对虾养殖体系中细菌群体感应抑制菌株的筛选及其特性初步研究

从对虾养殖环境及肠道内筛选能够抑制细菌群体感应的活性菌株,并探讨了影响菌株活性的环境因素及其对病原坎氏弧菌(Vibrio campbellii)毒力基因表达的影响。采用滤纸片法和高通量法对分离出的纯化菌株进行筛选,获得活性菌株。评估不同培养时间和盐度对活性菌株降解N-酰基高丝氨酸内酯类(AHLs)信号分子能力的影响,并检测活性菌株粗提物对坎氏弧菌毒力基因tox R和tlh m RNA表达的影响。分离得到2株活性菌株DC13和RS5,经16S r RNA基因序列分析,初步鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和巨大芽孢杆菌(B.megaterium)。AHLs信号分子对活性菌株生长无显著性影响(P0.05)。菌株DC13培养24 h后降解AHLs信号分子能力达到最大值,菌株RS5培养12~48 h降解AHLs信号分子能力无显著变化。盐度10~30时对菌株DC13降解AHLs信号分子能力无显著性影响,但是对菌株RS5降解AHLs信号分子能力影响显著(P0.05)。活性菌株粗提物的添加使坎氏弧菌毒力基因tox R的表达上调,而毒力基因tlh的表达下调。     

饲料中添加复合芽孢杆菌对凡纳滨对虾抗病毒感染能力及抗病基因表达的影响

自健康凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)分离到枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(B. licheniformis)和短小芽孢杆菌(B. pumilus),将上述芽孢杆菌以单一和3株复合的方式包裹在基础饲料表面,制成益生菌饲料;每日投喂对虾,3周后进行白斑综合征病毒(WSSV)人工感染。统计实验组和对照组的累积死亡率,测定对虾鳃组织内WSSV拷贝数,分析对虾肠道组织含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白酶基因(Caspase)和硫氧还原蛋白基因(Trx)的相对表达量。结果显示,感染实验结束时,A组(枯草芽孢杆菌)、B组(地衣芽孢杆菌)、C组(短小芽孢杆菌)和D组(枯草芽孢杆菌+地衣芽孢杆菌+短小芽孢杆菌复合益生菌)的对虾累积死亡率分别为(73.3±7.0)%、(63.3±5.5)%、(75.0±7.9)%和(50.0±5.3)%,显著低于对照组(PBS组)(100%);在整个感染阶段,各实验组的病毒拷贝数呈先上升后下降的趋势,但对照组呈现一直上升趋势,且显著高于实验组。抗病基因表达结果显示,WSSV感染后,各组对虾肠道Caspase相对表达量随感染时间的延长呈先上调再下调的趋势,且在18 h各组对虾肠道Caspase表达量达到最大值;益生菌摄取和WSSV感染都能刺激Trx的表达,益生菌的刺激相对平缓,且各实验组对虾肠道Trx相对表达量在WSSV感染后的18 h时陡升到最大值,极显著高于对照组,且以D组的激活能力最强。研究证实,枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和短小芽孢杆菌均可提高对虾抗WSSV感染能力,复合芽孢杆菌抗病毒能力最突出。对虾抗病力的提高可能与芽孢杆菌减缓了病毒在靶组织的增殖速率、提高了Caspase和Trx基因表达水平相关。     

嗜水气单胞菌QseC在响应去甲肾上腺素中的作用

QseBC是一种普遍存在于细菌的双组分调控系统(two-component regulatory system,TCS),能感应细胞外环境因子信号,在调控细菌毒力中发挥着重要作用。为了研究嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)QseC在识别和响应宿主应激激素去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)及其对毒力因子表达的调控作用,本实验首先构建了嗜水气单胞菌NJ-35缺失突变株ΔqseC与互补株qseC+,分析了在NE诱导下野生株和突变株的体外毒力因子表达和鱼体死亡率的变化。结果表明,qseC的缺失抑制了NE对嗜水气单胞菌的促生长作用,降低了NE对生物膜形成能力和溶血活性的增强作用及其对罗非鱼的致死率,而对运动性、脂肪酶与蛋白酶活性没有产生显著影响。本实验明确了嗜水气单胞菌QseC能够响应NE,从而调节菌株的毒力,对全面认识嗜水气单胞菌的致病机理及其与宿主的互作机制有着重要意义,并为探索疾病防控新技术奠定相关理论基础。     

枯草芽孢杆菌对氨氮应答的转录组及sRNA分析

为探索枯草芽孢杆菌(Bacillus subtiis)脱氮的分子机制,筛选枯草芽孢杆菌对氨氮的分子生态学应答相关候选基因及smallRNA(sRNA),本研究对处于富含氨氮环境和对照组的枯草芽孢杆菌R47进行原核链特异性转录组及sRNA分析,并采用Real-time PCR方法检测差异表达基因的相对表达量.结果显示,平...     

半滑舌鳎源蜡样芽孢杆菌毒性检测及药敏试验

对一株鱼源致病菌L1进行了16SrDNA的鉴定、6种毒力基因的PCR检测、溶血素和4种胞外酶的定性分析以及半数致死密度测定和药敏试验。试验结果表明,菌株L1为蜡样芽孢杆菌,携带与腹泻毒素相关的溶血素BL基因、肠毒素T基因、细胞毒素K基因、多效调控因子、非溶血性肠毒素5种毒力基因,不含呕吐基因;并且该菌分泌溶血素、蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、尿素酶;其对斑马鱼96h半数致死密度为3.26×10~8cfu/mL。药敏试验结果表明,该菌对庆大霉素等15种药物敏感。本试验旨在从毒力基因和外毒素角度评估该菌对水产养殖动物的潜在致病性;通过药物敏感性试验,为蜡样芽孢杆菌引起的水产动物疾病防治提供用药参考。     

枯草芽孢杆菌肽聚糖对β-伴大豆球蛋白诱导的鲤幼鱼肠上皮细胞损伤的保护作用

为观察不同浓度枯草芽孢杆菌肽聚糖对β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin)诱导的鲤幼鱼肠上皮细胞炎性损伤的保护作用,将原代培养72 h(26°C、6%的CO2)的24孔鲤幼鱼IECs培养板随机设为6组,每组4个重复。其中1组为阴性对照,其余5组用浓度为1.0 mg/m L的枯草芽孢杆菌肽聚糖诱导24 h后,分别更换浓度为0(阳性对照)、0.15、0.30、0.45和0.60 mg/m L枯草芽孢杆菌肽聚糖培养液,相同条件培养12、24和36 h,分别检测细胞的抗超氧阴离子(ASA)和抗羟自由基(AHR)能力、蛋白羰基(PC)含量、抗氧化酶(SOD、CAT和GPx)活性和细胞因子IL-1β、IL-8、IL-10、TNF-α1、TGF-β基因表达。结果显示,β-conglycinin上调细胞炎性因子表达,降低细胞抗氧化性能。添加枯草芽孢杆菌肽聚糖后,随PG浓度增加和处理时间延长,细胞抗氧化性能增加,呈显著的量效关系,且36 h呈二次曲线相关。IL-1β、IL-8、TNF-α1 m RNA表达呈二次曲线递减,IL-10、TGF-βm RNA表达呈线性递增。研究表明,不同浓度枯草芽孢杆菌肽聚糖均可保护由β-conglycinin诱导引起的鲤幼鱼IECs氧化损伤,提高IECs抗氧化能力;高浓度PG通过抑制致炎因子和促进抗炎细胞因子的基因表达,提高IECs的抗炎能力。     

细菌群体感应淬灭的几种调控机制及其潜在应用

群体感应（quorum sensing,QS）作为一种调控机制,细菌通过感知细胞外环境中的信号分子浓度变化调控调节着生物发光、质粒转移、抗生素合成、生物膜形成及毒力因子表达等多种重要的生物学功能,协调细菌群体行为以适应环境变化。文章简要综述细菌细胞之间的群体感应功能及其几种主要淬灭调控机制,为促进基于Qs为靶标的生态防控病害新技术构建提供参考,为Qs相关研究及具有潜在应用价值的Qs抑制剂开发提供思路。     

3种淡水鱼病原菌多重PCR检测方法的建立与应用

根据辽宁地区常见淡水鱼病原菌嗜水气单胞菌、迟钝爱德华氏菌、蜡样芽孢杆菌的相关毒力因子,选择特异性较强的嗜水气单胞菌的溶血素(hlyA)基因、迟钝爱德华氏菌的效应蛋白(eseD)基因、蜡样芽孢杆菌非溶血性肠毒素(nheA)基因为分子靶标,分别设计1对特异性引物,建立可同步检测3种菌的多重PCR检测体系。研究结果显示,在3个毒力基因引物浓度均为0.4μmol/L,模板质量浓度为2.5 ng/μL,dNTP和酶添加量分别为2.5μL和0.3μL,退火温度为55℃时,各目的片段均可较好地扩增。敏感性试验结果表明,建立的多重PCR对嗜水气单胞菌、迟钝爱德华氏菌和蜡样芽孢杆菌的最低检测量分别为4.8、3.0 ng和2.6 ng。对临床分离的菌株样本进行检测,与16S rDNA分子鉴定结果的符合率为100%。建立的多重PCR体系检测方法特异、灵敏、快速,可同步完成淡水鱼源的嗜水气单胞菌、迟钝爱德华氏菌和蜡样芽孢杆菌的检测。     

淬灭酶AiiO-AIO6酶学性质及对嗜水气单胞菌毒力因子的表达调控

将N-乙酰高丝氨酸内酯酶基因(aiiO-AIO6)插入表达载体pET28a构建了原核表达载体pET28a/ aiiO-AIO6.转化大肠杆菌后筛选具有活性的重组子并对纯化的目的蛋白AiiO-AIO6的酶学性质进行了研究,同时研究了纯化的酶液对嗜水气单胞菌ATCC7966溶血素( Hemolysin,Hem)、细胞肠毒素(Cytotonic enterotoxin,Ast)、胞外蛋白酶(Extracellular protease,Ep)、丝氨酸蛋白酶(Serine protease,Sp)及磷脂酶Pho( Phospholipase Al,Pho)等5个毒力因子表达的影响.结果表明,pET28a/aiiO-AIO6在大肠杆菌中大量表达N-乙酰高丝氨酸内酯酶,纯化后的N-乙酰高丝氨酸内酯酶的最适作用条件为pH8.0,30℃,在pH 6.0 ～11.0的范围内能够稳定的存在,在80℃条件下保温30 min后酶活力能够维持在65％以上;且该酶对多种金属离子、化合物和中性蛋白酶都具有很好的抗性;该酶对多种底物都具有一定的降解作用;以3-oxo-C8-HSL为底物时的km值为0.015 mmol/L;比活力为583.33 U/mg.N-乙酰高丝氨酸内酯酶在培养8h及12 h时对嗜水气单胞菌5个毒力因子的表达量都具有明显的下调趋势(P＜0.05).本实验通过测定AiiO-AIO6的酶学性质及证明AiiO-AIO6可以通过降解嗜水气单胞菌产生的信号分子来抑制其毒力因子的表达,从而为将其应用于水产环境及致病性嗜水气单胞菌的生物防治奠定理论基础.     

温度对尼罗罗非鱼无乳链球菌毒力的影响

为了解温度对鱼源无乳链球菌毒力的影响机制,本实验研究了温度对无乳链球菌毒力相关参数(生长、粘附、入侵、毒力基因表达以及对罗非鱼致死率)的影响。结果发现,不同培养温度下(25~40 ℃)无乳链球菌的生长速度不同,37 ℃为其最适生长温度,25 ℃时生长速度最慢;25~34 ℃内无乳链球菌粘附在惰性基质上的菌体对应的吸光值(OD_590nm)之间无显著差异(P>0.05),37 ℃时显著增加,40 ℃时又急剧下降;罗非鱼在人工感染无乳链球菌后各时间点(6、12、24和48 h),鱼体脑组织中菌量随注射菌体培养温度的增加呈先上升后下降的趋势,且与不同培养温度下的无乳链球菌对罗非鱼的致死率呈正相关;无乳链球菌毒力基因的表达也与培养温度相关,hly和cfb基因的表达量随菌体培养温度的升高先增加后降低,分别在34和37 ℃处达到峰值,不同培养温度下无乳链球菌sip基因表达的变化幅度较小,而scpB基因的表达则随培养温度增加而下降;无乳链球菌对罗非鱼的致死率随其培养温度的升高呈先升高后降低趋势,低温(25和28 ℃)培养条件下的菌体对罗非鱼致死率较低(<20%),37 ℃时致死率最高66.67%±6.67%。以上结果表明温度参与无乳链球菌生长、粘附、转移、入侵和部分毒力基因表达的调控,它们共同影响无乳链球菌对罗非鱼的毒力。     

高丝氨酸内酯酶AI-96对嗜水气单胞菌NJ-1浸浴攻毒斑马鱼保护效应的研究

为评价斑马鱼口服高丝氨酸内脂酶AI-96对嗜水气单胞菌NJ-1浸浴攻毒的保护效应,实验设置基础料与实验料两组饲料,实验料是在基础料中按3 U/g饲料添加N酰基高丝氨酸内酯酶AI-96(以下简称AI-96),通过高浓度(2.5×108 cfu/mL)及低浓度(0.7×108 cfu/mL)两组剂量的嗜水气单胞菌NJ-1(以下简称NJ-1)分别浸浴攻毒斑马鱼,在12h、24 h、3d、7d和14d取鳃丝、肠道壁、肝和肾样,采用实时荧光定量PCR法检测取样器官中NJ-1量,并统计攻毒周期内的死亡率,来评价高丝氨酸内酯酶AI-96的保护力.结果显示:在攻毒周期内所取组织内均检测到NJ-1,按菌数肠＞鳃＞肝＞肾,其中高NJ-1剂量未加酶组各组织NJ-1数量均分别明显高于低剂量处理组.在高剂量攻毒条件下,加酶组各组织NJ-1数量均显著低于未加酶处理组(P＜0.05),鳃除外;在低剂量攻毒条件下,未加酶组的NJ-1数量在鳃(3 d)、肠(0.5、1、3、7及14 d)、肝(3 d)和肾(7 d)显著高于加酶组(P＜0.05),其余差异不显著(P＞0.05).此外无论在高、低剂量攻毒条件下,加酶组的死亡率均低于未加酶组,其中低剂量攻毒7d及以后其死亡率显著低于对照(P＜0.05).结果表明,口服AI-96可以有效预防NJ-1≤0.7×108 cfu/mL范围内的侵袭.     

Regulation of Vibrio alginolyticus virulence by the LuxS quorum-sensing system

Quorum sensing (QS) is a bacterial intercommunication system that controls the expression of multiple genes in response to population density. The LuxS QS system regulates the expression of several virulence factors in a wide variety of pathogenic bacteria. LuxS has been characterized to be responsible for producing a type of autoinducer, AI-2, which stimulates the expression of the luciferase operon in Vibrio harveyi. Vibrio alginolyticus is established as an opportunistic pathogen of several marine animals, and its LuxS QS system remains undefined. To investigate the pathogenic role of luxS in V. alginolyticus, the luxS mutants of both the standard strain ATCC 33787 and a fish-clinical isolate MVP01, named MYJS and MYJM, respectively, were constructed. The mutation resulted in reduced lethality to Pagrus major. Intraperitoneal LD(50) of MYJS and MYJM increased by 15- and 93-fold, respectively. The two luxS mutants exhibited a lower growth rate and defective flagellar biosynthesis. They also showed a significant decrease in protease production and an increase in both extracellular polysaccharide production and biofilm development. The results suggest that the LuxS QS system plays an important role in regulating the expression of virulence factors in V. alginolyticus.     

具有群体感应抑制作用的地衣芽孢杆菌T-1的动物安全及生态评价

摘要：该研究以具有群体感应抑制作用的地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）T-1为试验对象,参照国标的急性毒性实验方法检测其对动物的安全性及对水体生态环境的影响。安全评价试验采用异育银鲫、斑马鱼、小鼠为测试动物,结果显示：异育银鲫腹腔注射浓度为11200mg/L（2.6×1011 CFU/Ml）菌株T–1菌液后,连续观察96h,异育银鲫均健康生长,未出现不良症状或死亡;将斑马鱼浸泡在浓度为2240mg/L（5.2×1010 CFU/mL）的菌株 T–1菌液中,连续观察96h,斑马鱼均健康生长,未出现不良症状或死亡;SPF级小鼠(ICR品系)灌胃16800 mg/kg（3.9×1011 CFU/mL）体重浓度的菌株T-1,观察9d小白鼠健康生长无不良症状。水体生态评价采用小球藻、大型蚤及萼花臂尾轮虫为测试对象,不同浓度的菌株T-1在96h内,对小球藻生长无毒且促进其生长,对大型蚤生长无不良影响,对萼花臂尾轮虫生长无害,且在高浓度下对萼花臂尾轮虫的生长繁殖有促进作用。研究表明,具有群体感应抑制作用的地衣芽孢杆菌T-1对异育银鲫、斑马鱼及小鼠安全无毒害;对水体生态环境中的浮游生物也无不良影响,具有开发成微生态制剂的潜力。     

LC-MS/MS检测水产品源致病菌和腐败菌群体感应AHLs信号分子

为分析水产品源致病菌和腐败菌中群体感应信号分子AHLs的含量和种类,实验建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)同时检测细菌群体感应11种AHLs类信号分子的技术,并与生物报告菌法比较。结果显示,报告菌紫色杆菌CV026和根癌农杆菌A136检测发现嗜水气单胞菌和2株铜绿假单胞菌是AHLs产生菌。建立的LC-MS/MS能完全分离和检测11种AHLs,并发现假单胞菌和嗜水气单胞菌产生的AHLs信号分子含量较高,其中ATCC 9027和ATCC 15692产生3-oxo-C12-HSL,嗜水气单胞菌A2产生C4-HSL,而腐败希瓦氏菌XH4分泌的C4-HSL信号分子含量较低,沙门氏菌ATCC 14028-3、大肠杆菌O157:H7和3种弧菌的AHLs很低。随着细菌浓度的增加,铜绿假单胞菌ATCC 9027产生的AHLs含量逐步增加,在12 h达到最高。研究表明,LC-MS/MS可用于多种AHLs信号分子的定性和定量检测,具有灵敏性与准确性更高的优点。在11株水产品源致病菌和腐败菌中,假单胞菌和气单胞菌分泌的AHLs含量最高。     

sodA、sodB和KatG在嗜水气单胞菌抗氧化胁迫中的协同作用

以嗜水气单胞菌野生株B11和基因稳定沉默株sodA-RNAi、sodB-RNAi和KatGRNAi为研究对象,比较野生株和沉默株在不同氧化胁迫条件下sodA,sodB和KatG表达的相关性及与细菌生长和存活的相关性,以探讨抗氧化胁迫基因在细菌抵御氧化胁迫过程中的作用和机制。结果显示,无氧化胁迫条件下sodA、sodB和KatG中任何一个基因被沉默后,其余两个基因的表达均受到显著抑制,说明这些抗氧化胁迫基因在表达上密切相关。在外源H2O2胁迫下,sodA、sodB和KatG中任何一个基因被沉默后,其他两个抗氧化胁迫基因的表达均表现为显著上调;在甲基紫晶(MV)诱导的内源性活性氧(ROS)胁迫下,各沉默株中sodA或sodB的表达水平总体表达为上调,但是在KatG的表达却呈现下调,说明sods的表达在细菌抵御内源性ROS的损伤中更具重要性。在H_2O_2胁迫下,随着H_2O_2浓度的增加,野生株B11的存活率仍然保持在较高的水平,而沉默株sodA-RNAi、sodB-RNAi和KatG-RNAi的存活率则显著降低;此外,菌株生长曲线显示,sodA、sodB和KatG的表达可影响嗜水气单胞菌生长曲线延滞期的长短。在不同浓度MV诱导的ROS胁迫下,野生株B11和沉默株KatG-RNAi的存活率仍然保持在较高的水平,沉默株sodA-RNAi和sodB-RNAi的存活率则显著降低,但4株菌仍然能保持一定的生长能力。研究表明,在不同氧化胁迫条件下,细菌可通过不同抗氧化胁迫基因的协同作用,共同抵御ROS的损伤,在H_2O_2的胁迫下,KatG对嗜水气单胞菌的生存更为重要,而在MV诱导的内源性ROS胁迫下,sod的表达对嗜水气单胞菌生存的贡献更为突出。     

Polysaccharolytic activities of bacterial enzymes that degrade the cell walls of Pythium porphyrae, a causative fungus of red rot disease in Porphyra yezoensis

ABSTRACT: Four bacteria with degrading activity against the cell walls of Pythium porphyrae were successfully isolated from Porphyra -culturing environments. The crude enzymes from these bacterial isolates, Bacillus sp. BE1, Bacillus sp. FE1, Pseudomonas sp. PE1, and Pseudomonas sp. PE2, degraded the mycelial cell walls of Pythium sp. N -Acetylglucosamine and glucose were detected in the supernatants of Pythium cell walls treated with the enzymes from Bacillus sp. BE1, Bacillus sp. FE1, and Pseudomonas sp. PE2 as the final degrading products by high-performance liquid chromatography, whereas only glucose was detected in the supernatant of the cell walls treated with the enzyme from Pseudomonas sp. PE1. Moreover, the activities of β-1,3-glucanase, β-1,3-1,4-glucanase, and chitinase were observed by polysaccharolytic analysis using the enzymes from Bacillus sp. BE1, Bacillus sp. FE1, and Pseudomonas sp. PE2, whereas only the activities of β-1,3-glucanase and β-1,3-1,4-glucanase were found during analysis using Pseudomonas sp. PE1. β-1,4-Glucanase, β-1,6-glucanase, and mannanase activities were not detected in any of the crude enzymes obtained from these isolates. From the four isolates, the molecular weights (MW) of β-1,3-glucanase and chitinase were estimated to be approximately 50 000–100 000 by the ultrafiltration method. Two Pseudomonas spp. were also suggested to have β-1,3-1,4-glucanases with MW of 50 000–100 000. However, the MW of β-1,3-1,4-glucanases from the two Bacillus spp. might be close to 50 000 or they produce at least two β-1,3-1,4-glucanases with MW of 30 000–50 000 and 50 000–100 000, respectively.     

低盐胁迫下松江鲈HSPB1、HSPB7和HSPB11基因的表达变化规律

为了探究小分子热休克蛋白基因HSPB1、HSPB7和HSPB11在松江鲈(Trachidermus fasciatus)应对低盐胁迫过程中的调节作用,本研究基于前期转录组数据,获取3个目标基因的序列信息并进行了系统进化分析,利用实时荧光定量PCR技术检测了3个基因在两种低盐胁迫处理下不同时间点(0 h、12 h、24 h和48 h)在鳃、肠、肾和肝组织中的表达水平。系统进化分析结果表明, HSPB1、HSPB7和HSPB11基因分别聚类形成独立分支;在各基因分支中,松江鲈与已报道的鲈形目、鲤形目和鳉形目等鱼种共同聚为硬骨鱼类分支。在两种低盐胁迫处理下, 3个基因在鳃组织中的表达量均在12h显著升高,而在肠、肾和肝组织中的表达量则呈现不同的变化趋势。肠组织中,HSPB7和HSPB11在盐度渐变低盐胁迫(盐度变化速率1.1/h)下表达量均显著升高, HSPB1表达量在48 h显著降低;盐度骤变低盐胁迫(盐度变化速率27/h)下HSPB1和HSPB7表达量在24 h显著升高, HSPB11表达量显著降低。肾组织中,HSPB1、HSPB7和HSPB11表达量均仅在盐度渐变低盐胁迫24h显著升高;盐度骤变低盐胁迫下HSPB1表达量显著降低, HSPB7和HSPB11表达量则显著升高。肝组织中, HSPB7无表达; HSPB1表达量在盐度渐变低盐胁迫下无显著变化,但在盐度骤变低盐胁迫下则显著升高;HSPB11表达量在两种处理下均显著升高。本研究比较分析了HSPB1、HSPB7和HSPB11基因在松江鲈应对不同低盐胁迫时表达变化规律的异同,相关结果为探讨小分子热休克蛋白在鱼类应激调节过程中的作用及洄游性鱼类适应盐度变化的分子调控机制提供了理论依据。     

鱼源气单胞菌的毒力基因检测、分型及致病力

为调查鱼源气单胞菌毒力基因与其致病力的相关性,以2009--2018年从不同患病鱼分离的173株气单胞菌为研究对象,通过检测毒力相关基因、测定溶血活性、腹腔注射感染异育银鲫等方法开展评价.通过管家基因gyrB分子鉴定结果显示,173株气单胞菌中维氏气单胞菌(119/173,68.9％)和嗜水气单胞菌(50/173,28...     

In vivo fish models for visualizing Aeromonas hydrophila invasion pathway using GFP as a biomarker

The invasion pathway of Aeromonas hydrophila in vivo was studied in Crucian carp (Carassius auratus gibelio) with a virulent strain A. hydrophila J-1 transformed with a plasmid encoding green fluorescent protein (pGFPuv) (A. h J-1^GFP), which had similar virulence characteristics (haemolysin, extracellular proteases production, toxicity for EPC cells, survival in fish serum and LD₅₀ value) as the parent strain. Fish were divided into four experimental groups: (1) normal fish; (2) bacteria bath challenged, unwounded fish; (3) skin artificially wounded by scalpel, bacterial bath challenged fish; and (4) skin mucus layer partially removed by paper towel, bacterial bath challenged fish. The number of bacteria from blood, gills, kidney, muscle, liver and intestine were detected at 2, 4, 8, 12, and 24 h post-challenge. High bacterial numbers were observed in the muscle of the artificial wound group, in the kidney of the mucus removed group and in the gills of all groups. In conclusion, the gills and damaged skin are likely to be the main routes of entry for A. hydrophila, and GFP can be used as a real-time biomarker to study intimate host–pathogen interaction in fish.     

中华鲟ASDIGIRR与ASTRAF6基因的克隆与表达

中华鲟是处在硬骨鱼类与软骨鱼类之间的中国古老的珍稀鱼类之一,但在人工繁殖和养殖过程中,容易受到不同疾病的危害,因此,需要深入研究其免疫调控,为其疾病预防提供理论依据。单个免疫球蛋白白细胞介素-1受体相关分子(SIGIRR)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)是toll样受体(TLR)信号通路的2个重要的信号转导元件。本研究鉴定了中华鲟的SIGIRR和TRAF6的同源物,分别命名为ASDIGIRR (Acipenser sinensis DIGIRR)和ASTRAF6 (A. sinensis TRAF6),并研究它们在正常组织中的表达和Poly(I:C)诱导后的表达模式。结果显示,ASDIGIRR和ASTRAF6在健康鲟的10个组织中均有表达,且分别在肠道和头肾组织中表达量最高;用Poly (I:C)孵育中华鲟脾脏细胞后,ASDIGIRR在3 h时的表达量显著下调,在6 h时恢复至正常水平,后在24 h显著上调达到最高值,随后开始下调,至48 h时仍显著高于对照组,而ASTRAF6在6 h达到最高表达量,维持到24 h后再下调,48 h时下降至最低水平。研究表明,ASDIGIRR和ASTRAF6在中华鲟抵御病原入侵的免疫防御过程中起着重要作用。