟和Ｎ６－（６－氨基己基）腺苷－５′－单磷酸为原料,经过３步反应合成出标题物。采用酶激活试验和免疫抑制试验确证了标题物的结构。     

17β-雌二醇对半滑舌鳎性分化和生长的影响

试验将25日龄半滑舌鳎稚鱼放入不同浓度（1、3、10和30μg&#183;L^-1）的17β-雌二醇水溶液中,每天浸泡2h,连续处理65d。研究17β-雌二醇对半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis Gunther）性分化、性比、生长和死亡率的影响。结果表明,17β-雌二醇使半滑舌鳎卵巢分化提前约5d,使精巢分化推迟20d;4种浓度17β-雌二醇处理组（1、3、10和30μg&#183;L^-1）的雌性率分别为74％、82％、88％和97％,与对照组相比差异显著（P〈0．05）。同时,17β-雌二醇处理对半滑舌鳎的早期生长和死亡率无显著影响。     

17β-雌二醇对半滑舌鳎性分化和生长的影响

试验将25日龄半滑舌鳎稚鱼放入不同浓度(1、3、10和30μg·L-1)的17β-雌二醇水溶液中,每天浸泡2h,连续处理65d,研究17β-雌二醇对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Gunther)性分化、性比、生长和死亡率的影响。结果表明,17β-雌二醇使半滑舌鳎卵巢分化提前约5d,使精巢分化推迟20d;4种浓度17β-雌二醇处理组(1、3、10和30μg·L-1)的雌性率分别为74%、82%、88%和97%,与对照组相比差异显著(P<0.05)。同时,17β-雌二醇处理对半滑舌鳎的早期生长和死亡率无显著影响。     

17β-雌二醇对体外培养牛输卵上皮细胞中环氧合酶-2的表达影响

目的:阐明17β--雌二醇(17β-estradiol,E2)对体外培养的奶牛输卵管上皮细胞(bovine oviduct epithelialcells,BOECs)中环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)基因表达的影响.方法:分离培养BOECs,建立BOECs培养体系作为体外试验模型,分别在培养液中添加10 pg/mL的E2分别培养2h、4h、6h,提取细胞总RNA及细胞总蛋白,利用实时荧光定量PCR,Western blot等实验技术检测COX-2mRNA和蛋白的表达量.结果:输卵管上皮细胞的COX-2基因表达随添加E2培养液增加2h、4h明显高于对照组.结论:试验数据显示在体外培养的BOECs中E2影响牛输卵上皮细胞中COX-2的表达.     

三角帆蚌17β-HSD11基因的表达特征及17β-雌二醇对其表达的影响

通过RACE技术、实时荧光定量(qRT-PCR)技术、原位杂交和17β-雌二醇注射来探究17β-HSD11基因在三角帆蚌性腺发育和性激素合成中的表达特性和作用。结果显示:17β-HSD11基因的cDNA全长为1 134 bp, 其中,5'' UTR 40 bp,开放阅读框(ORF)923 bp,3'' UTR 171 bp,编码307个氨基酸。17β-HSD11基因在肝胰腺、性腺中表达量较高,且卵巢极显著高于精巢。原位杂交结果显示雌性三角帆蚌卵母细胞、滤泡膜和卵膜上均存在杂交信号。注射不同质量浓度17β-雌二醇之后发现17β-HSD11基因在雌雄性腺中的相对表达量均被抑制,其中:低质量浓度注射后,17β-HSD11基因的表达量在卵巢中下降33.38%,在精巢中下降37.74%;而高质量浓度注射后,17β-HSD11基因的表达量在卵巢中下降57.78%,在精巢中下降61.31%。由此推测17β-HSD11可能与三角帆蚌性腺发育和雌激素合成相关。     

17β-雌二醇光降解效果测试的微藻生物实验方法

采用室内培养的方法，从藻的生长，藻的叶绿素a、b及类胡萝卜素含量这四个方面研究了藻类对水体中17β-雌二醇的光降解的影响。结果发现，光降解前17β-雌二醇对普通小球藻的生长有明显的抑制作用，也会引起光合色素浓度的降低；光降解后其抑制作用有所减缓。此结论表明光降解对减弱17β-雌二醇的生物毒性是有效的，但光降解过程还需进一步优化。     

17-β雌二醇对去卵巢大鼠垂体前叶IFN-γ表达的影响

【目的】探讨雌激素对去卵巢大鼠垂体前叶γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)表达的影响。【方法】将大鼠分为对照组(CG组)、去卵巢组(OVX组)和去卵巢并用17-β雌二醇治疗组(OVX+E2组),应用免疫组化SP法检测不同时程各组大鼠垂体前叶IFN-γ免疫阳性物质含量的变化特点。【结果】去卵巢后不同时程,OVX组大鼠垂体前叶IFN-γ表达较CG组显著减少(P<0.05);OVX+E2组大鼠IFN-γ表达显著回升(P<0.05),且在第4周时回升至CG组水平。【结论】雌激素对大鼠垂体前叶IFN-γ免疫阳性物质的表达有明显影响,提示IFN-γ可能以自分泌或旁分泌方式,参与雌激素对垂体前叶调节功能的部分作用。     

17β-雌二醇对中华绒螯蟹促雄腺组织结构和超微结构的影响

采用不同浓度的17β 雌二醇注射中华绒螯蟹雄性幼蟹,每隔7d注射1次,共注射5次,35d后取样。利用组织切片技术和电镜技术研究了中华绒螯蟹促雄腺显微和超微结构的变化。常规石蜡切片显示,处理组的促雄腺细胞直径明显小于对照组,同时,电镜切片结果也表明在不同浓度的处理组,促雄腺在β 雌二醇的影响下,腺细胞出现不同程度的退化,如腺细胞核变形,呈不规则的形状,核仁消失,核内异染色质增多等,而8μg/g体重的处理组效果最明显,细胞质内出现溶酶体,其它细胞器很少见。随着浓度的增加,17β 雌二醇对中华绒螯蟹促雄腺的发育及分泌抑制作用愈明显。     

17β-雌二醇对中华绒螯蟹促雄腺组织结构和超微结构的影响

采用不同浓度的17β 雌二醇注射中华绒螯蟹雄性幼蟹,每隔7d注射1次,共注射5次,35d后取样。利用组织切片技术和电镜技术研究了中华绒螯蟹促雄腺显微和超微结构的变化。常规石蜡切片显示,处理组的促雄腺细胞直径明显小于对照组,同时,电镜切片结果也表明在不同浓度的处理组,促雄腺在β 雌二醇的影响下,腺细胞出现不同程度的退化,如腺细胞核变形,呈不规则的形状,核仁消失,核内异染色质增多等,而8μg/g体重的处理组效果最明显,细胞质内出现溶酶体,其它细胞器很少见。随着浓度的增加,17β 雌二醇对中华绒螯蟹促雄腺的发育及分泌抑制作用愈明显。     

苯妥英钠对大鼠颈总动脉球囊损伤后内膜增生的影响

目的研究苯妥英钠促进创伤修复的特殊药理学作用在大鼠颈总动脉球囊损伤后内膜修复过程中的影响。方法采用大鼠颈总动脉内膜球囊损伤模型,术后大鼠分为苯妥英钠组和损伤组。术后28天处死大鼠,取双侧颈总动脉,石蜡包埋、切片后进行血管病理学染色分析。结果术后28天,苯妥英钠组内膜面积(0.154±0.018mm2比0.204±0.054mm2,P<0.01)、内膜/中膜面积比(1.70±0.08比2.26±0.46,P<0.01)、再狭窄率(59.5%±3.2%比75.9%±13.3%,P<0.01)均小于损伤组,管腔面积(0.106±0.024mm2比0.063±0.034mm2,P<0.01)大于损伤组;内膜细胞密度(72.18±20.08/cm2比84.85±10.77/cm2,P<0.05)、增殖细胞核抗原阳性细胞数(9.89±7.63个/200倍视野比23.03±13.95个/200倍视野,P<0.01)和α-平滑肌肌动蛋白阳性细胞数(30.91±20.05/200倍视野比61.81±16.57个/200倍视野,P<0.01)均小于损伤组;新生内膜中有少量胶原组织增生,但组间血管胶原面积和密度均无统计学差异(P>0.05)。结论大鼠颈总动脉球囊损伤后28天,苯妥英钠可以抑制损伤血管内膜增生过程中的细胞增生,促进细胞外基质合成,对血管损伤后内膜增生和管腔狭窄具有抑制作用。     

17β-雌二醇上调绵羊输卵管上皮细胞β-防御素-2(SBD-2)表达的可能信号通路研究

【目的】探讨17β-雌二醇(E2)上调绵羊输卵管上皮细胞SBD-2表达的可能信号通路。【方法】分离培养绵羊输卵管上皮细胞,将第2代输卵管上皮细胞分为E2(10-8 mol/L)组、雌激素受体拮抗剂ICI182780(10-7mol/L)组、PKA阻断剂KT-5720(1μmol/L)组、PKC阻断剂H-7(50μmol/L)组、NF-κB阻断剂PDTC(50μmol/L)组及空白对照(Control)组,在不同阻断剂组加入各自阻断剂干预绵羊输卵管上皮细胞1h后,在各阻断剂组和E2组中再加入10-8 mol/L 17β-雌二醇培养6h,然后采用实时荧光定量RT-PCR方法检测各组SBD-2mRNA表达水平的变化。【结果】10-8 mol/L 17β-雌二醇可显著上调绵羊输卵管上皮细胞SBD-2mRNA的表达(P<0.05);雌激素受体拮抗剂ICI182780、NF-κΒ阻断剂PDTC、PKC阻断剂H-7均可阻断17β-雌二醇对SBD-2的上调作用,PKA阻断剂KT-5720对17β-雌二醇介导的SBD-2上调无明显影响。【结论】17β-雌二醇上调绵羊输卵管上皮细胞SBD-2的表达由雌激素核受体、NF-κΒ、PKC信号转导通路所介导,而PKA不参与17β-雌二醇对SBD-2的上调作用。     

版纳微型猪发情周期外周血清促黄体素、孕酮、17β-雌二醇含量的变化

用放射免疫分析法测定了6头版纳微型猪母猪发情周期外周血清中促黄体素（LH）、孕酮和17β-雌二醇的含量和变化。血清 LH的含量,在黄体期其值很低,到发情开始后当天增至 3.85± 2.01ng/ml;孕酮含量的变化,在周期的黄体期,其值最高为22.0±2.54ng/ml,而在发情日最低,为0.183±0.023ng/ml;17β-雌二醇含量在发情前 1天达到高峰,为 39. 85± 12. 61ng/ml。     

软鳍新光唇鱼在孤立环境下17β-雌二醇的分泌行为

17-β雌二醇在鱼类性发育过程中具有控制鱼类性别分化和生殖活动的重要作用。该试验通过检测养殖水体,发现当软鳍新光唇鱼(Neolissochilus benasi)进入孤立环境中时,水体中会出现较多的17β-雌二醇,而群居状态下无法检测到足够多的雌二醇。同时这种现象在不同时期也存在差异,繁殖期个体在孤立环境下的雌二醇环境浓度为(3.66±1.08)ng/L,远少于性发育期孤立环境下的个体的雌二醇分泌量(43.52±4.79)ng/L,但两个时期孤立状态下生活7d后的水体中17β-雌二醇含量均有显著下降(P0.05)。     

外源17β-雌二醇对中华绒螯蟹Ⅲ～Ⅳ期卵巢发育以及内源雌激素水平的影响

研究了17β-雌二醇(17β-E2)对中华绒螯蟹卵巢发育以及内源雌激素水平的影响,以期阐明中华绒螯蟹卵巢发育调控机理。给予性腺发育高峰期(Ⅲ～Ⅳ期)的中华绒螯蟹雌蟹注射不同浓度17β-E2(10-3mg/g、10-4mg/g和10-5mg/g),结果表明:在卵巢发育Ⅲ期～Ⅳ期间,17β-E2有呈剂量依赖性促进中华绒螯蟹卵巢发育的特点,表现为:性腺指数增大,卵母细胞发育快,卵母细胞直径增大。中华绒螯蟹血淋巴中17β-E2含量有随卵巢发育逐渐降低的趋势,尤其在实验30d后有明显的下降,外源17β-E2能明显增加血淋巴中17β-E2含量。中华绒螯蟹卵巢中17β-E2含量有随卵巢的发育而迅速降低的特点,外源注射17β-E2仅对15d时的卵巢中17β-E2含量有影响,表现为随外源17β-E2含量的提高,卵巢内17β-E2含量降低。对血淋巴和卵巢中17β-E2的含量与性腺指数进行相关性分析后发现:血淋巴和卵巢中17β-E2含量与性腺指数均呈极显著负相关。结论:外源17β-E2能促进卵巢发育,能明显增加血淋巴中17β-E2含量,而降低Ⅲ期1卵巢内17β-E2含量。     

外源17β-雌二醇对中华绒螯蟹Ⅲ～Ⅳ期卵巢发育以及内源雌激素水平的影响

研究了17β-雌二醇(17β-E2)对中华绒螯蟹卵巢发育以及内源雌激素水平的影响,以期阐明中华绒螯蟹卵巢发育调控机理。给予性腺发育高峰期(Ⅲ～Ⅳ期)的中华绒螯蟹雌蟹注射不同浓度17β-E2(10-3mg/g、10-4mg/g和10-5mg/g),结果表明:在卵巢发育Ⅲ期～Ⅳ期间,17β-E2有呈剂量依赖性促进中华绒螯蟹卵巢发育的特点,表现为:性腺指数增大,卵母细胞发育快,卵母细胞直径增大。中华绒螯蟹血淋巴中17β-E2含量有随卵巢发育逐渐降低的趋势,尤其在实验30d后有明显的下降,外源17β-E2能明显增加血淋巴中17β-E2含量。中华绒螯蟹卵巢中17β-E2含量有随卵巢的发育而迅速降低的特点,外源注射17β-E2仅对15d时的卵巢中17β-E2含量有影响,表现为随外源17β-E2含量的提高,卵巢内17β-E2含量降低。对血淋巴和卵巢中17β-E2的含量与性腺指数进行相关性分析后发现:血淋巴和卵巢中17β-E2含量与性腺指数均呈极显著负相关。结论:外源17β-E2能促进卵巢发育,能明显增加血淋巴中17β-E2含量,而降低Ⅲ期1卵巢内17β-E2含量。     

FSH和17β-雌二醇联合作用对仔猪睾丸 支持细胞Skp2表达的调节

 【目的】确定FSH和雌激素联合作用是否可通过ERK1/2级联调节培养条件下未成熟仔猪睾丸支持细胞中Skp2的表达。【方法】以培养的仔猪睾丸支持细胞为试验材料,通过添加各种信号通路的抑制剂,应用Western blotting和实时荧光定量PCR检测Skp2蛋白、mRNA的表达。【结果】FSH（50 ng·mL-1）和17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）联合作用时以时间依赖的方式促进了Skp2蛋白和mRNA的表达（P＜0.05）,这一作用在30 min时到达高峰;FSH（50 ng·mL-1）、17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）和forskolin单独作用均促进了Skp2蛋白和mRNA的表达（P＜0.05）,FSH（50 ng·mL-1）和17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）联合作用对Skp2表达的影响与FSH或17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）单独作用无显著差异（P≥0.05）,而环磷酸腺苷抑制剂（Rp-cAMP）、蛋白激酶A（PKA）抑制剂（H-89）、L-Ca2+离子通道抑制剂（verapamil）和ERK1/2抑制剂（U0126）单独作用时对Skp2蛋白和mRNA的表达与空白对照相比无显著影响（P＞0.05）,但都抑制了FSH（50 ng·mL-1）与17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）联合作用对Skp2蛋白和mRNA表达的影响（P＜0.05）。H-89、verapamil单独作用对ERK1/2（细胞外信号调节的蛋白激酶1/2）活性没有影响,但降低了FSH（50 ng·mL-1）和17β-雌二醇（10-9 mol·L-1）联合作用对ERK1/2活性的影响。【结论】 FSH与17β-雌二醇联合作用激活了cAMP-PKA级联和Ca2+内流,而PKA和Ca2+内流又通过影响ERK1/2的活性进而影响Skp2的表达。