球孢白僵菌胞外蛋白酶及几丁质酶的研究进展

昆虫病原真菌白僵菌由体表入侵寄主时,分泌蛋白酶、几丁质酶等来分解昆虫体表皮,以完成侵染过程,对致死寄主有相当重要的辅助作用.笔者综述了近年来球孢白僵菌蛋白酶、几丁质酶的研究进展.     

化学杀虫剂对绿僵菌胞外蛋白酶和几丁质酶活性的影响

研究了几种化学杀虫剂对金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)胞外蛋白酶和几丁质酶活性的影响。结果表明,化学杀虫剂对绿僵菌的胞外蛋白酶和几丁质酶活性影响较大,供试的12株金龟子绿僵菌大部分菌株的胞外蛋白酶和几丁质酶活性均明显降低,仅有Ma202、Ma207菌株的胞外蛋白酶和几丁质酶活性略有提高。     

球孢白僵菌胞外蛋白酶和几丁质酶活性与对亚洲玉米螟毒力的相关性分析

以振荡摇瓶培养法培养17株球孢白僵菌(Beauveriabassiana),分析其总胞外蛋白酶和几丁质酶的产生水平,同时用这些菌株的分生孢子粉作为样品,用人工饲养的亚洲玉米螟5d龄幼虫作为试虫,作毒力生物测定。并分析各个因素之间的相关性,验证各个酶活性指标作为毒力的生物测定的替代或者补充指标的可能性。结果表明,菌株间同代毒力、酶活之间的差异比较大,LT50的变化范围为4.82~10.06d,胞外蛋白酶活性的变化范围是0.86×10-2~3.66×10-2IU/mL,胞外几丁质酶活性的变化范围是0.012~1.47IU/mL。将后二者分别与各个菌株对玉米螟的LT50进行回归分析,结果发现胞外蛋白酶活性和胞外几丁质酶活性以及测定胞外蛋白酶活性时的干物质增重3个指标,与感染的亚洲玉米螟幼虫的死亡率及LT50的相关性都不显著,不能作为对亚洲玉米螟毒力的生物测定的替代或补充指标。     

四脊裸胞壳Dh菌株液体培养条件下淀粉酶的产生及活性影响因子

对虫生真菌四脊裸胞壳(Emericella quadriclineata)Dh菌株产淀粉酶的条件及理化特性进行了研究.在孢子浓度为1.5×106个/mL的PD培养液中恒温(25±1)℃振荡(120 r/min)培养3.5 d,菌丝生物量最大达5.1 mg/mL,产淀粉酶量达272.42 U/mg;培养液初始pH4~6最有利淀粉酶的产生,产酶量为1 377.20~1 528.99 U/mg菌丝.淀粉酶活性在50℃,pH 6.0条件下最高.在pH4~7范围内20℃下处理20 min或在pH4~7范围内37℃下处理1 h酶活较为稳定,保持在65%以上.40℃下处理20 min酶活保持90%以上.60℃和70℃下处理20 min,酶活保持在50%以下.在70℃下处理80 min,剩余酶活仅为11.70%.一定浓度的Cu2+和Ba2+有利于酶活提高;同时Mg2+,Fe2+,Ca2+,NH4+对酶活性的抑制作用依次增强.     

海洋低温几丁质酶菌株筛选、鉴定及酶谱分析

以胶体几丁质为唯一碳源,从大连渤海湾的底泥样品中分离到1株高产低温几丁质酶的海洋细菌,命名为DL-06。由菌株的形态特征结合16SrDNA系统发育分析,初步确定该菌株属于交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp.DL-06)。该菌株经30h摇瓶发酵后测定粗酶液几丁质酶酶活为9.184U/mL,最适反应温度为15℃,60℃孵育1h仍保持50%以上的酶活性,表明该低温酶具有一定热稳定性。经SDSPAGE及酶谱分析,该菌株能够产生至少3种以上不同分子质量的几丁质酶组分。Pseudoalteromonas sp.DL-06产几丁质酶在低温下高活性与热稳定特点,使其具有潜在的工业应用价值。     

具几丁质酶抑制活性的中性蛋白酶的筛选与纯化

利用平板快速筛选法,从土壤中筛选到一株细菌BacillusSp.2108,其代谢物对几丁质酶具有较强的抑制活性。对其发酵液离心,用硫酸铵盐析后,经Sephadex G-25脱盐柱脱盐、DEAE Sephrose Fast F low阴离子交换柱层析和低压液相色谱Superdex G 75凝胶过滤层析等步骤进行分离纯化,最后通过SDS-PAGE检测,得到一条单带。纯品经SDS-PAGE,转膜,测序,及序列比对,初步判定此抑制物是一种中性蛋白酶。     

具几丁质酶抑制活性的中性蛋白酶的筛选与纯化

利用平板快速筛选法,从土壤中筛选到一株细菌Bacillus Sp.2108,其代谢物对几丁质酶具有较强的抑制活性.对其发酵液离心,用硫酸铵盐析后,经Sephadex G-25脱盐柱脱盐、DEAE Sephrose Fast Flow阴离子交换柱层析和低压液相色谱Superdex G 75凝胶过滤层析等步骤进行分离纯化,最后通过SDS-PAGE检测,得到一条单带.纯品经SDS-PAGE,转膜,测序,及序列比对,初步判定此抑制物是一种中性蛋白酶.     

产组成型几丁质酶菌株的筛选及产酶条件优化

利用两次平板透明圈筛选,结合液体培养,从土壤中分离出1株产几丁质酶细菌,命名为CCB-1.该菌株产几丁质酶不需要几丁质诱导,而且高浓度的葡萄糖不抑制该菌株产几丁质酶,因此该菌株是组成型产几丁质酶.形态学观察和生理生化测定结果表明CCB-1是浸麻芽孢杆菌（Bacillus macerans）.在250 mL摇瓶中研究了氮、葡萄糖浓度、pH值、培养温度、几丁质类型和培养时间对CCB-1生长及产酶的影响.CCB-1菌最适产酶条件为：温度37℃;pH 6-pH 7之间;起始葡萄糖浓度8g/L;0.4%的有机氮（如蛋白胨、牛肉膏、酵母膏）;0.3%的胶体几丁质或细粉几丁质.CCB-1在优化培养条件下振荡培养60 h产酶最高,达4.23 U/mL.     

蜜蜂球囊菌几种胞外蛋白酶的特性

 【目的】研究由蜜蜂球囊菌引起的真菌性疾病白垩病的侵染机制,以及蜜蜂球囊菌胞外蛋白酶的种类及其特性。【方法】利用人工合成的培养基,在体外诱导蜜蜂球囊菌分泌胞外蛋白酶,用硫酸铵沉淀和透析,获得初酶液,利用相应的底物对酪蛋白酶、偶氮酪蛋白酶、胶原蛋白酶、弹性蛋白酶和胰蛋白酶的活力进行测定。【结果】蜜蜂球囊菌分泌的胞外酶主要有酪蛋白酶、偶氮酪蛋白酶、胶原蛋白酶3种,无弹性蛋白酶和胰蛋白酶。对这3种酶的最适温度、pH值以及热稳定性和酸碱稳定性进行了测定。这3种胞外酶的最适反应温度都在40℃左右,最适pH为7左右,均不耐高温,热稳定性差,在中性的pH环境下比较稳定。【结论】蜜蜂球囊菌可以分泌多种胞外蛋白酶,它们的最适pH和温度与蜜蜂消化道内的环境一致。     

毛壳菌几丁质酶的酶学性质及抑菌活性研究

【目的】研究毛壳菌(Chaetomiumsp.YMF1.00843)产胞外几丁质酶的酶学性质及抑菌活性,为几丁质酶的抑菌作用机理研究提供依据。【方法】利用蛋白活性电泳方法纯化几丁质酶液,测定几丁质酶的酶学性质,并用酶液浸泡病原菌菌块,研究酶液的抑菌活性。【结果】用蛋白活性电泳方法得到几丁质酶的纯酶液,经检测为电泳纯条带,分子质量为43ku。毛壳菌几丁质酶的最适反应温度为40℃,最适pH为6,40℃以下保温30min均能保持其初始活性,在pH 5~9保温30min仍旧具有较高的活性,Ca2+和Zn2+能明显增强几丁质酶的活性,其纯酶液能抑制立枯丝核菌和烟草赤星病菌的菌丝生长。【结论】毛壳菌几丁质酶在比较温和的条件下能保持一定的活性,纯酶液对部分病原真菌有较强的抑制作用。     

蛋白酶及其活性检测方法研究进展

蛋白酶又称蛋白水解酶,其参与了生物体的多种生物过程。它们不仅能催化底物水解,更能调节蛋白质的定位与活性,调节蛋白质与蛋白质的相互作用,参与胞内信号传导以及新的生物活性分子的生成。目前,蛋白酶的活性分析方法可分为均相检测和分离型检测2种。介绍了蛋白酶的种类、功能及其活性的检测方法。     

生防菌BC2007对番茄促生防病作用的研究

[目的]探讨生防菌BC2007对番茄的促生防病作用。[方法]对重组的基因工程菌BC2007的GFP基因以及苯酚羟化酶基因进行了检测,并通过盆栽试验比较了BC2001和BC2007对番茄的促生防病作用。[结果]生防菌BC2007能减少番茄根系线虫瘤并对番茄的营养生长具有促进作用,也有利于后期产量的形成。[结论]为生物杀线虫菌剂的研制提了供理论依据。     

Extracellular Enzyme Activity of Sclerotia-forming and Non-Sclerotia-forming Morchella Strains

The extracellular enzyme activities of sclerotia-forming and nonsclerotia- forming single spore strains of Morchella conica and M. crasspies were determined and compared. The non sclerotia-forming strains of M. conica exhibited higher aver- age activities of protease, catalase and xylanase but lower laccase activity than those of sclerotia-forming strains. However, the differences did not reach significance level. The soluble amylases activity of M. crasspies was significantly higher than that of M. conica, while the mean activity of other enzymes had differences between them, but the differences did not reach significance level.     

稀土对水稻白叶枯病菌生长及胞外酶活性的影响

研究了稀土氧化镧（Ｌａ２Ｏ３）对水稻白叶枯病菌（ＸａｎｔｈｏｍｏｎａｓｏｒｙｚａｅＰｖ．ｏｒｙｚａｅ，简称Ｘｏ）生长及胞外酶活性的影响。稀土浓度为５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０ｍｇ／Ｌ时，对Ｘｏｏ生长均呈抑制作用，在固体培养中菌落出现时间延迟，直径减小，液体培养中ＯＤ６２０值下降；稀土浓度大于３５０ｍｇ／Ｌ时，病菌停止生长；浓度为２００ｍｇ／Ｌ时，稀土对Ｘｏ的蛋白酶、果胶酶活性有明显的刺激作用，对纤维素酶活性无明显影响     

不同光质对烟草叶片中类半胱氨酸蛋白酶基因表达和活性的影响(英文)

[目的]探讨不同光质对烟草叶片生长发育及衰老进程中类半胱氨酸蛋白酶活性及其基因表达的调控。[方法]通过覆盖不同颜色滤膜(白膜、红膜、黄膜、蓝膜和紫膜)获得不同的光质,监测不同光质下的烟草叶片在生长发育及衰老过程中叶绿素含量、类半胱氨酸蛋白酶活性及相关几个基因表达的变化。[结果]与白、红、黄膜处理相比,蓝膜和紫膜处理延缓了烟草叶片生长后期叶绿素含量的下降和衰老进程,同时蓝、紫膜处理的烟草叶片有相对较低的类半胱氨酸蛋白酶活性和相关的几个基因的表达量。[结论]不同光质对烟草叶片的生长发育及衰老进程有不同的影响,这在某种程度上是通过影响类半胱氨酸蛋白酶及其相应的基因表达来实现的。     

粒毛盘菌DP5胞外多酚的提取及抗氧化活性研究

[目的]使用树脂对粒毛盘菌DP5胞外多酚进行提取,并且对其体外抗氧化活性进行评价。[方法]以多酚得率为指标,优化粒毛盘菌DP5胞外多酚的提取工艺。[结果]以大孔树脂X-5为填充料,进样浓度为0.64 mg/ml,进样流速为1 ml/min,洗脱溶剂为浓度80%的乙醇,洗脱流速为1 ml/min,粒毛盘菌胞外多酚含量为815.7 mg GAE/g。体外抗氧化试验表明,粒毛盘菌DP5胞外多酚具有还原力和清除DPPH自由基、羟自由基(·OH)、亚硝酸盐(NO2-)的效果,且随着多酚浓度的升高其活性增强。[结论]该研究结果为粒毛盘菌多酚的开发利用提供理论依据。     

6种云杉属植物花粉活性测定

以引种栽培30～40年云杉树种为研究对象,通过对花粉进行生活力测定,从而分析并探讨引种云杉繁殖能力对环境的适应性特征,为今后开展杂交育种工作提供理论依据.文章采用4种花粉活性测定方法对6种云杉花粉进行活性测定试验,得出以下结果:4种方法中,I2-KI染色法和醋酸洋红染色法染色效果不佳,TTC染色法和离体培养法试验效果较好,用TT℃染色法和离体培养法对花粉进行活性测定,花粉活性均表现为白扦活性最高,粗枝云杉活性最低,且不同云杉花粉最适培养基中蔗糖浓度不同,多数以15 g/ml的蔗糖浓度萌发效果最好,而青海云杉以10 g/ml的蔗糖浓度萌发效果最佳.6种云杉花粉最适培养基中硼酸浓度均为0.05 g/ml.     

硅酸盐细菌菌株的分离及其解钾解硅活性初探

[目的]研究硅酸盐细菌在不同供氧条件下解硅、解钾的能力。[方法]参照硅酸盐细菌菌株形态特征,从河北地区玉米田土样中分离得到1株h-3菌株。通过对其进行菌落形态、生理生化特征鉴定和16S rDNA全序列分析,鉴定其种属。并对h-3菌株进行解钾及解硅能力的测定。[结果]结果表明,h-3菌株为硅酸盐细菌,属于胶质芽孢杆菌（Bacillus mucilaginosus）;通过将其解钾及解硅能力与市售生物钾肥k-7菌株比较发现,h-3菌株活性较高,具有作为生物钾肥和硅肥进一步研究的潜力。[结论]该研究结果为生物肥料用于旱田作物提供一定的理论依据。     

PS04菌株的抗真菌活性

前一阶段分离得到1株具有抗真菌活性的细菌菌株PS04,室内测定结果表明,该菌株培养物乙醇抽提物对水稻纹枯病、稻瘟病等多种植物病害的病原真菌具有抗菌活性,对水稻纹枯病病原的抑制中浓度为99.4μg/mL,作用于植物病原真菌,导致菌丝畸形,菌丝体节间缩短,菌丝体顶端分枝增多。该抑菌活性物质稳定性好,在温度40~100℃,pH6.2~7.0范围内稳定。