用改良苯酚品红染色液改进果蝇唾液腺巨大染色体制片法

本实验选用果蝇三龄幼虫活体进行解剖、剥离唾腺，采用改进的实验方法得到非常清晰的果蝇唾腺染色体图形。     

果蝇(Drosophila melanogaster)唾腺染色体的制备及染色体识别

果蝇(Drosophila melanogaster)唾腺染色体的制备与分析是果蝇细胞遗传研究的基本实验技术,也是非常流行的遗传学教学实验。国内绝大多数的实验教材介绍了这个实验的操作方法,但对于如何辨别染色体各条臂,并进而识别具体的带纹均未予以介绍。笔者详细介绍唾腺染色体的制备及拍摄、数码照片拼接方法;并着重介绍如何根据各条臂端粒端的形态特征,以及利用Lefevre的唾腺染色体照片图谱中指示的蓬突(puff)、缢缩及带纹组合特征识别染色体臂的方法,供研究和实验教学参考。     

盐酸解离对果蝇唾腺染色体解聚与制片效果的影响

盐酸解离是果蝇唾腺染色体制片中的关键步骤,研究了盐酸浓度与处理时间对染色体解聚合与制片效果的影响.解离不充分时,压片后唾腺染色体仍团聚在一起;解离过度时,染色体结构受损,二者都达不到制片的要求.用2 mol/L盐酸处理20 min或者用3 mol/L盐酸处理15 min,染色体解聚适度,染色体分散,染色体臂及横纹均清晰可见,制片效果理想.用3 mol/L盐酸解离,所需时间短,更适合于制片观察.     

果蝇唾腺染色体的简易封片方法

果蝇属(Drosophila)分为八个亚属,共有九百多个种。在 Sophophora 亚属中的普通果蝇(D.melanogaster)是遗传学及细胞学研究中应用得最多的一个种。例如 果蝇的唾腺染色体,不仅是大学遗传学实验和中学生物学实验用作观察巨形染色体(macro chromoso-me)和多线染色体(Polytene chromosome)的典型材料,而且在遗传学上,可以根据唾腺     

唾腺染色体制片方法的简化与改进

以果蝇、日蝇及其3龄幼虫为研究对象,采用先染色后分离唾腺组织的方法简化了唾腺染色体的制备过程。通过比较发现,日蝇可能是更适合制备唾腺染色体的试验材料。     

果蝇唾腺染色体的制作技术研究

[目的]为果蝇唾腺染色体试验教学及相关研究提供成熟的制作技术。[方法]以野生型果蝇三龄幼虫为试验材料,通过三龄幼虫培养、唾腺剥离、压片、解离、染色等完整的制片过程探索染色体制片规律。[结果]利用镊子柄部进行压片效果很好,染色体伸展充分。通过比较4种染色试剂（苏木精、醋酸洋红、卡宝品红和改良苯酚品红）的染色效果选出的最佳试剂为改良苯酚品红。[结论]该研究为果蝇唾腺染色体的制作提供了成熟的技术参考。     

果蝇唾腺染色体观察及制片技术改进

在遗传学实验中观察果蝇唾腺细胞染色体,能够使学生对染色体是遗传物质载体这一概念有一个感性认识。虽然在教科书和一些其它资料上较详细地介绍了果蝇唾腺染色体的制片方法,但在实际操作中很难得到满意效果,尤其对学生来说,要在一次实验课上既完成装片,又要进行观察,制片过程难度很大,主要存在问题有两个,一是准确剖     

果蝇唾腺染色体制片方法的改进

果蝇唾腺染色体的制片观察是高等学校遗传学实验的主要内容之一,但传统的制片方法往往不易得到理想的制片效果,需要大量的活体材料的准备与学生剖取腺体的操作。根据长期的教学实践,对实验作了一些改进,最终使唾腺染色体各臂能较好的伸展开,易于观察,得到了较好的实验结果。     

转LdOA1基因果蝇品系GSTs基因表达及对溴氰菊酯胁迫响应

舞毒蛾是重要林业食叶害虫,揭示其G蛋白偶联受体介导G蛋白对GSTs的调控,这对于挖掘分子靶标开发新型杀虫剂具有重要意义。本文构建转LdOA1基因果蝇载体,获得表达LdOA1基因果蝇品系,分析了转基因果蝇GSTs基因表达量及对溴氰菊酯胁迫的响应,为明确昆虫OA1基因功能提供理论依据。通过传统的酶切-连接方法构建重组载体pUAST-attB-LdOA1,采用转基因技术构建表达LdOA1基因的纯合果蝇品系,利用PCR技术验证转基因果蝇品系,并运用实时荧光定量RT-PCR技术测定转基因果蝇GSTs Delta家族基因表达量及低浓度溴氰菊酯胁迫对GSTs基因表达量的影响。PCR扩增条带显示转LdOA1基因果蝇品系均能检测到453bp目的基因条带。与非转基因果蝇相比,转LdOA1基因果蝇品系中GSTs Delta家族基因(除GSTd4和GSTd7)均上调表达,为非转基因组1.01~3.27倍。低浓度溴氰菊酯胁迫6h,非转基因果蝇GSTd6和GSTd10基因被显著诱导激活,而其他GSTs基因被显著抑制,抑制率为6.48%~95.84%,胁迫12~72h,GSTs基因(除GSTd1和GSTd10外)均被显著抑制。低浓度溴氰菊酯胁迫转基因果蝇GSTs表达量变化趋势与非转基因果蝇基本一致,但转基因果蝇品系GSTs表达量显著高于非转基因果蝇品系(除12~48h GSTd1和GSTd10),且胁迫6h表达量最大。这些结果表明LdOA1基因可能介导G蛋白信号通路调控下游GSTs Delta亚家族基因表达响应溴氰菊酯胁迫。      

植物人工染色体：下一代基因工程的载体

 植物基因工程技术中的多基因转化及转基因安全已经成为其研究的2个重要方面。植物人工染色体可以在一条不含标记基因的附加染色体上提供稳定的多基因表达,是新一代的转基因载体。由于植物人工染色体独立于宿主染色体,为植物育种提供了便利,同时,也为研究染色质特殊区域的结构与功能提供了平台。本文就植物人工染色体的产生、研究现状及其应用前景等进行了综述和讨论。     

拟南芥两个MYB基因标签融合蛋白转基因植株的获得和鉴定

[目的]进行染色体免疫共沉淀（ChIP）试验,挖掘MYB类基因At3g11280和At5g05790所调控的下游基因。[方法]在构建了标签融合蛋白植物表达载体的基础上,利用农杆菌介导的转化将这些载体转入拟南芥植物中,获得转基因植株,并用Western blotting检测标签融合蛋白在转基因植株中的表达。[结果]拟南芥植株转基因的效率很高,4种标签蛋白融合载体的转化均获得了20株以上的转基因植株。随机对4种转基因植株的8株T1代植株进行Western blotting分析,结果表明4,种转基因植株中均鉴定出阳性植株。融合蛋白的条带大小在30 kD左右,将显色信号条带与Marker比对,显示条带大小与预测蛋白大小相符。[结论]这些有融合蛋白表达的转基因植株为ChIP试验的进行提供了重要材料。     

转β-甘露聚糖酶基因克隆猪的制备与分析

【目的】将前期构建的含有黑曲霉β-甘露聚糖酶基因manA的质粒p PSPBGP-manA转染杜洛克猪胎儿成纤维细胞,利用G418筛选出转基因细胞系,通过体细胞核移植方法生产出转manA基因猪,利用分子生物学方法对转基因猪进行阳性鉴定、基因及蛋白表达水平的检测,同时测定转基因猪唾液β-甘露聚糖酶酶活、粪便营养物质含量,旨在为生产及进一步研究转manA基因猪提供一些科学依据。【方法】用限制性内切酶Not I将质粒p PSPBGP-manA线性化并通过脂质体法将其转入杜洛克猪胎儿成纤维细胞,然后用不同浓度的G418进行筛选、维持培养,将筛选后的细胞进行体细胞核移植生产克隆猪;克隆猪出生后采取尾组织样用酚-氯仿法提取基因组DNA进行PCR及Southern blotting鉴定阳性转基因猪;收集转基因猪唾液并利用DNS法进行β-甘露聚糖酶活性测定,同时收集转基因猪粪便测定粪便中营养物质含量;取转基因猪的腮腺、颌下腺、舌下腺、心脏、肝脏等组织并用Triol法提取RNA,然后进行RT-PCR鉴定manA基因的表达,再进行相对定量PCR检测manA基因在不同个体及组织间的表达差异;通过Western blotting技术分析转基因猪外源性manA基因的蛋白表达水平。【结果】经G418筛选后进行PCR鉴定得到阳性转基因细胞系;通过体细胞核移植方法生产出21头克隆猪,经PCR及Southern blotting鉴定出16头转基因猪,阳性率为76%;转基因猪唾液中β-甘露聚糖酶的活性为(0.092±0.003)U·m L-1,粪便中粗蛋白含量明显降低;经RT-PCR、相对定量PCR鉴定,manA基因在转基因猪腮腺和舌下腺组织中特异表达,其它组织不表达,腮腺组织表达量高于舌下腺组织;Western blotting检测发现在腮腺和舌下腺组织中有manA的表达。【结论】通过G418筛选得到转manA基因细胞系并成功得到转manA基因猪,外源manA基因能够在转基因猪中腮腺和舌下腺组织特异性表达,为转manA基因猪的生产及进一步研究奠定了基础。     

奶山羊胎儿成纤维细胞的分离培养及脂质体法转染研究

为获得转基因克隆羊的供体细胞,本试验采用组织块培养法结合胰蛋白酶消化法分离纯化得到奶山羊胎儿成纤维细胞(gFFs),绘制了生长曲线,鉴定了胎儿细胞性别及核型特征,并且研究了脂质体量、质粒量和转染时间对gFFs的绿色荧光蛋白(GFP)转染效率的影响。结果表明:该培养体系可以支持奶山羊胎儿成纤维细胞的体外生长,其细胞形态为梭形,高度汇合后呈火焰状,增殖特性以及核型特征均为正常,性别鉴定显示该奶山羊胎儿细胞为雌性,符合体细胞转基因克隆的基本要求。24孔板中采用脂质体转染试剂4.0μL、质粒DNA 1.2μg,转染6 h可以获得最佳的转染效果,转染效率达4.21%。     

动物乳腺生物反应器研究进展

动物乳腺生物反应器拥有巨大的开发价值,利用转基因家畜的乳腺生产人类重组蛋白,可以获得安全而有效的药用蛋白。在此,在阐述乳腺生物反应器概念的基础上,探讨了乳腺生物反应器医用蛋白产品、载体构建以及转基因技术等方面的研究现状,并指出了乳腺生物反应器存在的主要问题,展望了发展前景,特别是指出了利用体细胞克隆技术生产乳腺生物反应器的优势及可能性。     

转基因技术改良家畜的现状与趋势

2006年8月,全球第一个通过乳腺生物反应器生产的药物ATryn批准上市,这标志着转基因技术在动物农业和生物医药产业的发展进入到一个新的黄金时期.作者从转基因技术的发展状况入手,综述了国内外利用转基因技术应用于改良家畜的研究历史、现状和产业化进展.动物克隆技术的发展不仅极大提高了转基因效率,同时还为家畜基因敲除和定点整合提供了新的途径;转基因动物在药物生产、疾病模型、干细胞治疗和异种器官移植等方向研发速度正在加快;近年来,在转基因动物育种领域,肉质、生长速度等重要生产性状的转基因改良也取得了突破.另一方面,国际上对转基因动物研究及其利用的生物安全性评估也日臻完善.显然,转基因动物产业正在初露端倪,其必将对人类社会发展产生重要的影响.     

The role of the c-mos gene in the 8;21 translocation in human acute myeloblastic leukemia

The human c-mos proto-oncogene is located on chromosome 8 at band q22, close to the breakpoint in the t(8;21) (q22;q22) chromosome rearrangement. This translocation is associated with acute myeloblastic leukemia, subgroup M2. The c-myc gene, another proto-oncogene, has been mapped to 8q24. The breakpoint at 8q22 separates these genes, as determined by in situ hybridization of c-mos and c-myc probes. The c-mos gene remains on the 8q-chromosome and the c-myc gene is translocated to the 21q+ chromosome. Southern blot analysis of DNA from bone marrow cells of four patients with this translocation showed no rearrangement of c-mos.     

A chicken transferrin gene in transgenic mice escapes X-chromosome inactivation

Mammalian X-chromosome inactivation involves a coordinate shutting down of physically linked genes. Several proposed models require the presence of specific sequences near genes to permit the spread of inactivation into these regions. If such models are correct, one might predict that heterologous genes transferred onto the X chromosome might lack the appropriate signal sequences and therefore escape inactivation. To determine whether a foreign gene inserted into the X chromosome is subject to inactivation, transgenic mice harboring 11 copies of the complete, 17-kilobase chicken transferrin gene on the X chromosome were used. Male mice hemizygous for this insert were bred with females bearing Searle's translocation, an X-chromosome rearrangement that is always active in heterozygous females (the unrearranged X chromosome is inactive). Female offspring bearing the Searle's translocation and the chicken transferrin gene had the same amount of chicken transferrin messenger RNA in liver as did transgenic male mice or transgenic female mice lacking the Searle's chromosome. This result shows that the inserted gene is not subject to X-chromosome inactivation and suggests that the inactivation process cannot spread over 187 kilobases of DNA in the absence of specific signal sequences required for inactivation.     

外源基因在转基因抗虫油菜中的遗传行为

为了选育出稳定的转基因抗虫油菜新品种，采用卡那霉素抗性分析和PCR检测技术对转基因抗虫油菜中Bt杀虫蛋白基因的遗传行进行了研究，连续三代的研究结果表明，Bt杀虫蛋白基因以单拷贝、杂合地整合到转基因植株（T01，T02，T03，T05，T06，T07，T08）的基因组中，并稳定地遗传给后代，纯合转基因株系杂交分析表明，在不同T0转基因植株中Bt杀虫蛋白基因整合位点是不同的，T01和T05或T03和T08的Bt杀虫蛋白若整位点是同源染色体的不同座位，而其他转基因植株的Bt杀虫蛋白若整位点是在非同源染色体上。     

外源基因在苹果植株中稳定性研究

以常规离体继代培养的转豇豆胰蛋白酶抑制剂(Cowpea trypsin inhibitor,CpTI)基因苹果(Malus domestica Borkh.)(包括皇家嘎拉、王林、乔纳金和富士等60个株系)组培苗为试材,应用卡那霉素筛选、PCR扩增及RT-PCR扩增对其外源基因的稳定性进行研究.结果表明,在60个常规继...     

动物乳腺生物反应器研究进展

针对利用动物乳腺生物反应器技术生产重组蛋白,具有生产效率高和经济效益明显的特点。综述了制备乳腺生物反应器时表达载体构建和基因转移两个关键环节的研究现状,并就基因打靶和体细胞克隆技术的结合探讨了乳腺生物反应器的发展趋势。