波尔山羊胚胎移植奶山羊应用技术研究

1999～2000年,在成都波尔山羊种羊场进行了波尔山羊胚胎移植奶山羊应用技术研究.对12只供体用FSH减量法进行超排处理,回收胚胎257枚,平均21.4±11.1枚,其中可用胚206枚,平均17.2±8.33枚.将170枚可用胚移植给同期发情的78只雅安奶山羊受体,其中2只在妊娠2个月后流产,49只受体羊妊娠到期产下纯种波尔山羊羔88只,移植受体妊娠率65.4%(51/78),产羔受体比率62.8%(49/78),胚胎成羔率51.8%(88/170).平均每只波尔山羊供体通过胚胎移植增加纯种后代7.33只.其中RB52号波尔山羊获16枚胚胎,移植给8只奶山羊(双胚),全部妊娠,产下13只纯种波尔山羊,胚胎成羔率达81.3%.结果表明,波尔山羊胚胎移植奶山羊能获得较高的妊娠率和胚胎成羔率,已可从研究阶段发展到产业化应用.     

无角道塞特羊胚胎移植技术研究

(1)超排处理无角道塞特绵羊163只,育成羊(76只)只均回收胚胎5.53枚,可用胚3.91枚,经产母羊(87只)只均回收胚胎7.55枚,可用胚6.34枚。经产羊平均回收胚胎总数高于育成羊(P<0.05)。春季和秋季之间超排效果差异不明显。重复超排羊和非重复超排羊之间平均回收胚胎总数和可用胚胎数差异均不显著(P>0.05)。(2)共处理受体876只,春季和秋季受体的同期发情率分别为56.37%和89.02%,发情受体利用率分别为84.67%和88.77%。(3)移植受体545只,妊娠318只,产羔396只,受体移植妊娠率为58.35%,移植胚胎成羔率为57.47%,在移植受体中,小尾寒羊的妊娠率最高为61.2%,同羊和内蒙细毛羊分别为54.62%和56.58%,受体品种之间移植妊娠率差异不显著(P>0.05)。受体黄体数对移植妊娠率及胚胎成羔率有一定的影响。胚胎的发育阶段对移植妊娠率也有影响,移植囊胚受体妊娠率最高为64.76%,明显高于早期桑椹胚移植妊娠率42.86%(P<0.05)。胚胎成羔率从桑椹胚到囊胚差异不显著(P>0.05)。     

不同品种受体羊对胚胎移植后代生长发育的影响

分别在4个试验场测定波尔山羊自然繁殖后代158只,测定雅安奶山羊、成都麻羊、简阳大耳羊和南江黄羊胚胎移植受体所产后代分别为51、53、42和47只。结果表明：从波尔山羊羔羊的初生重看,受体为雅安奶山羊、成都麻羊、简阳大耳羊和南江黄羊胚胎移植后代与自然繁殖后代在同性别、同单胎或双胎特性上没有显著差异;从波尔山羊羔羊生长发育看,受体为雅安奶山羊、成都麻羊、简阳大耳羊和南江黄羊胚胎移植后代与自然繁殖后代在同性别、同单胎或双胎特性上也没有显著差异,表明波尔山羊羔羊发育特性主要受本身的遗传因素影响,借腹的受体对其没有影响。胚胎移植后代与自然繁殖后代健康状况没有显著差异。     

山羊鲜胚及冻胚移植

经超排处理获黑山羊3日龄新鲜胚眙12枚,分别移植到同期发情的6只白色受体羊,其中2只妊娠,产羔3只,受体妊娠率为33.3‰(2/6),鲜胚移植成功率25.0%(3/12)。7日龄山羊冷冻胚胎35枚,分别移植到同期发情的18只浏阳黑山羊和白色马头山羊受体母羊,其中7只妊娠,受体妊娠率为38.89%(7/18)。产活羔10只,流产1只,冻胚移植成功率31.43%(11/35)。     

供体母羊及与配公羊个体对波尔山羊胚胎移植效率的影响

对135只波尔山羊供体母羊进行超排处理,回收卵总数2504枚,平均18.55±7.63枚,其中可用胚2182枚,平均16.16±7.46枚.将2127枚鲜胚移植给1182只受体,妊娠率为63.03%(745/1182),移植胚胎成羔率为52.1%(1108/2127).试验结果表明,供体各个体之间所获得的胚胎移植成羔率存在着显著差异(P＜0.05),胚胎成羔率大于80%的供体平均每只获胚胎移植羔羊14.8±4.27只,胚胎成羔率小于20%的供体平均每只获胚胎移植羔羊1.83±1.17只,其中个体获得羔羊最多的为21只(21/26).有9.63%的供体胚胎移植成羔率大于80%,有4.44%的供体胚胎移植成羔率小于20%.14只公羊配种的135只供体获得的胚胎可用率同样存在着显著差异(P＜0.05).     

肉羊胚胎移植成活的影响因素实例分析

【目的】胚胎移植技术是获得优秀种质资源的一种重要应用技术,研究影响胚胎存活和妊娠的因素。【方法】回顾性调查分析影响胚胎移植后成活的胚胎和受体因素。【结果】三种胚胎运输方式的妊娠率极显著低于就近移植的妊娠率(P0.01);胚胎卵裂期与囊胚期移植妊娠率差异不显著(P0.05),但以2细胞移植的妊娠率最低;鲜胚与冻胚的妊娠率差异不显著(P0.05),2枚胚胎的妊娠率高于1枚胚胎的妊娠率,胚胎妊娠率随着胚胎质量而下降;囊胚与受体同期性差-24 h,妊娠率差异不显著(P0.05);放牧与舍饲的受体羊在胚胎妊娠率方面没有显著差异性(P0.05)。【结论】胚胎和受体因素对胚胎发生成功妊娠具有重要的影响。     

杜泊羊冷冻胚胎移植的影响因素

为进一步提高杜泊羊的冻胚移植成功率,于春秋两季同期处理湖羊和小尾寒羊受体共997只(次),同期发情782只(次),发情率达78.4%,其中湖羊春秋两季平均发情率为84.6%,显著高于小尾寒羊(73.9%)(P＜0.01),秋季两品种平均发情率83.3%,显著高于春季75.8%(P＜0.01);对431只发情受体羊进行移植,总妊娠率为58.5%(252/431),产羔率为58.0%(250/431).其中湖羊为受体的春秋两季平均妊娠率62.5%,高于小尾寒羊(54.7%);秋季两品种的平均妊娠率为64.8%,显著高于春季(52.5%).囊胚移植后的平均妊娠率为61.5%,显著高于桑椹胚(41.5%),其中A级囊胚为67.4%,显著高于B级囊胚(P＜0.05)和所有桑椹胚(P＜0.01);B级囊胚显著高于B级桑椹胚(P＜0.05),B级囊胚与A级桑椹胚间及A、B级桑椹胚间均无显著差异;C级囊胚和桑椹胚均未见妊娠.此外,受体羊卵巢黄体发育状况及移植技术熟练程度对妊娠率也有显著影响.     

波尔山羊批量胚胎移植莎能奶山羊

采用阴道栓 FSH超数排卵,经产供体波尔山羊22只,在放栓后第9～11天,连续4d递减量肌肉注射FSH。22只供体羊发情与纯种波尔山羊种公羊配种后第7天,手术回收输卵管中早期发育胚胎再经手术移入同期发情的受体奶山羊输卵管内妊娠产仔。结果表明:1获得373枚早期胚胎,其中A级胚胎占31.1%(85/273),B级胚胎占49.5%(135/273),异常胚胎占19.4%(53/273)。2将167枚7日龄可用胚胎(A级和B级)移植147只受体羊输卵管内,移植后35d,妊娠98只,妊娠率为67%(98/147),83只羊足月产羔为89只,产羔率为85%(89/98),20只受体移植了两枚胚胎,只有6只产双羔。3羔羊出生重平均为3.7±0.54kg。每只供体羊平均产羔4.05只。胚胎移植所得羔羊的初生重与自然繁殖波尔羔羊无显著差异(P>0.05)。试验证明,山羊胚胎移植计划可使良种群体繁殖率提高3～5倍,优秀个体繁殖力提高6～8倍,从而加快纯种山羊的繁殖。     

奶牛胚胎分割移植试验研究

用简单方法直接分割7～8日龄新鲜胚胎(一分为二),裸半胚成对移植给66头受体,90d 妊检,移植妊娠率为56.1%(37/66)。除6头流产和尚有5头待产外,已有26头受体产犊35头,其中有9对同卵双胎,双胎率为34.6%(9/26),半胚产犊率为29.2%(35/110)。对影响成对半胚移植妊娠率和半胚产犊率的因素如胚胎质量、胚胎在体外停留时间、胚胎发育阶段、黄体状况、受体牛品种等进行了较系统的研究。此外对冷冻胚胎进行了分割试验,移植妊娠率为45.5%(5/11),产3头犊牛。对快速冷冻和常规冷冻胚胎分割后的移植妊娠率进行了比较,分别为25.0%(1/4)和57.4%(4/7)。     

影响杜泊绵羊胚胎移植效果的因素分析

系统探讨了在生产条件下杜泊绵羊移植胚胎数量、胚胎发育阶段、受体重复利用、卵巢黄体数量、季节和移植方法对胚胎移植效果的影响.结果表明:移植2枚或3枚胚胎的妊娠率(63.79%、61.90%)显著高于移植1枚胚胎的妊娠率(50.30%)(P<0.05);2～8细胞胚胎的移植妊娠率与桑椹胚/囊胚移植妊娠率差异不显著(P>0.05);受体重复利用对妊娠率无显著影响(P>0.05);受体单侧卵巢上有3个及以上黄体数妊娠率最高,但与单侧卵巢上有1个和2个黄体的妊娠率无显著性差异(P>0.05);在秋季进行胚胎移植,妊娠率为59.77%,高于冬季移植的妊娠率(52.94%),但差异不显著(P>0.05);常规手术法与腹腔内窥镜法移植相比,妊娠率无显著差异(P>0.05).     

羊胚胎生产和胚胎移植

综述了绵羊和山羊胚胎生产和胚胎移植各项技术的研究进展，包括超数排卵、体内受精与发育；成熟卵泡卵母细胞与腔前卵泡卵母细胞的体外成熟、体外受精与发育；利用极体生产胚胎以及利用胚胎生产胚胎的胚胎分割与细胞核移植克隆技术；胚胎的回收、检胚与胚胎分级，以及供体与受体的同期发情处理和胚胎移植技术。     

犬的胚胎移植初步试验

试验摸索了犬输卵管和子宫角胚胎移植的方法和技术,为犬转基因和克隆研究提供技术参考,同时了解输卵管胚胎移植和子宫角胚胎移植对移植成功率的差异.通过对同期发情同步配种的供体北京犬进行输卵管和子宫角冲卵、受体北京犬输卵管和子宫角鲜胚移植,结果在8只受体犬中有1只犬于手术后成功怀孕并顺利产下1头胚胎移植雄性幼犬.子宫角回收法的胚胎回收率稍低于输卵管回收法.     

兔胚胎移植影响因素研究

【目的】探讨分析兔胚胎移植的影响因素,为提高兔胚胎移植效率及生产转基因兔奠定基础。【方法】采集获得的交配胚胎经体外培养后,按单只受体移植胚胎数、受体类型（经产母兔与青年母兔）、受体同期发情方式随机分组,对比观察胚胎移植后受体母兔的妊娠情况。【结果】单只受体兔每次移植10～20枚和20～30枚胚胎获得的妊娠率分别为23．1％和20．0％,二者差异不显著（P〉0．05）;采用经产母兔为受体可获得显著高于青年母兔的妊娠率（27．8％vs13．3％,P〈0．05）;以自然同期发情为受体母兔胚胎移植后获得的妊娠率显著高于诱导同期发情的受体母兔（30．7％vs10．0％,P〈0．05）。【结论】兔胚胎移植时选择自然发情的经产母兔作为受体能获得较好的胚胎移植效果,单只受体移植胚胎数以控制在10-30枚为宜。     

波尔山羊胚胎移植研究报告

该研究受体羊（杂交奶山羊）１８４只,供体波尔母羊７６只。通过同期发情处理,７６只羊共排卵７２６个,其中受精卵３８７,占据排卵总数的５３．３１％。在受精卵中,有效胚３５３个,其中一级胚３１２个,二组胚４１个。共移植１８４只受体羊,基本正常产羔的受体母羊１０５只,占移植受体羊总数的５７．０７％。在受体母羊中,９７只移植２个胚胎,有５５只产双羔,占９７只受体羊的５６．７％。成活羔羊１５０只,其中公羊７８只,母羊７２只。公母羊平均出生重３．０５千克,最大出生重５．５千克。     

波尔山羊胚胎冷冻和移植试验

用含1．5M乙二醇,0．1M蔗糖、20％NCS(V／V)的PBS液,或含1．5M乙二醇,20％NCS的PBS为冷冻保护液,将42枚A级胚胎(致密桑葚胚16枚,早期囊胚26枚)一并移入冷冻保护液,并进行快速冷冻,在降温至-36℃时将胚胎投入液氮保存。解冻时,胚胎细管先在室温(20～22℃)空气中停留15s后进入水浴快速解冻,解冻后一步除去保护剂,移入含20％NCS的PBS液中保存,手术移植入受体子宫角内。结果表明,解冻后形态质量完好的A级冻胚达88,1％(37／42),移植受体妊娠率达42,9％,说明本试验采用的胚胎冷冻-解冻程序,能有效地进行波尔山羊致密桑葚胚和囊胚的冷冻保存。     

Synchronized estrus disposal of recipient on sheep embryo transfer

以小尾寒羊、同羊、内蒙细毛羊作受体,根据季节设计不同的同期发情处理方法,繁殖季节设计三个组,(Ⅰ)栓 PG组,(Ⅱ)栓组,(Ⅲ)PG组。非繁殖季节设计四个组(Ⅰ)栓 PG组,(Ⅱ)栓 PMSG组,(Ⅲ)栓组,(Ⅳ)PG PMSG组。结果表明:(1)在繁殖季节,同一处理品种间同期发情率及受体利用率之间差异不显著。但非繁殖季节,同羊和内蒙细毛羊同期发情率和受体利用率很低。选用小尾寒羊作受体比较理想。(2)单独使用阴道海绵栓或与其它激素配合诱导母羊发情效果优于用PG组或PG PMSG组,在非繁殖季节使用孕激素诱导母羊发情可以得到比较高的同期发情率。(3)季节对受体羊同期发情效果和受体利用率有明显影响。特别是对发情季节表现明显的品种。(4)繁殖季节和非繁殖季节母羊撤栓后集中发情时间大约相差12h。     

波尔山羊早期胚胎玻璃化冷冻保存和移植的研究

在25℃室温下，采用不同浓度的乙二醇作为玻璃化冷冻液的主要成分，对波尔山羊早期胚进行一步法冷冻（-196℃），同时采用常规冷冻保存作为对照组。结果显示，一步法冷冻囊胚发育率为68．75％（11／16），移植受体妊娠率为54．55％（6／11），产羔率为36．36％（4／11）。说明了此实验所采用的冷冻保护剂及玻璃化冷冻方法，能有效地对山羊早期胚胎进行冷冻保存。     

四川省波尔山羊胚胎移植操作规程的研究

根据四川省的生产条件,进行了波尔山羊胚胎移植操作规程的研究。从波尔山羊胚胎移植中准备工作及实施方案的制定开始,对供、受体羊选择与饲养管理,供体羊超排技术与胚胎回收、鉴定技术,受体羊同期发情与胚胎手术移植技术,以及供、受体羊术后管理等系列化操作规程进行了研究与确定。     

影响绵羊、山羊超数排卵及胚胎移植效果因素分析

在生产条件下，对3个优良品种的127只绵羊（道塞特47只、萨福克49只、杜泊31只）和111只波尔山羊供体使用不同国别生产的促卵泡素（FSH）实施超数排卵处理，然后对1231只小尾寒羊和奶山羊受体实施不同方法的胚胎移植，旨在筛选出切合于生产实际成本低、效率高的超数排卵和胚胎移植方案。实验结果表明，使用新西兰产FSH对波尔山羊超数排卵后平均获得可用胚胎14枚／只，显著高于澳大利亚产FSH效果（平均7．59枚／只）（P〈0．05）．而中国科学院产FSH的超排效果（平均10．38枚／只）与新西兰产无显著性差异（P〉0．05）；进一步采用中国科学院产和新西兰产FSH分别对道塞特、萨福克和杜泊3个品种绵羊实施超数排卵结果，获得平均可用胚胎数均无显著性差异（P〉0．05）；使用腹腔内窥镜法和常规手术法胚胎移植结果表明，移植妊娠率分别为57．44％和60．20％．2种方法间无显著性差异（P〉0．05）。由于中国科学院产FSH价格便宜，而腹腔内窥镜法胚胎移植可大大缩短操作时间，两者结合可降低成本、提高效率，适宜羊胚胎移植产业化应用。     

杜泊绵羊和波尔山羊冷冻胚胎引进移植扩大试验

从南非引进杜泊绵羊(218枚)和波尔山羊(104枚)冷冻胚胎,以本地小尾寒羊(165只)和奶山羊(114只)为受体,经同期发情处理,分别向受体羊子宫角内植入1～2枚解冻的可用胚胎。结果表明:绵羊受胎率为36.7%,其中单胚受胎率为23.3%,双胚受胎率为46.8%。山羊受胎率为31.3%,其中单胚受胎率为25.0%,双胚受胎率为45.8%。胚胎移植绵羊和山羊双胚的受胎率均高于单胚(P<0.05)。而且与自然繁殖的羔羊相比,1～3月龄体重和平均日增重基本一致(P>0.05),羔羊的生长发育正常,经济效益显著。