一株碱性淀粉酶产生菌的分离及酶学特性分析

[目的]筛选出能用于生物印染的碱性淀粉酶产生菌。[方法]利用Horikoshi培养基从农田土壤中分离碱性淀粉酶产生菌,并采用DNS法和碘量法测定粗酶液中淀粉酶的酶学性质。[结果]共分离到9株碱性淀粉酶产生菌,对其中水解圈最大的菌株703进行16S rDNA序列同源性比对,结果显示其与嗜碱性芽孢杆菌Bacillus pseudofirmus OF4的16S rDNA序列一致性达100%。对该菌发酵粗酶的酶学性质研究表明该碱性淀粉酶的最适温度为50℃,最适pH为9.5,50℃下处理30 min后酶活残存74.7%。[结论]该研究筛选出了能用于生物印染的碱性淀粉酶产生菌,所产淀粉酶热稳定性较好,且具有强的碱耐受性,表明该酶具有应用于生物印染的潜在利用价值。     

罗默碱的抑菌活性测定

在室内测定了罗默碱对8种植物病原真菌和11种动物病原细菌的抑菌活性。结果表明,罗默碱对梨锈病菌、柿角斑病菌、柑橘疮痂病菌、西瓜枯萎病菌、甘蔗凤梨病菌、香蕉炭疽病菌、玉米炭疽病菌和梨褐斑病菌8种植物病原真菌的菌丝生长有明显的抑制作用,质量浓度为0.5 g/L时,72 h(甘蔗凤梨病菌为48 h)的抑菌率分别为100.00%、77.45%、76.88%、100.00%、100.00%、85.71%、100.00%和59.21%;有效中浓度(EC50)分别为0.037 8、0.195 6、0.173 2、0.044 1、0.265 2、0.259 0、0.099 5和0.341 0 g/L。罗默碱对蜡状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、溶壁微球菌、藤黄微球菌、伤寒沙门氏菌和痢疾志贺氏菌的抑菌圈直径为9.50～18.75 mm,而对普通变形杆菌、铜绿假单胞菌和大肠杆菌没有抑制作用。罗默碱对巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、伤寒沙门氏菌和痢疾志贺氏菌的最小抑制浓度均为0.3 g/L,对蜡状芽孢杆菌的最小抑制浓度为0.7 g/L,对溶壁微球菌的最小抑制浓度为0.2 g/L。     

产碱性蛋白酶菌株ZK202的鉴定及其诱变

[目的]为产碱性蛋白酶菌株在生产中的应用提供依据。[方法]从河南省兰考县盐碱地土壤中分离1株产碱性蛋白酶的菌株ZK202,通过形态观察、生理生化试验和16SrDNA序列分析对其进行鉴定。经紫外照射和DES处理后,测定诱变菌株的酶活力。[结果]菌株ZK202的形态符合芽孢杆菌属的特征,其16SrDNA序列与短小芽孢杆菌的同源性在99%以上。该菌株为短小芽孢杆菌一个新亚种,命名为Bacillus pumilus ZK202,属中等嗜盐菌。ZK202在氯化钠浓度0～12.5%条件下均能生长,以浓度5.0%时最佳。ZK202在碱性环境中生长良好,当培养基pH值在11.0以上时仍能生长,也属嗜碱性菌。经复合诱变后,菌株Zkud202-4发酵液的酶活力达321U/ml,比出发菌株高3.9倍。[结论]Zkud202-4具有稳定的产酶性能,可作为产碱性蛋白酶的突变菌株。     

10株产菊粉酶细菌的筛选及鉴定

以包头当地菊芋根际土为材料,筛选到10株产菊粉酶细菌,其中芽孢杆菌的产酶活性相对较高。对部分菌株的鉴定结果表明,产菊粉酶细菌分属于厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)和放线菌门(Actinobacteria),它们分别是短杆菌(Brevibacterium sp.)(A1)、嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)(A3)、多黏类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)(A6、A8)、杆菌属(Bacillus sp.)(A7)。目前关于短杆菌属、多黏类芽孢杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌具有产菊粉酶能力的报道较少见。     

Bacillus属嗜盐嗜碱细菌的研究进展

Bacillus属由于其成员表现出广泛的多系性以及彼此间几乎没有共同点,长期以来一直被认为是分类和系统发育异常的属。随着测序技术和纯培养技术的进步,自Cohn建立Bacillus属以来,不断有新的菌株从不同生境中被分离,也有许多该属的成员被重新分类为其他的属。Bacillus属由于其具有芽孢的特性而广泛分布于自然界的不同环境,其嗜盐嗜碱成员已经成为人们高度重视的双重极端微生物类群,在盐碱的双重压力下经过长期的进化选择,形成了独特的生物活性物质代谢途径、新的调控机制及与这些生理生化特征有关的新基因类型。因此,针对Bacillus属中嗜盐嗜碱菌的发现历史、分布与分类现状、生理生化特征及应用前景进行综述,以期为嗜盐嗜碱芽孢杆菌新物种资源的挖掘及功能的开发利用提供参考。     

碱性蛋白酶PB92在枯草芽孢杆菌中高效转化方法的建立及其分泌表达

枯草芽孢杆菌转换效率低一直制约着该菌基因改造技术的应用,本研究比较了化学法和高渗电转化法对枯草芽孢杆菌转化率的影响,发现高渗电转化法的转化效率较高.从Bacillus alcalophillus PB92中扩增出碱性蛋白酶基因Mapr,构建成重组分泌型表达载体pWB980-Mapr,碱性蛋白酶基因在枯草芽孢杆菌DB104中得到表达.SDS-PAGE 分析,重组蛋白酶的分子量为 28 000.pWB980-Mapr在枯草芽孢杆菌中表达的酶活为1 563 U/ml.     

陕西省苹果汁中脂环酸芽孢杆菌的分离与鉴定

【目的】明确陕西省生产苹果汁中脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus)的分布情况。【方法】对健康苹果苹果汁和软腐苹果腐烂部位中的嗜酸耐热菌进行了分离、纯化,并以1株酸土脂环酸芽孢杆菌(A.acidoterrestris)DSM3922为标准菌株,对分离菌株进行了个体形态、菌落形态观察和嗜酸性、耐热性、生理生化特性试验,最后用表型聚类法分析了供试菌株的亲缘关系。【结果】分别从苹果汁、腐烂苹果中分离到50和5个疑似菌落,嗜酸耐热特性试验表明,其中有14株属嗜酸耐热菌,且均是芽孢杆菌,大小为2.0~5.0μm;其菌落表面湿润,中心突起,有同心圆,半透明,不易挑起,形状圆形,直径为1.5~5 mm;接触酶、脲酶检验结果均呈阳性,都可利用肌醇、甘油、L-山梨糖为惟一碳源,且利用葡萄糖均不能产酸产气。鉴定结果确定分离菌株均属于脂环酸芽孢杆菌属的不同种,其中TAB-3号菌与标准菌株最为接近。【结论】陕西省苹果汁中的耐热菌,除酸土脂环酸芽孢杆菌以外,还有脂环酸芽孢杆菌属的其他菌,其主要分属于A.acidoterrestris、A.acidocaldarius、A.pomorum3个种。     

大熊猫粪便中纤维素降解菌的鉴定与作用机理

从大熊猫粪便中分离到4株纤维素降解菌,分别命名为NC016612、NC012914、NC021171和NC020990.通过形态学观察、生理生化试验和16S r DNA鉴定,分离的菌株分别为克雷伯菌、类芽孢杆菌、芽孢杆菌和白色链霉菌.采用3,5-二硝基水杨酸显色法对菌株产酶条件进行研究,结果表明,克雷伯菌、类芽孢杆菌、芽孢杆菌和白色链霉菌的酶活性分别为18.642、9.234、23.125和24.732 U·μg-1,类芽孢杆菌、芽孢杆菌和白色链霉菌对纤维素的降解具有协同作用.     

产纤维素酶芽孢杆菌C-36的分离筛选及其鉴定

以羧甲基纤维素钠为唯一碳源,从废泥浆中经反复筛选及刚果红鉴定,获得一株高活力纤维素酶生产菌株C-36。与枯草芽孢杆菌标准菌株进行了参比试验,初步鉴定该细菌为枯草芽孢杆菌。生长条件的测定显示该菌生长pH范围较宽,在pH 7.0生长最好,在pH 8.0~10.0的碱性条件下长势较好。摇瓶发酵粗酶液的性质测定表明,该菌所产生的内切酶在pH 7.0左右酶活较高,酶活力为1.280 IU/mL。     

我国主要生物农药品种名单

<正>一、微生物农药1.细菌苏云金杆菌、苏云金杆菌以色列亚种、甲基营养型芽孢杆菌9912、甲基营养型芽孢杆菌LW-6、海洋芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、球形芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡质芽孢杆菌、荧光假单胞杆菌、多粘类芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌KN-03、侧孢短芽孢杆菌A60、短稳杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌B7900、解淀粉芽孢杆菌B1619、解淀粉芽孢杆菌PQ21、解淀粉芽孢杆菌LX-11、沼泽红假单胞菌PSB-S、嗜硫小红卵菌HNI-1。     

黑钙土细菌种群组成特征

报道了采自吉林省农安县新刘家镇刘家村三社黑钙土中的细菌种群组成：（枯草芽孢杆菌、蕈状芽孢杆菌、类产碱假单胞、荧光假单胞菌变种Ⅰ、施氏假单胞菌、放射形土壤杆菌变种Ⅰ、放射形土壤杆菌变种Ⅱ、约氏不动杆菌、乙酸钙不动杆菌、喜盐微球菌、产黄纤维单胞菌、粪肥纤维单胞菌、柠檬色节杆菌、球形节杆菌、黄黄色杆菌等）及其鉴别特征，并根据其在土壤中的数量组成和分离出现率确定了柠檬色节杆菌、球形节杆菌、放射形土壤杆菌变种Ⅰ、类产碱假单胞、荧光假单胞菌变种Ⅰ、枯草芽孢杆菌、蕈状芽孢杆菌、粪肥纤维单胞菌为黑钙土的优势细菌种群。     

一株产α-淀粉酶嗜热菌的分离鉴定及其产酶条件的优化

从江西省宜春市温汤镇温泉水域中筛选出35株产α-淀粉酶嗜热菌株,选取一株产α-淀粉酶活力较高的嗜热菌YC-15为出发菌株,对其进行16S rRNA基因序列分析。结果表明,YC-15与枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的16S rRNA序列相似性达98%,结合其形态、生理生化特征,进一步证明了YC-15在分类上应归属枯草芽孢杆菌。并对YC-15产酶条件进行了研究,其最佳碳源为2%可溶性淀粉,最佳氮源为0.5%酵母膏+0.5%蛋白胨,最适产酶初始pH为7.0,最适产酶温度55℃,属中性嗜热产α-淀粉酶菌。     

体外法评价益生菌对猪饲料中三种大宗原料干物质消化率的影响

为了探讨益生菌(枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌及二者的复合菌)对三种大宗饲料原料(玉米、麦麸、豆粕)干物质消化率的影响,试验采用单因子试验设计,将每种饲料原料分为四组,即对照组、枯草芽孢杆菌组、嗜酸乳杆菌组和复合菌组,分别为不添加益生菌,添加枯草芽孢杆菌1 mL、嗜酸乳杆菌1 mL、枯草芽孢杆菌0.5 mL+嗜酸乳杆菌0.5...     

石河子垦区盐碱地土壤嗜(耐)盐菌的分离与鉴定

为了开发利用石河子垦区盐碱地的嗜(耐)盐菌资源,从该区盐碱地土样及池底泥样中分离筛选嗜(耐)盐菌,并从形态特征、生理生化特性、16S rRNA序列3个方面进行分析鉴定。结果表明,从土样及泥样中共分离获得6株嗜(耐)盐菌。其中,SYJ-7是球菌,为革兰氏阳性;其余5株是杆菌,均为革兰氏阴性。在耐盐、碱试验中,6株菌均在Na Cl质量浓度≤200 g/L、p H值≤9条件下生长,6株菌均为中度嗜盐菌。SYJ-9耐盐、碱程度最高,可耐受的最高Na Cl质量浓度为280 g/L,最高p H值为13。在功能酶筛选试验中,SYJ-3、SYJ-5、SYJ-7、SYJ-9产淀粉酶,SYJ-7产纤维素酶,SYJ-9产蛋白酶。16S rRNA序列分析表明,SYJ-1、SYJ-2、SYJ-3、SYJ-5属于玛纳斯海洋芽孢杆菌(Oceanobacillus manasiensis),SYJ-7属于玫瑰色盐水球菌(Salinicoccus roseus),SYJ-9属于盐芽孢杆菌属(Halobacillus)。其中,SYJ-9可能为新种。     

益生芽孢杆菌对草鱼肠上皮细胞的黏附及对嗜水气单胞菌的抑制

为探讨益生性枯草芽孢杆菌对肠上皮细胞黏附及对嗜水气单胞菌的抑制作用,以草鱼肠上皮细胞为研究对象,检测了枯草芽孢杆菌对肠上皮细胞的黏附率、对嗜水气单胞菌的黏附抑制率和对各种生理生化指标的影响。结果显示:枯草芽孢杆菌对草鱼肠上皮细胞形态、细胞中四甲基偶氮唑盐(MTT)OD值、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(AKP)和谷草转氨酶(GOT)活性等各种生理指标无显著影响,但在孵育3h和6h后分别显著降低了Na+,K+-ATP酶和谷丙转氨酶(GPT)的活性;与嗜水气单胞菌孵育3h后,肠上皮细胞由椭圆变成不规则形态,培养液的死细胞增多,并且在多数时间点上显著降低了MTT OD值以及谷草转氨酶、Na+,K+-ATP酶和谷丙转氨酶的活性,细胞中MTT OD值和细胞上清中乳酸脱氢酶的活性显著提高(P0.05);枯草芽孢杆菌和嗜水气单胞菌共孵育对肠上皮细胞形态及各种生理指标的影响明显小于嗜水气单胞菌组;黏附抑制实验显示枯草芽孢杆菌可以显著降低嗜水气单胞菌对肠上皮细胞的黏附率。提示枯草芽孢杆菌可以抑制嗜水气单胞菌对草鱼肠上皮细胞的黏附,并减轻嗜水气单胞菌对细胞的损伤。     

环状糊精葡萄糖基转移酶产生菌的研究

用朴氏鉴别选择培养基分离到一株环碱芽孢杆菌 No.—12号,此菌产生嗜微酸性的环状糊精葡萄糖基转移酶,能转化淀粉为环状糊精。经高速液相色谱分析,酶反应产物以β—环状糊精为主,产少量 r—环状糖精,而不产生α—环状糊精。这类菌株在国内尚生见极道。     

斜带石斑鱼稚鱼和早期幼鱼消化道可培养菌群研究

利用常规微生物分离鉴定方法结合16S rRNA基因序列分析研究斜带石斑鱼Epinephelus coioides 40d稚鱼和70d早期幼鱼消化道可培养菌群.结果表明,副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus、哈维弧菌Vibrio harveyi、短小芽孢杆菌Bacillus pumilus、鲍氏不动杆菌Acinetobacter baumannii、恶臭假单胞菌Pseudomonas putida、嗜冷杆菌Psychrobact-er sp.和洋葱伯克霍尔德菌Burkholderia cepacia均从稚鱼和早期幼鱼消化道分离.系统进化分析结果表明,斜带石斑鱼消化道细菌可归为3类:γ-变形杆菌纲γ-Proteobacteria、β-变形杆菌纲β-Proteobacteria和芽孢杆菌纲Bacil-li.稚鱼和早期幼鱼消化道的优势菌相似,稚鱼消化道的优势菌为芽孢杆菌Bacillus、嗜冷杆菌Psychrobacter、葡萄球菌Staphylococcus和不动杆菌Acinetobacter,而早期幼鱼消化道的优势菌为芽孢杆菌、不动杆菌、嗜冷杆菌和假单胞菌Pseudomonas.芽孢杆菌为稚鱼与早期幼鱼消化道的最优势菌,分别占可培养细菌总数的78.6%和75.6%,而弧菌在稚鱼和早期幼鱼消化道中的数量均较低,分别仅占消化道可培养细菌总数的2.8%和1.1%.乳酸乳球菌Lactococcus lactis、干酪乳杆菌Lactobacillus casei和屎肠球菌Enterococcus faecium等3种乳酸菌仅见于早期幼鱼消化道.     

番茄酱中好氧细菌分离方法的研究

新疆番茄制品出口量占全国的90;,近年来外商对其安全卫生提出了许多技术要求,国内番茄制品生产企业也陷入番茄制品胖听、平听的技术障碍,至今国内尚无相应的微生物检测技术和标准.采用锰营养、甘露醇卵黄多粘菌素、嗜热耐酸杆菌、脂耐热嗜酸杆菌、溴甲酚紫葡萄糖肉汤、平酸菌增菌和液体硫乙醇酸盐7种液体培养基对供试番茄酱在37和55℃下培养.通过不同培养时间培养液的O.D值、pH值、菌体形态和菌落特征的研究,确定出锰营养和平酸菌增菌培养基为该类菌的最适液体培养基,嗜热耐酸杆菌和平酸菌增菌琼脂培养基为最佳固体培养基.分离出的菌株经VITEK-32生化鉴定,主要细菌分别为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)和矮小芽孢杆菌(Bacillus pumilus),均为产酸不产气可导致平酸腐败的好氧芽孢菌.     

极端嗜热功能菌筛选及其促进堆肥腐熟效果研究

本研究采用富集培养方法从不同高温堆肥环境中分离筛选到9株极端嗜热菌,通过16S rDNA序列比对分析确定其分类地位,通过生长特性研究和酶活测定,优选出6株菌株复配成极端嗜热菌剂,采用模拟堆肥方法研究极端嗜热菌剂促进堆肥腐熟效果。结果表明:本研究分离得到的9株菌分别属于土芽孢杆菌属(Geobacillus sp.)、栖热菌属(Thermus sp.)、副土芽孢杆菌属(Parageobacillus sp.)和红嗜热菌属(Rhodothermus sp.)。所分离菌株最适生长温度均在65～70℃;菌株NY-44、D和E的最适生长pH为9.5,属于嗜碱菌;菌株NY-44最适生长盐浓度为20 g·L~(-1),属于嗜盐菌。土芽孢杆菌和副土芽孢杆菌所产蛋白酶活性相对其他菌株较高,且最适反应温度均不低于80℃。在堆肥30 d时,接种极端嗜热菌剂的处理与未接种相比,种子发芽指数(GI)和胡富比(HA/FA)分别提高了35.9%和21.3%。研究结果表明,接种极端嗜热菌剂能加快堆肥腐熟进程,提高堆肥品质。     

1株多粘类芽孢杆菌产菊粉酶粗酶学性质的研究

[目的]研究1株多粘类芽孢杆菌所产菊粉酶的粗酶学性质。[方法]以菊芋菊粉为底物发酵培养了1株多粘类芽孢杆菌,利用超声波法破碎细胞,得到该菌的菊粉酶粗提液,并对菊粉酶的粗酶学性质进行了研究。[结果]这株多粘类芽孢杆菌最佳产酶时间约在摇瓶发酵培养40h时,所产的胞内菊粉酶的菊粉酶活力与蔗糖酶活力之比（I/S）为0.2187,小于10,表现为外切酶活性。该酶反应的最适温度和最适pH值分别为45℃和5.0,在此条件下菊粉酶酶活力最高,可达102.81U/L。[结论]这株多粘类芽孢杆菌所产菊粉酶为外切酶,该酶的粗酶学性质研究为进一步深入系统地研究菊粉酶的酶学性质奠定了基础。