以杆状病毒为载体在昆虫细胞中表达致弱I型马立克氏病病毒pp38？…

用限制性内切ｃｏ ＲＩ将不含起始密码子的ｐｐ３８基因从重组转移载体质粒ｐＶＬ ｐｐ３８ Ｉ中切出,将致弱Ｉ型ＭＤＶ ｐｐ３８基因同源物的重组转移载体质粒ｐＶＬ ｐｐ３８与野生型杆状病毒（ＡｃＭＮＰＶ）以脂质体介导法共转染昆虫细胞系Ｓｆ９后,用单克隆抗体Ｈ１９介导的间接荧光抗体法筛选到能表达ＭＤＶ ｐｐ３８基因同源物的重组杆状病毒克隆。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ试验,证实ｐｐ３８ｘ     

应用杆状病毒载体在昆虫细胞表达马立克氏病病毒Meq基因

将源于马立克氏病病毒 ( MDV) GA株的 Meq基因克隆到杆状病毒转移载体质粒 p Blu Bac4中强有力的多角化蛋白启动子 ( PPH)之后 ,经与线性化的 Bac-N-Blue TMDNA共转染于昆虫细胞系 SF9,获得了重组杆状病毒。使用重组痘病毒表达的 Meq制备的单抗 ,对重组杆状病毒感染的 SF9细胞及其裂解物分别进行间接免疫荧光试验、Western blotting和免疫沉淀试验 ,结果发现 :( 1 )本表达系统产生的 Meq可被原制备的单抗所识别 ;( 2 )在感染细胞中 ,Meq蛋白仅局限于细胞核内 ,而且随着感染后时间的增加 ,具有从核质向核仁和核膜转移的趋向 ;( 3 ) Western blotting和免疫沉淀试验均证实重组杆状病毒感染细胞裂解物中出现有 2条特异带 ( 60 0 0 0处 )。结果表明 ,杆状病毒 /昆虫细胞系统用于表达外源蛋白是可行有效的     

马立克氏病病毒CV1988株pp24基因的克隆与表达

根据马立克氏病病毒（MDV）国际参考强毒CA株pp24基因序列，设计和合成了一对引物，其两端分别含SalI和EcoRI的酶切位点，以CV1988株基因组DNA为模板，通过PCR技术，扩增其pp24基因。PCR产物经纯化后，按正确的阅读框架定向克隆到表达性载体pGEX-6P-1中谷胱甘肽转移酶（GST）基因的下游，并用序列测定验证。将重组质粒转化的大肠杆菌BL21，在1.0mMIPTG和37℃条件下诱导，GST-pp24基因获得了表达。诱导菌体的裂解物经12%的SDS聚丙烯凝胶电泳（SDS-PAGE）和Westemblot试验验证。得到大小为43kD的融合蛋白，与预期大小一致。将该融合蛋白的凝胶带切下研碎后免疫小鼠三次后，其血清与MDV感染的鸡胚成纤维细胞（CEF）在间接免疫荧光试验中呈阳性反应。     

利用重组反转录病毒表达马立克氏病病毒Meq基因

为研究马立克氏病病毒Ｍｅｑ蛋白的生物学功能,应用磷酸钙与ＭＤＶ Ｍｅｑ基因重组的反转录病毒转染载体质粒ＲＣＡＳ－Ｍｅｑ的ＤＮＡ,转染于鸡胚成纤维细胞质ＤＦ１。经同间接免疫荧光技术研究表明,转染后第３天即开始有少量ＤＦ１细胞在细胞核表达Ｍｅｑ蛋白,以后阳性细胞增多,到转染后第７天阳性细菌最多,之后荧光即衰减,通过酶联免疫吸附试验检测,发现细胞培养上清中游离病毒在转染后第５天即可检出,直至第７天仍维持     

马立克氏病病毒致瘤基因meq功能研究的概述

马立克氏病病毒 (Ｍａｒｅｋ’ｓＤｉｓｅａｓｅＶｉｒｕｓ,ＭＤＶ)之众多已得到鉴定的基因中 ,目前有 3个基因即 132 ｂｐｒ、ｐｐ38、ｍｅｑ被认为可能与致瘤相关。其中 ,ｍｅｑ与 132 ｂｐｒ两个基因是ＭＤＶ 1所特有 ,已证实 132 ｂｐｒ的拷贝数与毒株的致弱程度有关 ,ｐｐ38则被证实可抑制机体的免疫应答。ｍｅｑ基因由于具有与致瘤基因ｊｕｎ/ ｆｏｓ家族类似的分子结构 ,因此 ,我们有理由认为ｍｅｑ基因在ＭＤＶ致病、致瘤中可能发挥重要的作用。本课题在国家自然科学基金和广西自然科学基金的资助下 ,历经 5年由三个单位共同攻关…     

马立克氏病病毒pp38基因启动子和增强子的部分功能

通过 PCR技术 ,以马立克氏病病毒 (MDV) RB1B株基因组 DNA为模板 ,扩增了包括 pp38基因及其启动子 -增强子和终止子在内的 2 2 0 0 bp的核酸片段。将该片段用 Sac 和 Sph 酶定向克隆到 p U C18质粒中 ,构建成重组质粒 ;将重组质粒转染鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,用小鼠抗大肠杆菌表达的 pp38血清作间接免疫荧光试验 ,验证 pp38基因的表达。结果 ,在转染的细胞浆中看到了绿色的荧光 ,证实了该启动子的单向启动活性     

马立克氏病病毒pp38基因启动子和增强子的克隆和序列分析

参考GeneBank发表的马立克氏病病毒(MDV)国际标准强毒株GA的基因序列，设计合成一对引物，分别以RBIB，814，GD2(广东分离株)，J-1-E(北京分离株)，Md11，Md5，CV1988等不同毒株的MDV基因组DNA为模板，通过PCR扩增，获得了预期大小的PCR产物。该产物经pGEM-T-easy克隆后测序，将所得序列进行比较分析。结果发现：不同毒株间pp38基因的启动子和增强子序列间有缺失突变，序列的同源性大于95．9％，其中大多数的突变发生在MDV复制的原点附近。     

潜伏期马立克氏病病鸡血清Ⅰ型病毒L-meq、meq基因的比较及遗传分析

从潜伏期感染马立克氏病病毒(MDV)鸡淋巴组织中提取基因组DNA,采用梯度PCR的方法获得MDV的L-meq、meq基因,将其插入pMD18-T克隆载体,经测序并进行了序列分析.结果表明,L-meq、meq基因同源性很高,L-meq中只有180 bp与meq不同.但是采用同样的方法在发病期病鸡淋巴组织中却只能获得MDV的meq基因.为了进一步研究发病期L-meq基因消失的原因,试验对L-meq、meq基因的氨基酸序列的结构域进行了分析.结果表明,L-meq基因中含有9个PRR(proline-rich-reapts)区域,meq中含有6个PRR区域,从而推断PRR区域可能与基因的转录激活及调控病毒DNA复制的功能有关,该180 bp插入序列也许能解释初期感染MDV不致瘤的原因,同时也意味着L-meq基因对于潜伏期的维持是必要的.     

表达H5亚型禽流感病毒HA基因的重组马立克氏病病毒的构建

采用聚合酶链反应或反转录聚合酶链反应扩增出H5亚型禽流感病毒(AIV)的HA基因、网状内皮增生症病毒的长末端重复序列(LTR)、马立克氏病病毒(MDV)Rispens CVI988毒株基因组的sorf 1和sorf 2序列、两端带loxp位点的lac/smGFP标志基因,构建含这些基因的转移载体质粒pMHA;以MDV Rispens CVI988毒株的基因组DNA和PMHA质粒DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),采用同源重组方法将LTR、lac/smGFP和HA基因插入到MDV基因组,获得重组病毒rMDV-HA/GFP;以cre介导的同源重组去除lac/smGFP标志基因,再转染CEF,获得仅带LTR启动子和HA基因的重组MDV疫苗毒株rMDV-HA.rMDV-HA仍保留了MDV RispensCVI988疫苗毒株的复制特点,并能稳定表达AIV的HA.     

马立克氏病病毒致瘤相关基因meq在不同病变组织中的变化

以MSB-1肿瘤细胞建立的马立克氏病为病理模型,利用PCR技术扩增不同病变组织中的meq基因,构建meq基因重组阳性质粒,测定和比较它们的核苷酸和氨基酸序列。结果显示,与L-meq（1 200 bp）和标准株GA的meq（1 020 bp）比较,MSB-1细胞和脾脏肿瘤组织的meq基因（1 197 bp）、羽髓meq基因（1 017 bp）分别相应缺失3个碱基（CCA）;MSB-1细胞和脾脏肿瘤组织的meq基因具有与L-meq相同的180 bp插入序列;氨基酸序列也发生相应变化。结果表明,meq基因在不同病变组织中的核苷酸序列发生了变化,这种变化可能与马立克氏病病毒的致瘤机制有关。     

鸡马立克氏病病毒的分离与初步鉴定

从鸡马立克氏病病鸡拔取羽毛根 ,经处理后接种于 4日龄鸡胚绒毛尿囊膜。盲传到第六代出现典型的马立克氏痘斑。用第7代鸡胚绒毛尿囊膜研磨液与MD阳性血清进行琼脂扩散试验 ,结果出现了明显的白色沉淀线。此结果表明已分离到马立克氏病毒。     

马立克氏病毒及其载体的研究进展

1 分子生物学特性 马立克氏病病毒(MDV)基因组为双股线性DNA,长度约为175 kb.MDV的DNA浮力密度为1.706 g/mL,碱基组成的G+C含量为46%.火鸡疱疹病毒(HVT)DNA浮力密度和G+C含量与MDV相似.裸露的病毒DNA对单层细胞和易感鸡都具有感染性.     

新病理型马立克氏病病毒的特性

马立克氏病病毒（Marek'sdiseasevirus,MDV）是一种细胞结合性疟疾病毒,有三种血清型即1型为强毒致病性MDV,I型为非致病性MDV,N型为火鸡疮疹病毒（HVT）,其中1型MDV的毒力由经典的温和型不断向更强的毒力进化。在美国召开的第十三届国际马立克氏病会议上,来自美国、英国、德国、意大利等许多学者都报道了近年MDV毒力增强问题,本文仅就此作一介绍。IMDV的霉力进化从1907年JoszefMarek博士在匈牙利首次描述马立克氏病,到五十年代．一种温和型马立克氏病毒株（mMDV）CU。一直引起典型的疾病。五十年代后期Benton（195年…     

马立克氏病毒Meq基因的研究进展

随着致瘤基因Meq被发现,大量研究发现Meq基因在正常鸡细胞中没有表达,却在MD肿瘤中过度表达。Meq基因的表达不但可以转录活化某些致瘤相关基因,还可与转录辅助抑制因子结合成转录抑制复合物抑制目的基因转录,共同作用导致肿瘤发生。同时,Meq基因在不同毒株、不同血清型、不同病变组织中存在序列上的差异,他们是否存在着一定的规律也是研究人员十分重视的问题之一。本研究从Meq基因的基本特征入手,分析Meq基因与致瘤相关基因之间的关系分别进行阐述,总结相关的研究进展,为今后对肿瘤的深入研究提供参考。     

马立克氏病病毒的分离与鉴定

从广西不同地区患马立克氏病的鸡群分离出１０株马立克氏病毒，命名为ＭＺ１、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ４、Ｇ２、Ｌ１、Ｇ５、Ａｎ７、Ｎ。用ＭＤＶ分型单克隆抗体对Ｅ４、Ｌ１、Ｇ２、Ａｎ７、Ｎ毒进行血清型鉴定，结果除Ｅ４疑有血清Ⅱ型与血清Ⅰ型ＭＤＶ同时存在外，其余均为血清Ⅰ型ＭＤＶ。