济宁市土壤放线菌资源调查研究

从济宁市采集土样,采用高氏1号琼脂和淀粉铵琼脂两种培养基分离放线菌,按国内外通用方法进行鉴定,并对土壤放线菌主要属——链霉菌属的类群进行分析与鉴定。结果表明:同一样品在高氏1号琼脂培养基上分离得到的放线菌要高于淀粉铵培养基上的。放线菌组成中,链霉菌占绝大多数,达放线菌总数的70%以上,其次是小单孢菌属,马杜拉放线菌属和诺卡氏菌属;链霉菌类群的组成较复杂,主要为白孢类群和粉红孢类群。     

西藏亚高山草原土放线菌研究

采用常规方法了分布于西藏海拔４０００－４６８０ｍ之间６个亚高山草原土的放线菌数量与组成,并从分离纯化所得３５５株放线菌中选出９８株代表菌株进行详细研究。结果表明：（１）供试放线菌分为９个属和２个未定属,链霉菌属和小单孢菌分别占土壤放线菌总数的５２．７％和２７．３％,钦氏菌属,孢囊放线菌属及孢链囊菌属共占１４．１％;链霉菌属共分为１２个类群,白孢类群,粉红孢类群及黄色类群分别占土壤链霉菌总数的４９．     

25株植物内生放线菌的系统发育分析

[目的]初步确定25株植物内生放线菌的种属关系。[方法]采用改进的FRED法从小麦、大葱、油菜等植物中分离出的25株内生放线菌中提取基因组DNA,对其16S rDNA序列进行PCR扩增和测序,并对其进行系统发育分析。[结果]系统发育分析结果表明25株植物内生放线菌可分为5个属,其中1株糖霉菌属,2株拟诺卡氏菌属,7株诺卡氏菌属,10株小单孢菌属和5株链霉菌属。[结论]25株供试菌株中,小单孢菌属所占比例最高。供试内生放线菌与相应菌属中已知菌株之间的进化距离集中在97.39%~99.92%范围内。     

沙棘和沙枣根瘤中固氮放线菌物种多样性研究

[目的]以沙棘和沙枣根瘤为研究对象,深入研究固氮放线菌物种的多样性。[方法]以通常用于分离弗兰克氏菌属（Frankia）固氮放线菌的无氮BAP、S、JA、ISP4、CB-CcI3、DPM和FTW等为固体和液体培养基,对采集自内蒙古通辽和赤峰的沙棘（Hippophae）和沙枣（elaeagnus）植物根瘤进行放线菌的分离纯化,并依据16S rDNA序列测定结果对分离物进行系统发育分析。[结果]分离得到的8株放线菌分属于小单孢菌属（Micromonospora）、链霉菌属（Streptomyces）、野野村菌属（Nonomuraea）和假诺卡菌属（Pseudonocardia）,所有根瘤样品中均未分离到弗兰克氏菌属菌株;采用弗兰克氏菌属16S-23S rDNA间隔区序列的特异性引物对所采集的沙棘和沙枣植物根瘤总DNA进行PCR扩增,未出现特异性的16S-23S rDNA间隔区序列条带。[结论]非豆科植物根瘤内固氮放线菌具有物种多样性,为今后固氮放线菌物种多样性研究提供借鉴。     

西北地区盐渍土中抗动物病原菌的拮抗放线菌筛选

对西北地区盐渍土中放线菌种类组成及拮抗性放线菌进行了相关研究.结果表明:该地区盐渍土中放线菌以链霉菌属为主,同时拮抗性放线菌所占比例较高,且广普性拮抗菌较多.试验中以固体琼脂块法和液体发酵法相结合,共筛选出10株对鸡的大肠杆菌、牛的无乳链球菌等多种动物病原菌有较强抑菌作用菌株,并对其进行了初步鉴定,其结果为:10株菌株均为链霉菌,其中黄色类群3株,粉红孢类群及球孢类群各2株,烬灰类群、绿色类群和淡紫灰类群各1株.     

贵州地区土壤中需氧放线菌的分离鉴定

为了解贵州土壤需氧放线菌的分布特点、系统发育和物种多样性,采集贵州贵阳、遵义、安顺、铜仁、毕节、黔南、六盘水、黔东南、黔西南9个区域的农耕地、湿地、森林3个类型土壤标本进行需氧放线菌的分离纯化,扩增其16S rDNA 基因序列后在 GenBank 中进行 Blast 比对分析,并以邻接法构建系统发育树。结果表明：在贵州9个区域108份土壤中分离出173株需氧放线菌,其中链霉菌属（Streptomyces）165株、北里孢菌属（Kitasatospora．）5株、诺卡氏菌属（Nocardioides）2株,在遵义农耕地土壤中分离出链霉菌属潜在新种1株（GYM8-3）。贵州土壤需氧放线菌主要为链霉菌属,在种间水平上存在分类多样性和地域差异性。     

贵州矿区放线菌多样性及对汞的抗性

为探明贵州喀斯特重金属污染区域土壤放线菌多样性特征以及为其污染修复应用奠定基础,从贵州铜仁地区的25份土壤样品中,采用梯度稀释涂布法,利用3种处理方式、7种培养基分离放线菌;通过形态特征、16SrDNA基因序列分析结合生理生化特征鉴定放线菌;同时筛选重金属汞抗性菌株。结果从土样中共分离出56株典型放线菌菌株,经初步鉴定,分属于链霉菌属、孢囊链霉菌属、高温单孢菌属、线杆菌属、间孢囊菌属、诺卡氏菌属、小单孢菌属;其中链霉菌属放线菌占68%。筛选出了1株对汞有较高抗性(75mg·L~(-1))的放线菌菌株,优良耐受菌株的最大抗性约85 mg·L~(-1),菌株经鉴定为枝链霉菌Streptomyces rameus。共分离出56株,分属于7个属的放线菌菌株;筛选出1株重金属汞高抗菌株,经鉴定为枝链霉菌。     

北海山口·大冠沙红树林放线菌的筛选与鉴定

[目的]了解广西北海山口、大冠沙红树林海泥中的放线菌资源。[方法]采用海水配制高氏培养基,分离来自广西北海红树林海洋淤泥中的放线菌样品,从中筛选、分离、提取10株典型放线菌菌株总DNA,用放线菌通用引物对16SrDNA进行PCR扩增,对扩增结果进行DNA序列测定。[结果]10株典型放线菌菌株中,8株（80%）是链霉菌属,为常见放线菌;2株（20%）是拟诺卡氏菌属,为稀有放线菌。[结论]广西北海红树林海洋淤泥蕴含着种类丰富的放线菌。     

新疆13种荒漠植物根内生放线菌多样性及其抗菌活性筛选

以荒漠植物骆驼刺、铃铛刺、碱蓬、盐穗木、柽柳等13种植物的根为材料,利用SCA培养基分离其内生放线菌,通过菌株16S rRNA基因测序,分析荒漠植物内生放线菌物种多样性。以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌、细极链格孢菌、大丽轮枝菌和尖孢镰刀菌为靶标,通过琼脂扩散法和平板对峙法开展抗菌活性筛选。从13种荒漠植物分离出533株内生放线菌,鉴定的361株,分布于6个目,7个科,9个属,77个种,另有3个潜在新种,其中链霉菌属为优势类群,冢村氏菌属与伦茨菌属首次从植物中分离得到。研究表明13种荒漠植物内生放线菌多样性有明显差异,骆驼刺内生放线菌最丰富,分离到6个属27个种,链霉菌属有20个种;老鹳草分离到的菌株数量最多,有3个属;铃铛刺分离到2个属,其中的链霉菌属有28个种;猪毛菜、盐穗木等植物只分离到链霉菌属。抗菌活性筛选显示80株放线菌有抗菌活性,其中链霉菌74株,拟无枝酸菌3株,拟诺卡氏菌、糖霉菌和链孢囊菌各1株。本研究为寻找新型抗菌活性化合物,为生物医药和生物肥料提供菌株来源。     

广西北海红树林土壤放线菌的分离与鉴定

[目的]鉴定广西北海红树林土壤放线菌的物种多样性。[方法]从广西北海红树林土壤中分离、筛选10株典型放线菌菌株,提取基因组DNA,进行16SrDNAPCR扩增与测序,并构建进化树。[结果]通过Blast比对,10株放线菌属于2个属,其中8株为链霉菌属（80%）,2株为拟诺卡氏菌属（20%）。[结论]广西北海红树林土壤蕴藏着种类丰富的放线菌。     

一种基于基因组RAPD分析的紫山药品种分子鉴定方法

[目的]研究一种基于基因组RAPD分析的紫山药品种分子鉴定方法.[方法]以来自中国不同地区的8个紫山药品种为材料,对RAPD技术在鉴定紫山药品种中的科学性进行技术上的验证与分析.[结果]不同引物的RAPD-PCR结果在8种紫山药中体现出谱带清晰度及数量方面的不同特点,其中引物S1255的多态性较高且谱带清晰,可以此为基础鉴定紫山药的不同品种.[结论]理想的反应条件能保证RAPD技术具有很好的稳定性,是适用于鉴定紫山药品种的简易与理想的DNA分子标记.     

糠醛渣炭化学法制备活性炭及其灰分的去除

[目的]探索糠醛渣炭化学法制备活性炭的最佳工艺条件,同时找到有效的灰分去除方法。[方法]以糠醛渣炭为原料,采用磷酸活化的方法制备活性炭,并采用合适的方法去除活性炭的灰分。[结果]通过正交试验确定了磷酸活化的最佳条件为:浸渍比1∶4,活化液质量分数60%,活化温度500℃,活化时间60 min。用12%的氢氟酸溶液除灰分,80℃环境下搅拌12 h(在通风橱中反应),测得的灰分含量为9.53%,亚甲蓝吸附值178.3 mg/g,碘吸附值899.1 mg/g。[结论]糠醛渣炭是制备活性炭的优良原料,用其制备活性炭可解决糠醛渣炭的堆积污染问题,还可避免资源浪费。     

不同光质对烟草叶片中类半胱氨酸蛋白酶基因表达和活性的影响(英文)

[目的]探讨不同光质对烟草叶片生长发育及衰老进程中类半胱氨酸蛋白酶活性及其基因表达的调控。[方法]通过覆盖不同颜色滤膜(白膜、红膜、黄膜、蓝膜和紫膜)获得不同的光质,监测不同光质下的烟草叶片在生长发育及衰老过程中叶绿素含量、类半胱氨酸蛋白酶活性及相关几个基因表达的变化。[结果]与白、红、黄膜处理相比,蓝膜和紫膜处理延缓了烟草叶片生长后期叶绿素含量的下降和衰老进程,同时蓝、紫膜处理的烟草叶片有相对较低的类半胱氨酸蛋白酶活性和相关的几个基因的表达量。[结论]不同光质对烟草叶片的生长发育及衰老进程有不同的影响,这在某种程度上是通过影响类半胱氨酸蛋白酶及其相应的基因表达来实现的。     

放线菌扫描电镜样品简便快速的制备方法

[目的]研究放线菌扫描电镜样品简便快速的制备方法。[方法]以细黄链霉菌为样品,采用简便快速扫描电镜插片法制样,进行电镜观察。[结果]保持了菌株真实原貌特征,获得很好的试验照片。[结论]放线菌用插片法制样是一种可靠、简便、快速的方法。     

贺兰山野生岩羊布鲁氏菌病分子生物学检测与分析

[目的]了解宁夏银川贺兰山部分区域岩羊布鲁氏菌病的分布情况.[方法]以提取53份岩羊样品DNA为模板,使用P1和P2引物进行PCR扩增,对贺兰山野生岩羊布鲁氏菌病的分布状况进行检测.[结果]53份野生岩羊样品中布鲁氏菌病的阳性检出率为0.[结论]该研究表明宁夏贺兰山野生岩羊中不存在布鲁氏菌病,但还需要进一步研究.     

铁矿尾矿放线菌分离株的系统发育分析

[目的]通过确定12株典型分离株的系统发育地位,初步探讨铁矿尾矿中放线菌生物多样性。[方法]采用酚-氯仿法提取基因组DNA,PCR扩增16S rDNA并测序后进行系统发育分析。[结果]12株铁矿尾矿放线菌均属于链霉菌属,与进化关系最近的已知菌株同源性为98.7%～100%。[结论]铁矿尾矿中可培养放线菌类群以链霉菌为主,其中存在大量潜在的新种。     

不同光质对烟草叶片生长发育过程中类半胱氨酸蛋白酶活性及其基因表达调控的影响

[目的]探讨不同光质对烟草叶片生长发育及衰老进程中类半胱氨酸蛋白酶活性及其基因表达的调控。[方法]通过覆盖不同颜色滤膜（白膜、红膜、黄膜、蓝膜和紫膜）获得不同光质,监测不同光质下烟草叶片在生长发育及衰老过程中叶绿素含量、类半胱氨酸蛋白酶活性及相关几个基因表达的变化。[结果]与白、红、黄膜处理相比,蓝膜和紫膜处理延缓了烟草叶片生长后期叶绿素含量的下降和衰老进程,同时蓝、紫膜处理的烟草叶片有相对较低的类半胱氨酸蛋白酶活性和相关的几个基因的表达量。[结论]不同光质对烟草叶片的生长发育及衰老进程有不同的影响,这在某种程度上是通过影响类半胱氨酸蛋白酶及其相应的基因表达来实现的。     

甘蔗糖蜜发酵液中维生素B12提取方法的比较

[目的]筛选出适合提取甘蔗糖蜜发酵液中维生素B12的方法,解决糖蜜发酵液中菌体难破碎的问题.[方法]针对谢氏丙酸杆菌和维生素B12的特性,分别采用煮沸法、微波加热法及Na2HPO4加压法对谢氏丙酸杆菌菌体进行破碎,比较不同细胞破碎方法对菌体维生素B12提取率的影响.[结果]使用煮沸法、微波加热法、Na2HPO4加压法破碎细胞提取维生素B12的最佳工艺条件：煮沸法为100℃处理30 min,微波加热法为140 W处理6 min,Na2HPO4加压法为Na2HPO4提取剂添加量25 mL/g、121℃处理10 min,对应的甘蔗糖蜜发酵液中维生素B12提取率分别为92.25％、95.67％和89.36％.[结论]煮沸法是提取菌体内维生素B12时细胞破碎的首选方法.     

拮抗链霉菌AFLP分析技术体系的研究(英文)

[Objective] The aim of this study was to investigate the preparation method and amplification system of antagonistic streptomyces DNA templates based on AFLP assays, and also provide a basis for the application of AFLP technology in the analysis of streptomyces or even actinomyces. [Method] The DNAs were extracted by the modified CTAB method and amplified by the Pst Ⅰ/Mse Ⅰ AFLP kit and its reaction system. The amplified products were analyzed by the denatured polyacrylamide gel electrophoresis. [Result] The genomic DNAs of ten antagonistic strains of Streptomyces were extracted and tested. The result of 0.8% agarose gel electrophoresis showed that the major DNA bands were clear without degradation and RNA residue, with the fragment sizes ranging from 37.64 to 40.86 Kb. By ultraviolet spectrophotometry, the OD260/OD280 values varying from 1.625 to 1.833 were obtained. Furthermore, the agarose gel electrophoresis of DNA products digested by Pst Ⅰ/Mse Ⅰ presented the dispersed fluorescent long band, which indicated that the enzymatic hydrolysis was fully carried out. The amplified bands of DNA templates by the screened three pairs of primers were clear with rich polymorphism. [Conclusion] The preparation method and amplification system of DNA template established in this study can be used in the AFLP analysis of Streptomyces.     

拮抗链霉菌AFLP分析技术体系的研究

1材料与方法 1．1菌株供试拮抗链霉菌共10个菌株,均由该课题组分离自京郊菜田土壤和天然次生林土壤（表1）。