章鱼下脚料发酵液中多肽的分离及抗氧化活性的研究

以章鱼下脚料为原料,V-3菌种发酵后,采用阴离子交换层析法分离章鱼下脚料发酵液中的多肽.通过改变缓冲液流速、上样量和洗脱离子强度,确定了最佳分离条件,并测定了分离组分的含量及抗氧化活性.结果表明:最佳分离条件为流速o.8 mL/min,上样量90 mg,洗脱离子强度1 mol/L.经测定发酵液多肽含量为40.5 mg/g(下脚料粉),分离后组分FⅠ多肽含量为65.2 mg/g,FⅡ多肽含量为921.3mg/g.同时,FⅠ和FⅡ两个组分在浓度为0.6 mg/mL时对羟自由基清除率分别为60.1％和40.2％,IC50分别为0.40 mg/mL、0.62 mg/mL,对超氧阴离子自由基清除率分别为42.0％和36.4％,IC50分别为0.83 mg/mL、1.08 mg/mL.对DPPH自由基清除率分别为40.2％和31.5％,IC50分别为0.73 mg/mL、0.93 mg/mL,说明FⅠ和FⅡ对自由基具有清除作用,且FⅠ的清除作用强于FⅡ.     

大孔吸附树脂纯化苦荞多肽工艺研究

【目的】研究苦荞多肽纯化工艺和抗氧化活性。【方法】以大孔吸附树脂吸附率和解吸率为考察指标,对5种大孔吸附树脂(AB-8、D101、HPD600、ZCX-11和S-8)进行筛选,通过动态吸附-解吸单因素试验和正交试验优化大孔吸附树脂最佳纯化工艺,并测定大孔吸附树脂纯化前后苦荞多肽的超氧化物歧化酶活力、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐和1,1-二苯基-2-苦基肼清除能力。【结果】从5种大孔吸附树脂中筛选出S-8为最佳大孔吸附树脂,其吸附率和解吸率分别为71.25%、89.00%;在上样质量浓度为5 mg/mL,洗脱流速为1.5 mL/min,乙醇体积分数为55%的条件下,苦荞多肽纯度由粗提液的22.18%提高到70.00%;纯化后苦荞多肽超氧化物歧化酶酶活力显著增加,从原来的26.20 U/mL升高到40.37 U/mL,对2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐和1,1-二苯基-2-苦基肼抑制率显著升高,分别是粗提液的2倍与1.4倍。【结论】优化后的工艺条件可使苦荞多肽的纯度显著提高,且纯化后苦荞多肽抗氧化活性显著增强。     

乌贼墨多肽体外抗氧化活性研究

[目的]研究乌贼墨多肽体外抗氧化活性。[方法]采用分光光度法测定多肽对2,2’-连氮基-双-（3-乙基苯并二氢噻唑林-6-磺酸）二铵盐（ABTS）、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、羟自由基（·OH）的清除能力和还原能力,利用琼脂糖凝胶电泳检测多肽对羟自由基诱导的DNA损伤的保护作甩。[结果]乌贼墨多肽具有明显清除ABTS自由基（半数有效浓度EC。为3．45mg／ml）、·DPPH自由基（EG。为4．34mg／m1）和羟自由基（E‰为3．30mg／ml）的能力;当乌贼墨多肽的浓度达到5．00mg／ml时,还原力达到0．387。[结论]乌贼墨多肽具有较好的抗氧化活性。     

鹰嘴豆抗氧化多肽与其它抗氧化剂的协同作用

[研究目的]以还原能力和超氧阴离子抑制率为抗氧化指标,确定鹰嘴豆抗氧化多肽与其它抗氧化剂(VE、VC及BHT)的协同抗氧化作用.[方法]以酶解法制备鹰嘴豆抗氧化多肽,用邻苯三酚自氧化法测定鹰嘴豆抗氧化多肽及其它抗氧化剂清除超氧阴离子自由基的协同效应.[结果]VE、VC在低浓度时与鹰嘴豆抗氧化多肽具有协同的还原能力,BHT与鹰嘴豆抗氧化多肽未表现出协同还原能力;VC、Ⅶ与鹰嘴豆抗氧化多肽未显示出显著抑制超氧阴离子的协同效应,但BHT与鹰嘴豆抗氧化多肽表现出明显的抑制超氧阴离子的协同效应;且所有的协同作用随添加量和作用时间的增加而增强.[结论]VE和VC对鹰嘴豆抗氧化多肽的还原能力有显著的增效作用,且VC与鹰嘴豆抗氧化多肽的协同作用较VE与之更强;BHT与鹰嘴豆抗氧化多肽表现出明显的抑制超氧阴离子的协同效应.     

乌贼内脏酶解多肽的制备和抗氧化活性研究

[目的]探讨乌贼内脏酶解多肽的制备和抗氧化活性。[方法]以乌贼内脏为原料,用胰蛋白酶对其进行水解,采用单因素和正交试验方法研究酶解温度、酶解时间、加酶量和pH对水解度和抗氧化性的影响;通过检测羟自由基清除率、DPPH清除率和还原力评价不同分子量水解物多肽的抗氧化性。[结果]当酶解温度为35℃,时间为5 h,加酶量为5 000 U/g,pH为7.5时,水解度最大;当酶解温度为40℃、时间为7 h、加酶量为4 500 U/g,pH为8.0时,水解物对羟自由基清除率最大。超滤后不同分子量多肽对羟自由基的清除率为3～5 kD3 kD以下5～10 kD;DPPH清除率:3～5 kD3 kD以下5～10 kD;还原力:3 kD以下3～5 kD5～10 kD。[结论]乌贼内脏酶解多肽具有较好的抗氧化活性,不同分子量多肽的活性不同。     

大西洋鳕鱼皮多肽体外抗氧化活性研究

[目的]探讨大西洋鳕鱼皮多肽的体外抗氧化活性。[方法]选择胰蛋白酶酶解鳕鱼皮,分别以氨基氮滴定法和DPPH自由基清除率作为筛选指标,通过正交试验,筛选出酶解的最优条件;将超滤液分成5段,分别进行DPPH自由基清除率、ABTS自由基力及亚铁离子螯合能力的体外抗氧化活性。[结果]胰蛋白酶酶解大西洋鳕鱼皮的最优条件为料液比1∶1,加酶量2 500 U/g、酶解时间4 h、温度45℃、pH 9.0。当分子量小于5 k D时,DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力和Fe2+离子螯合能力最强。[结论]经胰蛋白酶酶解,获得的大西洋鳕鱼皮多肽存在较好的抗氧化活性。     

多肽及其衍生物的化学合成分析

多肽是一种氨基酸在肽键的作用下,依次连接而成的化合物质,这种化学合成技术在药物研究的过程中占据着十分重要的地位。由于这种技术形式在运行的过程中选择性强,而且在人体所形成长期的营养成分中不会出现蓄积中毒的现象,其合成物的研究可以为人们的生活提供便利性的服务,因此,多肽及其衍生物的化学合成逐渐成为人们研究的重点。     

梅花鹿茸多肽新成分的提取分离及其生物效应研究

梅花鹿二杠茸经４０％ＥｔＯＨ提取,用Ｍｅ２ＣＯ分级沉淀、离心分离,ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５～５０柱层析纯化,得梅花鹿多肽Ⅰ和Ⅱ组分。测定了Ⅰ和Ⅱ的ＵＶ、ＩＲ光谱。生物效应实验表明,组分Ⅰ和Ⅱ均具有抗炎、促生长作用。     

鹿茸多肽的生物学活性研究

采用醇沉法从新鲜马鹿茸中提取出活性多肽。该多肽为一系列分子量低于17 kD的多肽混合物,Western blotting检测到其含有胰岛素样生长因子-1(IGF-1)。Bradford法定量总多肽约为1~2 mg/g鲜重,RIA法定量IGF-1为300~400 pg/g鲜重。小鼠腹腔连续注射多肽6 d后,对其促生长、免疫调节、抗氧化、抗疲劳等生物学活性进行了研究。结果表明:小鼠体重较对照组有增加趋势(P>0.05);腹腔注射1,4,8 mg/kg鹿茸多肽组小鼠玫瑰花环成环率分别高于对照组(生理盐水)33.3%,34.2%,39.6%,差异显著(P<0.05)。注射8 mg/kg鹿茸多肽的小鼠血清溶血素OD值与对照组差异极显著(P<0.01)。实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率分别比对照组高22.1%,25.8%,26.5%,差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01),说明鹿茸多肽具有免疫调节作用,且呈剂量依赖性。注射4,8 mg/kg鹿茸多肽组老年小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活性分别升高51.1%,59.2%,血清丙二醛(MDA)含量分别下降14.9%,16.7%,与对照组差异显著(P<0.05),说明鹿茸多肽对老年小鼠有较强的抗氧化作用。小鼠负重游泳实验中,注射小鼠存活时间比对照组延长了21.67 min(P<0.05),说明鹿茸多肽具有抗疲劳作用。     

石杉碱甲提取工艺研究

系统研究了石杉碱甲的提取工艺.系用有机酸浸提、萃取、反萃取、脱色和重结晶等化学分离技术从千层塔中提取、纯化石杉碱甲.结果表明:①pH对石杉碱甲的存在形态有很大影响;②一定酸度下的液液萃取除杂效果理想;③活性炭的用量及吸附条件对除杂效果影响显著;④低温下氯仿的重结晶可得到纯度大于99%的高纯度石杉碱甲.     

巨型艾美耳球虫裂殖子的分离和纯化

[目的]为了获得纯净的巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)裂殖子.[方法]对25日龄白羽肉鸡口服接种 3×105巨型艾美耳球虫卵囊,在其感染后48～124 h取十二指肠末端到卵黄蒂后5 cm处肠段,收集裂殖子并计数,确定分离裂殖子的最佳时间;将所取肠段均分为5段,分别对裂殖子进行计数,筛选分离裂殖子的最佳肠段;通过DEAE-52纤维素柱层析对裂殖子进行纯化并分管收集,确定收集较高纯度裂殖子的最佳时间.[结果]在感染后84 h所收集的裂殖子最多;此外,从空肠中后段及空肠末端肠段中分离出较多数量的裂殖子,占总数的62％以上;通过DEAE-52纤维素柱层析获得44 mL纯度较高的裂殖子.[结论]分离巨型艾美耳球虫裂殖子的最佳时间为感染后84 h,最佳肠段为空肠后段,收集1～44 mL洗脱液能够获得纯度较高的裂殖子.     

马铃薯叶片原生质体的游离纯化

文章以马铃薯四倍体普通栽培品种Desiree、东农303和二倍体野生种S.pinnatisectum品系脱毒试管苗叶片为材料,研究了不同的酶组合、酶液浓度、酶解时间以及温度等因子对原生质体游离纯化的影响。结果表明,低温预处理有助于提高原生质体的产量;最佳酶液组合为纤维素酶1.0%+离析酶0.5%;对于四倍体栽培种较短的酶解时间(13 h)较为适宜,而野生种需要较长的酶解时间(18 h)。     

酵母菌碱性磷酸酶的分离及部分性质研究

提取酵母菌中的碱性磷酸酶,并对其性质做出分析.结果显示酶促反应最适pH值为10.3,初速度 V0=0.01367μmol/L·min,以对硝基苯磷酸二钠(pNPP)为底物测得Km=0.535mmol/L、Vm=0.01429μmol/L.较低浓度的Mg2 对酶有较强的促进作用,2mmol/L时达到641%,磷酸氢二钠对碱性磷酸酶有竞争性抑制作用.     

猪α干扰素在毕赤酵母中的高效表达和纯化

为了研制新型的猪用抗病毒制剂,开展了猪α干扰素（PoIFNα）在毕赤酵母中的表达和产物纯化研究。将PCR扩增的PoIFNα基因插入pPIC9k的SnaBⅠ和EcoRⅠ位点,构建了表达转移载体pPIC9k/PoIFNα;经酶切和测序鉴定,转移载体构建正确。pPIC9k/PoIFNα以限制性内切酶SalⅠ线性化后电转化毕赤酵母GS115菌株,经抗性筛选获得4拷贝PoIFNα基因的重组菌株GS115/PoIFNα;重组菌株经BMMY培养基诱导后上清中有目的蛋白,表达量达136 mg/L。表达产物经过SP-Sepharose 阳离子交换层析,可以得到纯度较高的rPoIFNα,纯化产物在MDBK细胞上抑制VSV的活性高达2.27×108 U/mg。     

香蕉多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白的分离与纯化

多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)能够特异性结合并抑制真菌侵染所产生的多聚半乳糖醛酸酶.本试验以健康香蕉幼苗植株为材料,通过硫酸铵沉淀、PM10膜超滤浓缩、亲和层析、离子交换层析以及凝胶层析等步骤,纯化获得一种PGIP,SDS-PAGE确定其分子质量为38.2 ku.该PGIP的活性对温度敏感,对香蕉枯萎病菌4号小种...     

大鼠胰岛的分离、纯化与评价方法改良

【目的】简化胰岛的分离纯化方法,建立完善的胰岛评价体系。【方法】采用Ⅴ型胶原酶分离出Spra-gue-Dawley大鼠胰岛,并采用改良的3层Dextran不连续密度梯度离心法纯化胰岛。纯化的胰岛通过双硫腙(Dithi-zone,DTZ)染色进行计数及纯度检测,丫啶橙(AO)-碘化丙啶(PI)双染色法确定分离细胞的存活率,体外葡萄糖刺激释放胰岛素试验检测胰岛的分泌活性。采用Adobe Photoshop程序改进了常规的胰岛计数方法,并进行胰岛标准计数。【结果】平均每只成年Sprague Dawley大鼠的胰腺,可获得(3 840±24)当量数(IEQ)纯化胰岛,纯度可达到90%,细胞平均存活率达92%。【结论】采用改良的3层Dextran不连续密度梯度离心法及基于Adobe Photoshop程序的标准计数方法,可分别用于大鼠胰岛分离纯化和计数。     

类芽孢杆菌胞外胆固醇氧化酶的分离纯化

[目的]探讨类芽孢杆菌产生胞外胆固醇氧化酶(COD)的分离、纯化方法,为其生产和应用提供技术支持.[方法]将类芽孢杆菌发酵液通过旋转蒸发浓缩、蔗糖透析浓缩、DEAE离子交换柱层析和凝胶层析,纯化目的蛋白,然后测定获得酶的基本酶学性质.[结果]类芽孢杆菌发酵液经DEAE离子交换柱层析和SephadexG-75凝胶柱层析后,纯化所得的COD比活力达6.83U/mg,酶活力回收为35.6%,纯化倍数为13.4倍.纯化酶经SDS-PAGE显示为均一条带,分子量约58 kDa.将纯化的COD作用于不同浓度胆固醇,采用Lineweaver Burk作图法,测得其Km=3.3×10-5 mol/L.薄层层析结果显示,产物为胆甾-4-烯-3-酮,说明纯化所得酶是COD.[结论]纯化获得电泳纯类的芽孢杆菌胞外COD,其与底物亲和力较强,具有潜在的应用研究价值.     

一个厌氧甲烷氧化菌菌株的分离、纯化和特征研究

首次报道浙江象山市郊青紫泥水稻田土壤中一个能厌氧氧化甲烷的细菌菌株AMOB3的分离、纯化及其部分生理生化特性.该菌株革蓝氏染色阴性,细胞极小,仅(0.3～0.5) μm×(0.7～0.8) μm,在厌氧滚管琼脂上可形成细小透明直径约为0.2 mm的菌落.能较好地利用甲烷和甲醇,但仅微弱利用甲酸.电镜显微表明细胞具有周生于胞质的与好氧性甲烷氧化菌相同的囊膜结构.试管培养时该菌株的甲烷氧化活性为2.4 nmol/mL.Cu2+、Mo6+、Mn4+等离子可提高该菌株氧化甲烷的能力,但Cr3+具有抑制作用.经将菌株AMOB3的特性与现有报道的好氧性甲烷氧化菌比较,认为这是一个不同于现有甲烷氧化菌的新种.     

山药蛋白酶解液的分离纯化

以山药(Dioscorea opposite Thumb.)为原料,选取碱性蛋白酶酶解山药蛋白粗提物制备山药蛋白酶解液。分别采用纤维素DE-52阴离子交换层析和Sephadex G-50凝胶层析,对酶解制备的山药蛋白酶解液进行分离纯化。结果表明:经过纤维素DE-52阴离子交换层析,得到4个吸收峰,收集每个峰组分,其单位质量的还原能力分别为峰2(P2)>峰1(P1)>峰3(P3)>峰4(P4)。采用Sephadex G-50凝胶分别用蒸馏水和Tris-HCl缓冲液对P1和P2组分继续分离纯化,均能得到2个吸收峰(组分)。