嘌呤核苷类核成熟抑制剂对延边奶山羊卵母细胞体外成熟的影响

[目的]提高卵母细胞体外成熟率及其后续发育能力。[方法]以延边奶山羊为试验对象,活体采卵所获得的卵母细胞为材料,利用核成熟抑制剂HX和IBMX分别进行体外成熟培养,研究嘌呤核苷类核成熟抑制剂对延边奶山羊卵母细胞体外成熟的影响。[结果]所有浓度HX和IBMX均可有效维持卵母细胞停留在GV期且呈剂量依赖性逐渐升高。最适宜延边奶山羊卵母细胞成熟的HX和IB-MX添加浓度分别为2和0.2 mmol/L。[结论]该研究可为延边奶山羊的转基因和体细胞克隆试验等提供稳定的成熟卵母细胞来源。     

波尔山羊羔羊超数排卵及体外受精的研究

本试验探索波尔山羊羔羊超数排卵的可行性及体外受精效果。应用4种不同的促性腺组合,对16只7周龄的波尔山羊进行超排,并对采集的卵子实施体外受精。共获得卵母细胞918枚,其中超排处理Ⅰ组到Ⅳ组的可用卵母细胞数分别为49,87,429,293枚,各组间差异显著（0．01〈P〈0．05）。卵母细胞进行体外培养24h后与上游法获能的精子体外受精,48h后各组的卵裂率分别为27％,21％,60．2％,69％,其中CIDR＋PMSG＋FSH处理组、GnRH＋FSH处理组、PMSG＋FSH处理组差异极显著（P〈0．01）;6d到10d各组囊胚率分别为7％,6．5％,18％,13％,PMSG＋FSH处理组、GnRH＋FSH处理组、CIDR＋PMSG＋FSH处理组差异极显著（P〈0．01）。结果表明,CIDR＋FSH处理组和CIDR＋PMSG＋FSH处理组能显著提高超排效果,两组获得的卵子受精后的卵裂率和囊胚率高于其他组。     

延边奶山羊耳成纤维细胞体外培养的研究

为了给延边奶山羊转基因核移植及乳腺生物反应器研究提供足够且状态良好的细胞,采取延边奶山羊耳部组织块,利用组织块贴壁法进行原代培养和传代培养,对于纯化了的成纤维细胞观察其生长状态,并对4代以后的成纤维进行生长曲线、核型分析,并对细胞进行冷冻复苏试验,检测细胞活力.结果表明,4～13代体外培养成纤维细胞的细胞形态及核型基本正常,13代以后,细胞染色体变异比例增加,15代以后,细胞生长速度减慢;冷冻复苏后的细胞除生长速度减慢外,其它细胞生物学特征均正常,基本符合体细胞克隆、转基因等试验的基本要求,可以用于试验研究.     

羔羊超数排卵及体外受精技术研究

用FSH+ PMSG和FSH+LH 2种处理方法,对8只6周龄的高山细毛羊进行超数排卵试验,4只作对照组,并对采集到的卵子进行体外受精,探索羔羊超数排卵的可行性及体外受精的效果.结果表明:2组处理共获得发育卯泡583个,回收卵母细胞255枚.卵母细胞经体外培养24 h后与上游法获能的精子进行体外受精,48 h后2组处理...     

β-巯基乙醇对延边黄牛卵母细胞体外成熟及发育的影响

在成熟培养液中添加不同浓度的β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol,β-ME),研究其对延边黄牛卵母细胞体外成熟及发育的影响。结果表明,将卵母细胞置于100μmol/L的β-巯基乙醇的成熟培养液中进行体外培养,其成熟率、卵裂率和囊胚发育率均好于对照和其他处理,说明β-巯基乙醇的最佳浓度适合进行延边黄牛体细胞克隆中卵母细胞的体外成熟培养。     

延边奶山羊心电图正常值的测定

本实验通过对41例健康延边奶山羊心电图的测定,初步测定出其正常值。测定的结果表明:心电图为窦性心律,平均心率为108次/分;P波振幅平均为0.048mv,时限平均为0.043秒;P—R间期平均为0.118秒;QRS波群呈多种波型,其中qR、QR和rS型最多,时限平均为0.044秒;S—T段平稳,时限平均为0.162秒;T波振幅平均为0.161mv,时限平均为0.08秒;Q—T间期平均为0.283秒。通过此测定,为心电图应用于诊断延边奶山羊心脏疾病提供了一定的科学依据。     

延边奶山羊血清蛋白组分正常值的研究

本试验用醋纤薄膜电泳法测定了延边奶山羊泌乳期母羊和种公羊的血清蛋白各组分的百分比值。其平均值(X±S)分别为白蛋白59.12±3.21、α_1-球蛋白4.31±1.79、α_2-球蛋白2.76±1.21、β_1-球蛋白6.13±1.28,β_2-球蛋白5.01±1.94、γ-球蛋白22.68±6.44,球蛋白总量40.88±8.21,白、球蛋白比值(G/A)0.73±0.28。     

EDTA-Na、半胱氨酸对延边黄牛卵母细胞体外成熟及克隆胚胎体外发育的影响

在成熟液中添加不同浓度的乙二胺四乙酸钠(EDTA-Na)、半胱氨酸,研究两者对延边黄牛卵母细胞体外成熟及克隆胚胎体外发育的影响。结果表明:(1)将卵母细胞置于100μmol/L的EDTA-Na的成熟液中培养,其成熟率和后期发育率均好于其他浓度组;(2)将卵母细胞置于0.56 mmol/L的半胱氨酸的成熟液中进行培养,成熟率和后期发育率均优于其他浓度组。试验结果证明此两种药的最佳浓度适合进行延边黄牛体细胞克隆中卵母细胞体外成熟培养。     

山羊卵泡卵母细胞体外成熟的研究

研究了ＦＣＳ,１７β－Ｅ２,ＦＳＨ,ＬＨ对山羊卵泡卵母细胞成熟的作用,及培养时间对卵母细胞核和细胞质成熟的影响。结果表明,添加体积分数为１０％～１５％的ＦＣＳ,１～２ｍｇ·Ｌ－１１７β－Ｅ２,２０～５０ｍｇ·Ｌ－１ＬＨ和１０ｍｇ·Ｌ－１ＦＳＨ有利于提高卵母细胞核成熟,并放出第一极体。而成熟培养２０,２４ｈ的卵母细胞成熟率显著高于培养１６ｈ（Ｐ＜０．０５）,核成熟后培养３～４ｈ有利于卵母细胞质成熟,对其后的受精、卵裂及胚胎的进一步发育有重大影响。且ＴＣＭ１９９＋质量分数为１０％～１５％的ＦＣＳ＋１～２ｍｇ·Ｌ－１１７β－Ｅ２＋１０ｍｇ·Ｌ－１ＦＳＨ＋２０～５０ｍｇ·Ｌ－１ＬＨ是卵母细胞成熟的理想培养系统。     

饲养条件对波尔山羊超数排卵效果的影响

研究饲养条件对波尔山羊超数排卵效果的影响。结果表明,在室内控温(22~24℃)和室外自然条件下(10~20℃),分别对处女母羊和经产母羊进行超数排卵处理,无论是处女母羊还是经产母羊,超排效果差异都极显著(P<0.01)。此外,在日粮中添加青绿多汁饲料对处女母羊和经产母羊的超排效果都有改善作用(P<0.05),其中日粮中添加青绿多汁饲料的处女母羊的超排效果接近未添加青绿多汁饲料的经产母羊。因此,波尔山羊在进行超数排卵时,应选择经产母羊,日粮中应添加青绿多汁饲料,避开低温条件进行。     

不同激素添加成分和受精液对山羊卵巢卵母细胞体外成熟与受精的影响

就成熟培养液中添加成分和不同受精液对山羊卵母细胞体外成熟与体外受精的影响进行了研究.结果表明,成熟培养液中添加HCG组的卵母细胞成熟率(85.7%)极显著高于PMSG组(50%)和FSH LH组(57.1%)(P<0.01),受精率比较则HCG组(62.2%)极显著高于PMSG组(34.7%)(P<0.01),显著的高于FSH LH组(45.2%)(P<0.05);添加了17β-雌二醇的成熟培养液对山羊卵母细胞的成熟率和受精率没有明显影响(P>0.05),而添加5%山羊卵泡液的成熟培养液则使卵母细胞的成熟率和受精率明显下降,卵裂率(7,7%)却显著高于对照组(0.0%)和17β-雌二醇组(0.0%) (P<0.05);分别以TALP液、BO液、M-199液为基础液组成的三种受精液(I液、II液、Ⅲ液)中II液的受精率(62.2%)显著高于Ⅲ液(44.7%)(P<0.05),而且II液的卵裂率(21.6%)显著高于I液(9.1%)(P<0.05),极显著高于Ⅲ液(0.0%)(P<0.01).     

山羊卵泡卵母细胞体外成熟体外受精研究

对山羊孵巢卵泡卵母细胞的采集方法、 PMSG处理山羊促进多卵泡发育及受精体系进行了研究。结果表明：切割法获可用卵数高于抽吸法， PMSG处理获卵总数及可用卵数高于对照组， BO液法的受精率高于 TALP液法，而 TALP液法的桑椹胚率高于 BO液法。     

山羊卵巢卵母细胞的体外成熟

将234枚卵丘细胞层完整致密的卵母细胞分别培养于含有10％FCS的TCM_(199)+hCG(20μg/mL)、TCM_(199)+hCG+17β—E_2(1μg/mL)和Ham＇s F_(12)+hCG+17β—E_2三种培养基中,培养24—26h,其成熟率分别为55.6％(15/27)、79.4％(104/131)和76.3％(58/76)。结果表明:TCM_(199)和Ham＇s F_(12)都是山羊卵母细胞体外成熟的合适培养基;雌激素的存在对其成熟是有益的(P<0.05)。     

波尔山羊与关中奶山羊级进杂交后代的生长发育研究

对波尔山羊与关中奶山羊级山羊级进杂交后代的生长发育性状进行了初步研究。结果表明：杂交一代（F1）羊与波尔山羊的初生重差异不显著（P〉0.05）,1，2，3月龄F1代羊的体重比同龄波尔山羊高，且差异达显著水平（P〈0.05）。F1代羊的体尺指标明显大于同龄波尔山羊，其中胸围差异显著（P〈0.05）。杂交二代（F2）羊与纯种波尔山羊相比，各项指标差异不显著（P〉0.05），与同龄F1代羊相比，1、2、3月龄的体重，体尺指标差异显著（P〈0.05），杂交三代（F3）羊的体重体尺均大于同龄波尔山羊，趋同于同龄F1代羊。波尔山羊与关中奶山羊的F1代羊日增重均高于同龄波尔山羊，F2代羊的日增重比同龄波尔山羊稍高，与同龄F1代羊相比，其日增重速度明显低于同龄F1代羊。F3代羊的日增重基本与同龄波尔山羊一致，说明波尔山羊与关中奶山羊杂交，其后代羊在生长发育性能方面具有明显的杂交优势，F1代羊生长发育速度快，而F2、F3代羊生长发育速度减慢，在F1代进行横交固定，是培育高生产性能的肉用山羊新品种（系）的重要方法。     

细胞因子与激素对山羊卵母细胞体外成熟和胚胎发育的影响

研究了在培养液中添加细胞因子和不同激素对山羊卵母细胞体外成熟和胚胎体外发育的影响.结果表明: 添加不同浓度激素组合能促进早期胚胎的发育(P<0.05),1 μg/ml雌二醇(E2)、200 μg/ml 促黄体素(LH)和10 μg/ml 垂体促卵泡素(FSH)的浓度组合效果最好(P<0.05);胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、白血病抑制因子(LIF)、干细胞因子(SCF)对山羊卵母细胞体外成熟和胚胎体外发育有极显著影响(P<0.01),但不同浓度间无显著影响(P>0.05),添加10 IU/ml LIF、15 IU/ml GDNF和15 IU/ml SCF对山羊胚胎体外发育最好;GDNF LIF SCF组和GDNF LIF组卵母细胞成熟率极显著高于LIF SCF和GDNF SCF组(P<0.01),GDNF SCF和LIF SCF组间对卵母细胞体外成熟无差异(P>0.05),早期胚胎发育上GDNF LIF SCF组高于GDNF LIF和LIF SCF组,也高于GDNF SCF组,均能提高桑椹胚率,但试验组间差异不显著(P>0.05).可见GDNF、LIF和SCF能提高卵母细胞的成熟率和桑椹胚率,LIF和GDNF对卵母细胞体外成熟有协同作用.     

猪卵母细胞体外成熟研究

[目的]探讨猪卵母细胞体外成熟的最佳培养条件。[方法]以NCSU-23为基础培养基,研究不同激素组合和培养时间（36、40、44和48 h）对猪卵母细胞体外成熟的影响。[结果]猪卵母细胞体外培养44 h后,成熟率最高,为81.4%;猪卵母细胞在成熟培养液培养22h后,再在无激素培养液中继续培养22 h时,成熟率最高;添加性腺激素的组成熟率显著高于不添加组,差异显著（P〈0.05）。[结论]在体外成熟培养过程中,添加性腺激素能显著提高猪卵母细胞成熟率。     

黔北麻羊超数排卵效果分析

[目的]探索适宜的地方山羊品种超数排卵方案。[方法]以黔北麻羊为试验动物,比较不同品牌促卵泡素(FSH)、相同品牌不同剂量FSH的超数排卵效果。[结果]41只黔北麻羊的平均黄体数14.59个,平均有效胚数8.39枚。日本产FSH 20.0 AU/只剂量组平均黄体数13.90个,平均有效胚数10.21枚;加拿大产FSH 160 mg/只剂量组平均黄体数14.00个,平均有效胚数7.33枚。[结论]日本产FSH的适宜剂量为20.0 AU/只,加拿大产FSH的适宜剂量为160 mg/只,日本产FSH的超数排卵效果优于加拿大产FSH,但差异不显著。