不同产区加工的茯砖茶中“金花”菌的分离及分子鉴定

为探明不同地域茯砖茶中"金花"菌的异同,采用陕西、湖南和浙江3个产区同等级的黑毛茶为原料,分别在本地及其他2个产区同一时期加工成9个茯砖茶样,运用纯培养技术,观察茶样中"金花"菌在不同培养基上的形态特征,同时结合现代分子生物学技术,对茶样中的"金花"菌进行了鉴定。结果表明:从9个茯砖茶样品中,分离获得了13株"金花"菌,在不同培养基中的形态学特征与散囊菌属的特征非常相近,且菌株G9、G10的形态特征与其他"金花"菌明显不同;通过对特异性区段ITS和β–tubulin序列扩增、测序,经同源序列搜索比对及构建的系统发育树进一步分析,并参照Hubka最新的曲霉属分类系统,最终将不同地域(陕、湘、浙)加工的茯砖茶中的优势菌鉴定为冠突曲霉,异名冠突散囊菌;浙江产区加工的茯砖茶中分离获得的非优势"金花"菌G9和G10鉴定为谢瓦曲霉。     

茯砖茶对肠道4种常住微生物的影响

用致泻剂番泻叶建立小鼠腹泻模型,研究茯砖茶水提物高、中、低剂量(分别为210、105、52.5 mg/mL对肠道大肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌、乳杆菌数量及肠道状况的影响。结果显示：高、中剂量茯砖茶能促进肠道有益微生物的生长,抑制有害微生物增殖,对抗番泻叶所致的肠道微生物紊乱,其中对乳杆菌增殖的影响最为显著,预防组高、中、低剂量可促进乳杆菌繁殖,试验第7天比试验开始前的数量对数值分别增加3.309 0、3.237 3、2.690 5,且呈剂量依懒关系;治疗组高剂量可促进乳杆菌的增殖,试验第11天的数量对数值比试验第7天的增加3.541 9,比阳性药小檗碱促进乳杆菌增殖的效果(对数值增加1.466 9)更好;中、低剂量可减少肠球菌数量,试验第11天的数量对数值比第7天的分别减少0.423 6、0.231 5,而阳性药小檗碱反而使肠球菌数量增加,高、中、低剂量组试验第11天的大肠杆菌数量的对数值与试验第7天的相比分别增加0.471 0、0.335 3、0.510 9,与阳性药组(0.556 2)差异较小;灌服茶汤的小鼠的肠腔状况与正常空白对照小鼠的无异样。     

“湘益”牌茯砖茶真菌的分离及鉴定研究

采用平板梯度稀释法对金湘益特制礼品茯砖茶中真菌进行了分离纯化和计数,获得2301、2401、3302、4304、5402等5种类型真菌,其中5402为优势菌,每克茶样中含量达4.98×106个,其余为非优势菌,数目相对较少。运用18S rDNA片段序列进行同源比对,结合形态学鉴定方法对其进行鉴定,表明菌株2301为产紫青霉(Penicillium purpurogenum)、2401为产黄青霉(P.chrysogenum)、3302为青霉(Peni-cillium sp.)、4304为酱油曲霉(Aspergillus sojae)、5402为蜡叶散囊菌(Eurotium herbariorum)。     

HPLC法测定茯砖茶中芦丁含量

建立了茯砖茶中主要黄酮类物质芦丁的高效液相色谱测定方法。采用Hypersil ODS色谱柱C18色谱柱,流动相:A乙腈;B磷酸溶液(pH=2.5),梯度洗脱,流速1.0mL/min,检测波长258nm,样量为20μL,柱温30℃。对照品芦丁的回归方程Y=16007.7ρB(μg/mL)-11115.2,R=0.9993,线性范围为10.000～80.000mg/L,平均回收率99.0100%,RSD为2.0700%。测得茯砖茶中芦丁含量为0.1435%,RSD为3.4900%。该方法简便、快速、准确,可用于茯砖茶中芦丁含量的测定。     

四川康砖茶渥堆过程中优势真菌的分离鉴定

[目的]为康砖茶的品质提高和工艺改进提供依据。[方法]对四川康砖茶渥堆过程中优势真菌进行分离纯化,并对其进行形态及ITS序列鉴定。[结果]依据菌株形态学特征及ITS序列同源性,发现四川康砖茶渥堆过程中存在优势真菌有2种霉菌和2种酵母,即黑曲霉(Aspergillus niger)、青霉(Penicillium sp.)以及汉逊德巴利酵母(Debaryomyces Hansenii)、假丝酵母(Candida sp.)。[结论]研究可为康砖茶渥堆功效及品质的提高提供参考依据。     

不同年份茯砖茶的挥发性成分差异

以9份茯砖茶(分别于1975、1985、1991、1994、1996、1999、2004、2009和2012年生产)为试材,采用同时蒸馏萃取法(SDE),结合气相色谱–质谱联用技术(GC–MS)分别对其挥发性成分进行检测,并进行主成分分析和聚类分析。检测结果表明:9份茯砖茶中共鉴定出挥发性成分105种,其中共有成分62种,不同年份茶样中挥发性成分种类分别为93、91、88、78、77、72、88、87和83种,以1975年生产的茯砖茶样品中的挥发性化合物数量最多,总含量最高(62.202%);挥发性成分以酸、醛、酮类为主;棕榈酸、壬酸、植酮、邻苯二甲酸二乙酯、正己醛是多个样品的主要化合物。主成分分析及聚类分析结果显示,9份样品茯砖茶归为5组,1975年和2012年的茶样各成1组;1985和1991年的茶样为1组,1996、1999和1994年的茶样为1组;2004和2009年的茶样为1组。     

茯砖茶金花发酵剂的制备工艺优化

[目的]对茯砖茶金花发酵剂的制备工艺进行优化,为茯砖茶的工艺改良和品质提升提供参考.[方法]以发酵剂产孢量为指标,通过单因素试验和响应面试验优化人工接种金花菌发酵剂配方.[结果]茯砖茶金花发酵剂的最佳制备工艺为以10 g黑毛茶为基质,添加含水量31.96％、蔗糖含量2.98％、接种量321.92 μL,28℃条件下,该...     

陕西茯砖茶“金花”显奇葩——述论陕西茯砖茶历史文化与品质的形成

我国黑茶类中,陕西泾阳茯砖茶是最具特色的茶饮品,色泽黑褐,内质香气纯正,滋味醇厚,汤色红黄明亮,叶底乌黑尚匀。而且在茯砖茶内,出现天然黄色益菌(俗称“金花”),颗粒繁茂,干嗅有黄花清香,深受西北地区牧民和广大消费者欢迎。     

不同浸提方法茯砖茶多酚和咖啡碱的HPLC测定

[目的]研究不同的提取方法对茯砖茶中的多酚类物质和咖啡碱含量的影响,为建立最佳的茯砖茶浸提方法提供参考。[方法]采用高效液相色谱(HPLC)法测定了5种不同的提取方法对茯砖茶中的8种多酚,包括没食子酸(GA)、没食子儿茶素(GC)、表没食子儿茶素(EGC)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)、表儿茶素(EC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)及儿茶素没食子酸酯(CG)和咖啡碱(CAF)的含量的影响。[结果]8种多酚类物质在0.000 6～0.300 0 mg/ml范围内具有良好的线性关系,且70%甲醇70℃水浴浸提法较蒸馏水100℃水浴和70℃水浴更能有效地提取茯砖茶的多酚组分;而咖啡碱的含量,蒸馏水超声提取法的测定值最高。[结论]对于多酚总量,70%甲醇浸提法较优,而对于咖啡碱类较稳定的化合物,蒸馏水超声浸提更具有优势。     

石河子垦区盐碱地土壤嗜(耐)盐菌的分离与鉴定

为了开发利用石河子垦区盐碱地的嗜(耐)盐菌资源,从该区盐碱地土样及池底泥样中分离筛选嗜(耐)盐菌,并从形态特征、生理生化特性、16S rRNA序列3个方面进行分析鉴定。结果表明,从土样及泥样中共分离获得6株嗜(耐)盐菌。其中,SYJ-7是球菌,为革兰氏阳性;其余5株是杆菌,均为革兰氏阴性。在耐盐、碱试验中,6株菌均在Na Cl质量浓度≤200 g/L、p H值≤9条件下生长,6株菌均为中度嗜盐菌。SYJ-9耐盐、碱程度最高,可耐受的最高Na Cl质量浓度为280 g/L,最高p H值为13。在功能酶筛选试验中,SYJ-3、SYJ-5、SYJ-7、SYJ-9产淀粉酶,SYJ-7产纤维素酶,SYJ-9产蛋白酶。16S rRNA序列分析表明,SYJ-1、SYJ-2、SYJ-3、SYJ-5属于玛纳斯海洋芽孢杆菌(Oceanobacillus manasiensis),SYJ-7属于玫瑰色盐水球菌(Salinicoccus roseus),SYJ-9属于盐芽孢杆菌属(Halobacillus)。其中,SYJ-9可能为新种。     

泾阳茯茶生产环境中冠突散囊菌多样性检测

为阐明陕西省泾阳县茯茶生产环境中冠突散囊菌是否为同一克隆系,分别从泾阳县2个代表不同生产方式的茯茶厂的不同生产工段采集原料茶叶、茯茶半成品及成品、生产环境涂抹拭子、空气沉降样和土壤等样品,采用平板划线和涂布法分离得到26株疑似冠突散囊菌,并对其进行分类鉴定。结果表明:基于菌落形态特征鉴定后,初步确定26株菌为"冠突散囊菌"。对26株"冠突散囊菌"26SrDNA D1/D2区及其内转录间隔区(Internal Transcribed Spacer;ITS)序列进行PCR扩增、序列测定并提交基因库比对,使用Mega 6.0软件构建进化树分析鉴定后,确认得到的菌株均为冠突散囊菌,且菌株的26SrDNA D1/D2区及ITS序列均具有高度的同源性。研究初步阐明存在于陕西省泾阳县茯茶生产环境的冠突散囊菌相似度极高,为同一克隆系。     

不同产地黑毛茶加工的茯砖茶香气成分和品质分析

以同一级别、同期制作的陕西、湖南和浙江黑毛茶为原料,依据湖南茯砖茶加工工艺制作成茯砖茶样,采用同时蒸馏萃取(SDE)结合气-质联用(GC-MS)分析其香气成分,并对3个茯砖茶样进行了感官审评比较。结果表明:分别从陕西、湖南和浙江黑毛茶压制的茯砖茶中分别检测出47、56、51种香气成分,均以醇类、醛类和酮类物质为主;陕西黑毛茶加工的茯砖茶中具高火香的2-戊基-呋喃、四甲基吡嗪等杂环类化合物含量最高(0.71%);湖南黑毛茶加工的茯砖茶中对茯砖茶"菌花香"有重要贡献的不饱和萜烯醇、烯醛类化合物含量最高,分别为30.69%、13.98%;浙江黑毛茶加工的茯砖茶中具花香、果香的萜烯酮及芳环酮类含量最高(23.45%)。感官审评结果表明:3种茶样的香气均纯正,陕西黑毛茶加工的茯砖茶中略带高火香,湖南黑毛茶加工的茯砖茶"菌花香"显,浙江黑毛茶加工的茯砖茶略带青气;滋味均表现为基本纯正;汤色均呈橙黄色。     

豆制品(茶干)中致腐菌的分离鉴定

以未灭菌真空包装的新鲜茶干为试验材料,培养使其腐败并分离纯化得到4株主要致腐菌。对其形态和菌落特征、生理生化特性进行了系统的研究,并进行了分类鉴定。初步判断曲为芽孢杆菌科芽孢杆菌属,df2为微球菌科葡萄球菌属,df3为链球菌科链球菌属,硝为瘤胃球菌科瘤胃球菌属。对主要致腐菌df1的16SrDNA与已知序列进行同源性比较,鉴定（1n为芽孢杆菌属苏云金芽孢杆菌,并命名为苏云金芽孢杆菌zhou-1。     

污染的丝绸织物中霉菌的分离与鉴定

对污染的丝绸织物中的霉菌进行分离纯化,分离出三种霉菌,通过菌落形态观察和显微形态观察,分别鉴定为藻菌纲的根霉属（Rhizopus Ehrenberg）、子囊菌纲的拟青霉属（Penicilliopsis Solms—Laubach）和半知菌类的黑曲霉组（A．niger）。     

云南泡酸菜中乳杆菌的分离与鉴定

 乳杆菌在泡酸菜发酵中起重要作用.本文研究从青菜不同发酵阶段的14份泡酸菜样品中,分离培养出52个乳杆菌培养物,除5株未鉴定到种以外,鉴定为17种共46株乳杆菌,其中6种尚未见到由泡酸菜分离鉴定的报道.本研究的目的是调查泡酸菜中乳杆菌的种类,并从其中选择优良菌种,以便将来应用.     

不同来源的5株新城疫病毒的分离·鉴定与基因型分析

[目的]分离鉴定不同来源的5株新城疫病毒（NDV）,并对其基因型进行分析。[方法]从江苏和广西发病孔雀、鸡、鹅群分离到5株NDV。参照文献合成1对引物P1和P2,用于扩增基质蛋白基因（M）1161nt至融合蛋白基因（F）889nt之间长约970nt的片段。用TrizolRNA试剂盒抽提5株NDV基因组,再按照Promega说明书,用上游引物P1合成F基因cDNA,合成的cDNA作为聚合酶链式反应（PCR）的扩增模板,用PCR反应扩增F基因目的片段。将所得产物进行序列测定,获得这5株NDVF基因5′端约890nt序列。采用DNAMAN软件对F基因47～420nt间的片段进行序列分析,并推导出相应的氨基酸序列。在此基础上,从GenBank中选取32个参考毒株与这5个分离株进行遗传变异分析,并绘制系统发育进化树。[结果]同源性分析比较表明,5株NDV分离株之间的差异性很小,它们之间的同源性为95.00%～97.00%,其中2株广西分离株之间的同源性为97.07%,3株鹅源分离株之间的同源性为96.43%。所有毒株F蛋白裂解区氨基酸序列均为112R-R-Q-K-R-F117,符合强毒株裂解区位点特征。这5株NDV分离株均属于基因Ⅶ型和Ⅶd亚型。[结论]近几年流行的NDV的主导基因型为基因Ⅶ型,且来自不同宿主的毒株之间的差异性较小。     

锯缘青蟹黄水病病原菌的分离与鉴定

[目的]确定锯缘青蟹黄水病致病菌的病原。[方法]对从患黄水病的锯缘青蟹体内分离出的28株致病菌株进行培养、形态鉴定、生理生化鉴定和人工感染等试验。[结果]分离出的菌株均为弧菌科细菌,其中嗜水气单胞菌12株、辛辛那提弧菌8株、副溶血弧菌5株、温和气单胞菌3株。[结论]4种菌株均为青蟹黄水病的病原菌,其中嗜水气单胞菌为优势种群。     

鸭疫里默氏杆菌与大肠杆菌混合感染病原的分离鉴定和药敏实验

对济宁市部分县养鸭场雏鸭所发疾病进行调查,根据临床症状、病理变化及病原分离鉴定,确诊为大肠杆菌与里默氏杆菌混合感染.从部分养鸭场分离出的细菌通过形态染色特征和生化试验,得到大肠杆菌和里默氏杆菌各20株,并作药敏试验.结果表明鸭大肠杆菌多数菌株对丁胺卡那霉素、新霉素等抗生素高度敏感,鸭里默氏杆菌多数菌株对庆大霉素、丁胺卡那霉素和新霉素高度敏感.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒宁夏地区地方株的分离与鉴定

[目的]弄清宁夏地区部分猪场出现“无名高热”病因及更加有效预防、控制此类疾病的发生.[方法]通过从宁夏某发病猪场采集产生典型病变的猪肺部组织,将病料处理后分别用Marc-145、PK-15、BHK-21等传代细胞系进行病毒的分离与鉴定.[结果]只有Marc-145细胞上有典型病变,连续传代3次后病变稳定,接毒48 ～72 h后病变率达70％左右.RT-PCR及双酶切的结果表明分离培养物为猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株.通过RNA提取、RT-PCR及酶切反应,实现了对分离培养物快速、确切鉴定.[结论]用MARC-145细胞成功分离到1株PRRSV,命名为ZH-w株.