白皮松成熟合子胚的胚性愈伤组织诱导研究

[目的]建立白皮松体细胞胚胎发生快速繁殖体系,诱导出胚性愈伤组织。[方法]以白皮松成熟合子胚为外植体,以DCR作为基本培养基,研究不同浓度激素对外植体发育和胚性愈伤组织得率的影响。同时在不同激素浓度下对培养4周的外植体外形以及胚性愈伤组织进行了观察与分析。[结果]培养基中加入2,4-D可以使得外植体生长减慢,并出现愈伤组织,6-BA则使外植体的子叶变长,膨大并玻璃化。当2,4-D浓度为8mg/L、6-BA浓度为2mg/L时,胚性愈伤组织的诱导效果较好,诱导率平均为40.625%,该愈伤组织为白色半透明状,细胞小而细胞质浓,说明高浓度2,4-D和低浓度6-BA有利于白皮松成熟胚的胚性愈伤组织的获得。[结论]合适的激素种类和浓度是诱导白皮松成熟胚产生胚性愈伤组织的关键因素。     

陆地棉愈伤组织诱导及体细胞胚发生的生化机制研究

对陆地棉愈伤组织诱导及体细胞胚发生过程中的主要生化物质(可溶性蛋白含量、可溶性糖含量、SOD活性和IAA氧化酶活性)的测定表明,各个时期的可溶性蛋白含量、SOD活性是不同的,在愈伤组织形成初期较低,随着愈伤组织的生长及胚状体的形成,可溶性蛋白含量、SOD活性逐渐上升,在120d时达最大值;而可溶性糖含量在60d时有一个高峰值,在120d时达到最低值;IAA氧化酶活性在60d、120d时酶活较高,90d的酶活较低。     

葡萄风信子器官和体胚发生的解剖及生理特性研究

以葡萄风信子“蓝穗”叶片为材料,分别对器官发生和体胚胎发生过程中不同时期超氧化物岐化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和过氧化物酶活性（POD）、可溶性糖和可溶性蛋白质含量进行测定,并对2种途径中的典型时期进行解剖结构观察。结果表明:抗氧化酶类活性、可溶性糖和蛋白质含量与植物细胞形态发生密切相关;在不定芽分化和体胚发生初期,胚性愈伤的POD、SOD活性与可溶性蛋白质含量显著高于非胚性愈伤组织。此外,器官发生和体胚发生途径差异在愈伤组织形成期已开始产生,说明该期是器官和体细胞胚发生关键的调控时期。因而可通过向培养体系中加入不同激素、糖或蛋白等物质,进而调节植物细胞生理代谢方向,达到影响培养物形态发生的目的。     

栓皮栎胚性和非胚性愈伤组织生化特性研究

植物体细胞胚胎发生是一个复杂的过程,为进一步揭示胚性愈伤组织诱导的潜在能力,以栓皮栎未成熟合子胚诱导产生的胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织为材料,通过对可溶性糖、淀粉、可溶性蛋白、游离脯氨酸、总酚含量和蛋白酶活性的测定,研究体细胞胚胎发生过程中2种愈伤组织生化特性的差异。结果表明,胚性愈伤组织中可溶性糖、淀粉、可溶性蛋白质及脯氨酸含量分别为97.6、25.3、28.3 mg·g^-1和202.8 mg·g^-1,均高于非胚性愈伤组织;两者的蛋白酶活性无显著性差异;但非胚性愈伤组织中多酚类化合物的含量显著高于胚性愈伤组织。     

日本落叶松胚性愈伤组织的诱导及体胚的形成

以优良日本落叶松种胚为外植体，经过愈伤组织阶段，成功地获得了成熟体细胞胚。试验结果表明，进行愈伤组织诱导的最佳培养基为MS＋BA1＋ZT1＋NAA0．1（单位：mg/L，下同）。白或白绿色、颗粒状、质地较疏松、半透明而有光泽的愈伤组织具有胚胎发生潜力，为胚性愈伤组织。体细胞原胚诱导的适宜培养基为MS＋BA0．5＋NAA0．05＋肌醇500，在后期胚的发育过程中过高的肌醇浓度有负作用。     

葡萄风信子体细胞胚再生体系的建立及抗生素敏感性试验

【目的】建立葡萄风信子体细胞胚再生体系,通过外部形态判断愈伤组织的类型,并探索胚性愈伤组织对头孢霉素和潮霉素的敏感性。【方法】以多年生葡萄风信子‘蓝穗’的盛花期叶片为试验材料,通过正交试验筛选胚性愈伤组织诱导时适宜的植物生长调节剂质量浓度及配比;石蜡切片法观察不同愈伤组织内部的细胞结构,诱导具有胚性的愈伤组织形成体细胞胚,进而获得再生植株;在培养基中加入头孢霉素或潮霉素,观察2种抗生素对胚性愈伤组织生长和体细胞胚发生的影响。【结果】葡萄风信子胚性愈伤组织诱导的适宜培养基为MS+0.5mg/L 2,4-D+0.1mg/L TDZ,在该培养基上诱导率高达100%。石蜡切片观察发现,外观质地紧密、节状或块状的愈伤组织为胚性愈伤组织。胚性愈伤组织在不含任何激素的MS培养基上可诱导形成体细胞胚,在光照条件下体细胞胚伸长并生根,最后形成成熟小鳞茎。头孢霉素质量浓度超过500mg/L时,葡萄风信子胚性愈伤组织的生长和体细胞胚的发生受到强烈抑制;引起胚性愈伤组织褐变的潮霉素临界质量浓度为90mg/L。【结论】建立了葡萄风信子体细胞胚再生体系,90mg/L潮霉素可作为区分转化与非转化葡萄风信子胚性愈伤组织的有效选择压。     

不同光质对龙眼胚性愈伤组织生长和细胞膜保护酶活性的影响

试验以龙眼胚性愈伤组织为材料,研究不同的光质处理对龙眼胚性愈伤组织生长和过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响.结果表明,不同光质对生长有不同效应,蓝光对愈伤组织生长有促进作用,而白光则有抑制作用;在光照和黑暗2种培养条件下,过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性均有明显的变化.     

栓皮栎胚性和非胚性愈伤组织抗氧化物酶的研究

以诱导产生的栓皮栎不同基因型的胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织为材料,对其过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶(SOD)活性及同工酶谱型进行了研究。结果表明胚性愈伤组织中抗氧化物酶活性均明显高于非胚性愈伤组织。不同基因型的胚性愈伤组织或非胚性愈伤组织的抗氧化物酶活性之间差异不显著,但同一基因型的胚性和非胚性愈伤组织之间均存在极显著差异。不同抗氧化物酶同工酶谱具有特异性,且显示与酶活性一致的变化趋势。     

龙眼胚性愈伤组织的高频率体细胞胚胎发生

比较了龙眼不同类型胚性愈合伤组织，品种，蔗糖质量浓度，有机附加物，生长调节剂，光照度等因素对龙眼胚性愈组织体胚诱导的影响，结果表明，在优经的体胚发生条件下，选择适宜的胚性愈伤组织类型，可获得龙眼胚性愈伤组织的高频率体细胞胚胎发生，在低质量浓度蔗糖（≤３０ｇ．Ｌ＾－１）和黑暗条件下，松散型胚性愈伤组织的体胚分化频率为１００％，并且发生数量可达每克１万个左右。     

高温胁迫诱导龙牙楤木次生体胚发生过程中抗氧化酶活性变化

龙牙楤木成熟体胚经37℃高温处理0～3d于不加任何植物生长调节剂的WPM培养基中产生了次生体胚.结果发现,经高温处理1d的外植体的次生体胚发生最好,诱导率为58％,平均每外植体次生体胚约为4个;高温胁迫过程中及次生体胚发生过程中,3种抗氧化酶活性具有明显变化,且处理1d外植体中,3种抗氧化酶活性始终相对较高;高温胁迫使过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性降低,超氧化物歧化酶(SOD)活性则升高.胚性细胞分化期,即成熟体胚分化形成的球形体细胞胚时期(培养10～15 d),POD、SOD活性相对较高,CAT活性较低;次生体胚发育过程中,即发育形成的鱼雷和子叶体细胞胚时期(培养15d以后),SOD、POD活性呈下降趋势,CAT活性则变化不大.     

枇杷原生质体培养形成愈伤组织

把茂木、尾早生、解放钟、长红等枇杷品种的心脏形至完全成熟的胚,离体培养于分别附加一定浓度植物生长调节剂的B_5,MS和改良MS(大量元素减半,简称mMS)的培养基中,诱导产生胚性愈伤组织.这种愈伤组织在添加低浓度的2,4-D的mMS培养基上产生体细胞胚.以初代和继代培养若干代的愈伤组织作为分离原生质体的材料来源.酶解液的主要成分为纤维素酶、离析酶和崩溃酶,附加0.6 mol/L的山梨醇作为渗透压稳定剂,原生质体的最高得率为1.65±0.6×10~7/g.原生质体经液体浅层培养或半固体培养4—5d后,观察到第1次细胞分裂,2周后形成小细胞团.培养2个月后,获得了愈伤组织.     

紫花苜蓿愈伤组织诱导及愈伤组织对酸铝耐性的评价研究(英文)

苜蓿是最重要的豆科牧草之一,多适应于中性至微碱性土壤,为能在南方低pH条件下大面积推广种植,利用地方品种提高苜蓿的酸铝耐性成为育种的主要目标之一。该研究以6个品质优良、具有潜在高产优质的紫花苜蓿引进栽培种和云南野生种德钦苜蓿为材料,利用细胞培养技术进行耐酸铝性的评价研究。结果表明:7个品种中,耐酸铝性水平依次为GT13R牧歌701=牧歌702AcroraAC-3射手2号=德钦苜蓿。     

中药白芍愈伤组织的培养及其中芍药苷的测定

[目的]建立中药白芍愈伤组织培养的方法,并测定其中芍药苷的含量。[方法]以白芍叶、茎为外植体,接种于不同的愈伤诱导培养基和继代培养基上培养愈伤组织,并提取愈伤组织中的芍药苷,用TLC和HPLC法测定愈伤组织中芍药苷的含量。[结果]适合白芍茎的诱导愈伤培养基是1/2MS+0.2 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,叶的最适诱导培养基是1/2MS+1.0 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L 6-BA,白芍愈伤继代培养适合培养基为1/2MS+0.1 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L ZT+0.5 mg/L NAA。经HPLC测定每克干白芍愈伤组织中的芍药苷含量为0.068 9 mg。[结论]中药白芍的叶和茎可诱导形成愈伤组织,且形成的愈伤组织中含有芍药苷。     

甘蔗愈伤组织培养及其细胞学特性

为培养适合转基因的甘蔗胚性愈伤组织,我们在不同外植体浸泡时间、不同培养基、不同培养环境以及不同的采样时间等对甘蔗愈伤组织培养的影响进行研究.结果表明,使用MS培养液浸泡外植体20 min能减轻培养过程中褐变的影响;MS+3.0 mg/L 2.4-D的培养基有利于胚性愈伤组织的诱导和增殖;在暗环境中培养有利于愈伤组织的整齐生长;在8月份的采样,培养材料褐变程度较小,胚性愈伤的诱导率及生长率均较高.在培养过程中会出现表型各异的愈伤组织,经染色后制成玻片在显微镜下观察,从细胞学角度为甘蔗转基因寻找合适的受体.结果表明,乳白色颗粒状的胚性愈伤组织,细胞排列紧密,细胞核大,分生能力强,是甘蔗转基因愈伤组织受体材料中的最佳选择.     

萝卜花药愈伤组织诱导及褐变因素初探

花药培养愈伤组织的培养一直是萝卜组织培养中的难点,在加上花药组织容易发生褐变,萝卜的花药培养比较难以成功.因此为了解决上述问题,该文以萝卜为试材,研究了不同激素配比、供体基因型、光照与温度以及蔗糖浓度对花药愈伤组织诱导的影响,同时比较研究了花药愈伤组织褐变过程中几种抗氧化酶活性变化.结果如下:P403在2.0mg/L 2,4-D 1.0mg/L 6-BA 2.0mg/L KT的MS培养基中愈伤组织的诱导率最高,愈伤组织开始褐化的时间晚.抗氧化酶的活性较高;同时进行低温预处理、高温预培养和初期暗培养的协同效果较任何一种单独处理好;6%的蔗糖浓度有利于愈伤组织的诱导.     

不同因子对蝟实愈伤组织诱导及愈伤组织继代的影响

本文以虫胃实茎段、叶柄、叶片为外植体 ,将其培养于附加BA和NAA不同激素配比的MS或B5基本培养基上。结果表明 :在附加BA 2 /L和NAA 0 5 /L的B5培养基上外植体出愈快 ,愈伤组织诱导率高。在愈伤组织继代中 ,不同种类激素组合、激素浓度配比及不同琼脂浓度对愈伤组织的继代质量有不同影响 :1%的琼脂浓度、BA 2 /L +NAA 0 0 5 /L时 ,愈伤组织生长速度适中、质地较致密 颜色翠绿 ,适合作进一步研究的材料。     

杂交榛子愈伤组织的诱导

利用组织培养技术对杂交榛子无性器官进行培养研究,从而为后续人工控制条件下获得更多的紫杉醇提供基础性研究材料。结果表明,对于10年生杂交榛子的根、茎段和叶片3种外植体进行愈伤组织诱导,其中茎段愈伤组织诱导率最高为66%,基础培养基MS为最适培养基,最适生长调节剂组合为2,4-D 2.5 mg·L-1+6-BA0.5 mg·L-1。     

杉木愈伤组织的继代增殖与植株再生

通过建立杉木愈伤组织增殖和植株再生体系,旨在为杉木体细胞杂交和遗传转化等基因工程研究提供高效受体系统。以杉木子叶、下胚轴诱导的愈伤组织为材料,研究了不同激素组合及浓度、培养条件对愈伤组织的继代及植株再生的影响。结果表明:不同激素组合及浓度对愈伤组织的继代有显著影响,2,4-D有利于降低继代过程中的褐化现象,NAA、KT有利于愈伤组织的继代增殖。DCR+6-BA 1.5 mg·L~(-1)+KT 1.0 mg·L~(-1)+NAA 1.0 mg·L~(-1)和DCR+6-BA 2.0 mg·L~(-1)+KT1.5 mg·L~(-1)+NAA 1.5 mg·L~(-1)是愈伤组织继代增殖的最佳培养基。暗培养和800 lx光照强度是愈伤组织继代的最佳培养条件。愈伤组织在继代30~45 d期间内需转移至新培养基。愈伤组织在MS+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+KT 1.5 mg·L~(-1)再生芽诱导率最高,诱导率为80%。经过一次继代的愈伤组织比未经过继代的单个再生芽数多,平均可达3~4个。再生苗在1/2MS+IBA 1.0 mg·L~(-1)培养基中生根率高达89.5%。     

草莓花药愈伤组织诱导与分化研究

研究了不同激素浓度组合的培养基对草莓花药愈伤组织诱导增殖和不定芽的诱导及分化的影响。结果表明:单核期花药的诱导率最高,达78.9%左右;MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 1.5 mg/L对愈伤组织的诱导及不定芽的诱导和增殖都是最适合的培养基。