铜对Ctr1基因mRNA表达的影响

采用半定量RT-PCR法检测铜对猪传代肾细胞（PK15）中特异性铜转运蛋白Ctr1基因mRNA表达水平的影响,以β-actin为内参考,对各试验组cDNA同时进行PCR扩增。结果,猪肾PK15细胞/%1基因mRNA表达量在7.8～31.2μmoL.L-1 Cu范围内随铜添加浓度的升高减少,当铜添加浓度达到62.5μmoL.L-1时,其表达量又有所回升,呈双相反应。     

铜对猪传代肾细胞(PK15)增殖的影响

为了解铜对猪肾细胞增殖和代谢的影响,了解铜促生长机理,采用猪传代肾细胞PK15,在培养液中添加不同铜水平对PK15细胞进行体外培养,计算了PK15细胞的增殖率和3H-TdR掺人率.结果表明PK15细胞对铜刺激敏感,铜可有效促进PK15细胞增殖,铜添加组细胞增殖率和3H-TdR掺人率显著,高于对照组(p<0.05),且以培养液中添加31.2μmol·L-1Cu PKl5细胞的增殖作用最强.     

鸭发育早期骨骼肌TNNI1基因mRNA表达 及与肌纤维生长的相关性分析

为探讨慢收缩骨骼肌型Tnl(slow skeletal muscle troponin I,TNNI1)基因在鸭早期肌肉发育中的m RNA表达规律及与肌纤维发育的相关性,以地方品种高邮鸭为素材,采用实时荧光定量PCR方法,检测胚胎期21、25、27胚龄及出雏后5日龄时腿肌腓肠肌外侧头中TNNI1基因m RNA表达量,结果发现,25胚龄是TNNI1基因的表达高峰期,之后显著下调,并持续至5日龄。肌纤维类型变化则是随时间的推移,慢肌纤维比例逐渐升高,快白肌纤维比例逐渐下调;25胚龄时,慢肌纤维直径和横切面积均出现显著增高(P0.05),快白肌纤维横切面积则出现下调;之后,3种类型肌纤维直径和横切面积在各个时间点之间无显著差异(P0.05);相关性分析结果显示,TNNI1基因m RNA表达量与快红肌纤维比例呈显著负相关(P0.05),与肌纤维直径、横切面积均无显著相关性(P0.05)。提示TNNI1可能在鸭发育早期骨骼肌肌纤维类型转换中具有重要的作用。     

ERCC1、TS基因的表达水平与晚期胃癌化疗的相关性研究

目的探讨晚期胃癌组织中切除修复交叉互补基因1（ERCC1）、胸苷酸合成酶（TS）基因的表达水平与胃癌患者化疗的相关程度。方法 54例晚期胃癌患者均接受2个周期以上的FOLFOX6方案化疗,并可评估疗效。用分支DNA-液相蕊片法检测其ERCC1、TS mRNA的表达水平。结果全组化疗有效率为48.2%,ERCC1、TS单个高表达者化疗有效率分别为36.8%、28.0%,单个低表达者近期化疗有效率分别为75.0%、62.1%,两者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。ERCC1、TS均为低表达者近期化疗有效率为85.7%,均高表达者近期化疗有效率为18.8%,两者比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论胃癌组织中ERCC1、TS mRNA表达水平与应用FOLFOX6方案治疗晚期胃癌的疗效之间存在一定相关性。     

猪早期孤雌胚组蛋白乙酰化与组蛋白去乙酰化酶基因mRNA表达水平相关性研究

 【目的】 探讨猪孤雌胚早期发育过程中组蛋白H4K5乙酰化水平与组蛋白去乙酰化酶(HDAC1)基因mRNA表达水平之间的关系。【方法】收集早期猪孤雌胚(2-细胞、4-细胞、桑椹胚和囊胚),运用细胞免疫组化和激光共聚焦显微镜,通过检测这些胚胎的相对荧光强度来评判其H4K5的乙酰化水平;运用实时定量PCR的方法检测猪早期孤雌胚发育过程中HDAC1基因mRNA表达的动态变化。【结果】从2-细胞到囊胚开始,其H4K5的乙酰化均在细胞核内表达,且各阶段表达量逐步提高,至囊胚期达最高(分别为1124.77±127.78、1305.81±184.23、1795.19±318.67及2149.63±529.47),差异显著(P＜0.05);从2-细胞到囊胚,其HDAC1基因 mRNA表达逐步降低(分别为1.00±0、0.91±0.009、0.85±0.008及0.67±0.006),各阶段差异显著(P＜0.05)。【结论】从2-细胞到囊胚,其H4K5的乙酰化水平与HDAC1基因mRNA表达水平之间呈负相关。     

辛硫磷对鲫鱼肝微粒体中CYP1A活性及其表达水平的影响

[目的]研究辛硫磷暴露对鲫鱼肝微粒体中细胞色素P4501a(CYP1A)活性及其mRNA和蛋白表达的影响,明确其剂量—效应及时间—效应关系,为揭示有机磷农药对水生生物的代谢调节机制提供理论依据.[方法]设辛硫磷低、中、高浓度组(0.0825、0.165和0.33 mg/L)和丙酮(助溶剂)对照组,采用半静态染毒法染毒鲫鱼,分别于染毒24、48、72和96 h后取样并迅速剖解取出鲫鱼肝胰脏,以CYP1A相关酶7-乙氧基-3-异吩唑酮-脱乙基酶(EROD)活性反映CYP1A活性,采用实时荧光定量PCR和Western blotting分别测定鲫鱼肝微粒体中CYP1A基因mRNA及其蛋白的表达情况.[结果]辛硫磷对鲫鱼肝微粒体中CYP1A活性产生抑制作用,辛硫磷染毒24 h时CYP1A活性与辛硫磷存在明显的剂量—效应关系;各辛硫磷浓度组间均存在明显的时间—效应关系,至染毒96 h时低、中、高浓度组鲫鱼肝微粒体中CYP1A活性分别较对照组下降54.7%、30.4%和65.5%,且差异极显著(P<0.01,下同).辛硫磷染毒后,鲫鱼肝微粒体中CYP1A基因mRNA的表达整体上呈明显下调趋势,各染毒时间组间均存在较强的剂量—效应关系,除染毒48 h时CYP1A基因mRNA相对表达量与辛硫磷浓度呈正相关外,其他染毒时间点均呈负相关.辛硫磷对鲫鱼肝微粒体中CYP1A蛋白表达的影响均达极显著水平,且呈明显的剂量—效应及时间—效应关系,至染毒96 h时低、中、高浓度组的表达量分别较对照组降低74.6%、82.6%和85.7%.[结论]辛硫磷能抑制鲫鱼肝微粒体中CYP1A活性并下调CYP1A基因mRNA及其蛋白的表达;相对于辛硫磷产生的剂量—效应影响,其对CYP1A活性及其蛋白表达的时间—效应影响更明显.     

PCV-2感染对PK-15细胞IL mRNA转录水平的影响

【目的】观察猪圆环病毒2型（PCV-2）感染对猪肾传代细胞（PK-15细胞）炎性细胞因子白细胞介素（IL） mRNA转录水平的影响,探讨宿主与病毒之间的作用关系及细胞炎性反应机制。【方法】以未感染PCV-2的PK-15细胞为对照组,运用相对定量PCR技术,测定和分析PCV2感染PK15细胞后,PCV-2 DNA相对含量的变化,以及炎性细胞因子IL-6、IL-8、IL-12p35、IL-12p40、IL-13、IL-17、IL-18 mRNA转录水平在1,6,12,24,48,和72 h的变化。【结果】PCV-2感染后,PK-15细胞的IL-6、IL-13、IL-17、IL-18 的mRNA转录水平在12 h显著增加,24 h后mRNA转录水平下降;IL-8的mRNA转录水平在48 h时最高,为对照组的2.5倍,但72 h时恢复至与对照组水平相当;随着感染时间的延长,IL-12p35、IL-12p40 的mRNA转录水平显著下降。【结论】PCV-2感染后可引起PK-15细胞中IL-6、IL-8、IL-13、IL-17、IL-18等细胞因子mRNA转录水平增加,而IL-12 mRNA转录水平下降,提示PCV-2感染后引起的PK-15细胞炎性反应与其分泌的炎性细胞因子的改变有关。     

中华稻蝗几丁质合成酶1基因的mRNA表达及功能

【目的】研究中华稻蝗（Oxya chinensis（Thunberg））几丁质合成酶1（CHS1）基因的表达特性及其在生长发育过程中的作用,从而为实现基于RNAi的蝗虫有效控制提供理论依据。【方法】根据已知中华稻蝗几丁质合成酶1基因（OcCHS1）保守区域部分cDNA序列（GenBank登录号：HM214491）设计特异性表达引物,运用RT-PCR和qPCR研究时空表达特性;采用RNA干扰技术研究其生物学功能。【结果】OcCHS1在中华稻蝗各龄期都有表达,其体表为高表达,其次是气管,其它组织部位表达量低。RNA干扰试验发现,4龄第4天若虫注射OcCHS1的双链RNA（dsRNA）后,与对照组相比,OcCHS1 mRNA表达量被沉默了70.8%,稻蝗出现蜕皮时间延迟、不能完成蜕皮或腹部皱缩死亡等现象,注射dsOcCHS1组死亡率为85.2%,与对照组（7.4%）相比差异显著。【结论】几丁质合成酶1对中华稻蝗的生长发育具有重要作用,其主要参与体表和气管几丁质的合成。采用RNA干扰技术使该基因沉默后可导致中华稻蝗死亡。     

鸡生长发育早期骨骼肌IGF1R mRNA表达规律研究

以生长速度不同的花山麻鸡和清远麻鸡为试验素材,采用实时荧光定量PCR方法检测鸡9、12、16、21胚龄(E9 d、E12 d、E16 d、E21 d)和出雏后7日龄(7 d)时胸肌和腿肌中IGF1R mRNA表达变化情况,并与肌肉质量进行相关性研究。结果发现,21胚龄时,花山麻鸡和清远麻鸡胸肌质量都出现了显著降低,腿肌质量持续增长。花山麻鸡胸肌IGF1R mRNA表达呈前高后低趋势,9胚龄时表达量最高,之后显著降低并维持在较低的水平,出雏后7日龄时表达量再次下降;清远麻鸡在胸肌中的表达则呈“波浪形”,9胚龄和16胚龄表达量升高,其他日龄表达量显著降低。腿肌中,花山麻鸡IGF1R mRNA表达量在16胚龄之后显著降低;清远麻鸡腿肌IGF1R mRNA表达呈依次递减模式,各时间点之间差异显著(P<0.05)。品种间各个时间点胸肌和腿肌IGF1R mRNA表达量均呈显著差异(P<0.05)。两个品种骨骼肌IGF1R mRNA表达与胸肌、腿肌质量均呈极显著相关(P<0.01)。以上结果初步揭示了生长发育早期不同品种鸡胸肌和腿肌IGF1R基因表达发育变化趋势和品种差异,为深入研究IGF1R基因在鸡肌肉发育中的调控机理提供基础资料。     

香根草对土壤中铜离子富集作用的研究

通过测定不同污染程度的土壤中的铜离子含量,以及香根草的叶和根中铜离子的含量,研究香根草对重金属铜的富集特性。结果表明,香根草对土壤中的铜离子有富集作用,能够减少土壤中重金属铜的含量,达到改良受铜重金属污染土壤的目的。     

肉鸡肠道CDX2 mRNA表达的肠段差异性与发育性变化

选用遗传背景相同的1日龄父母代雄性Arbor Acre(AA)肉雏鸡120羽,随机分为4个重复,采用相对定量RT-PCR方法,以从肉鸡30 d肠道样品为模板,研究肉鸡肠道尾形相关同源盒基因(cadua-related type homeoboxgene)家族中CDX2 mRNA表达的组织特异性;以从肉鸡十二指肠和空肠样品为模板,研究肉鸡肠道CDX2 mBNA表达的发育性变化.结果显示:AA肉鸡十二指肠CDX2 mRNA的表达丰度高于空肠(P=0.09)、回肠(P=0.06)和结直肠(P=0.05);从肉鸡CDX2 mRNA在十二指肠及空肠中的表达具有相同的发育模式,2～30 d下降,44 d回升,58 d略微下降;在2和44 d时的表达丰度显著高于30 d(P<0.05).以上结果表明:从肉鸡肠道近端CDX2mRNA的表达丰度高于远端(P>0.05).AA肉鸡十二指肠及空肠CDX2 mRNA的表达具有相同的发育模式,表明CDX2 mKNA表达受到发育阶段的调控,且在十二指肠和空肠间具有稳定性.     

不同能量摄入对奶牛肝脏PC和PEPCK mRNA表达水平的影响

 本研究目的在于观测干奶期不同能量摄入对围产期健康奶牛肝糖异生关键酶--丙酮酸羧化酶(PC)和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）基因表达的影响。将健康围产期奶牛30头随机分为3组，于产前第28天分别饲喂奶牛标准日粮（能量摄入100%组）、标准日粮增加20%日粮（能量摄入120%组）和标准日粮减少20%日粮（能量摄入80%组），产后各组奶牛均饲喂标准的产奶日粮，至产后第56天结束。使用定量PCR方法检测分别于-28 d、-14 d、+1 d、+14 d、+28 d、+56 d采集的奶牛肝脏活体样品中PC和PEPCK mRNA表达水平。试验结果显示，PC mRNA丰度在产前28 d～产后56 d，低能组奶牛最高；PEPCK mRNA丰度在产后1 d～14 d低能组奶牛降低，产前28 d～14 d和产后28 d～56 d低能组奶牛最高。说明干奶期低能饲喂奶牛，可以增强围产期奶牛的肝糖异生能力。     

长型Leptin(瘦素)受体mRNA在大鼠卵巢中的表达和分布

以5只SD雌性大鼠为研究对象,采用原位杂交技术研究了大鼠长型Leptin受体mRNA在大鼠卵巢中的表达及其分布。结果表明,Leptin受体mRNA在大鼠卵巢中,主要分布于黄体细胞以及黄体、初级卵泡、生长卵泡和成熟卵泡周围基质颗粒细胞内。而且在黄体细胞上有黄褐色阳性颗粒密集分布;在基质等其他部位中未能检测到Leptin受体mRNA杂交信号。     

大豆异黄酮对去卵巢大鼠脾脏IL-2 mRNA表达的影响

目的探讨大豆异黄酮对去卵巢大鼠脾脏IL-2mRNA表达及分布的影响。方法在成功造模60只去卵巢青年大鼠的基础上,分别皮下注射补充大豆异黄酮高、中、低剂量(1.5、1.0、0.5mg·kg-1BW)和溶媒剂,补充至第2、4和6周时每组各宰杀5只,运用原位组织杂交方法,对大鼠脾脏IL-2mRNA的表达和分布变化进行观察。结果IL-2mRNA主要分布于被膜下方的红髓区,在白髓区的脾小结外周、边缘区、动脉周围淋巴鞘外层等处也有分布。大鼠去卵巢后脾脏中IL-2mRNA的表达强度和阳性细胞数目均显著下降,并且随着去除卵巢时间的延长更趋明显;而补充大豆异黄酮高、中、低剂量后,各组IL-2mRNA的表达强度和阳性细胞数目随着时间的延长均呈上升趋势,表现时间依赖性。在同一时间段内,随着补充大豆异黄酮剂量的升高,IL-2mRNA的表达强度和阳性细胞数目也均呈上升趋势,表现为剂量依赖性。结论大豆异黄酮对脾脏内IL-2mRNA的表达具有上调作用,并存在剂量和时间依赖性。     

Influence of Gossypol on Ultrastructure and mRNA Expression of Bax and Bcl-2 in Mice Testis

The objective was to evaluate the toxicity effect of gossypol on ultrastructure of mouse testis and the expression of Bax mRNA and Bcl-2 mRNA of sperm cells in mice.Forty-eight male mice were randomly divided into four groups:control group,L-group(30 mg·kg~(-1)·d),M-group(60 mg·kg~(-1)·d)and H-group(120 mg·kg~(-1)·d)and were orally administrated with gossypol diluted by sodium carboxymethyl cellulose(SCC)or SCC(control group)for 20 days.On the 21st day,all the mice were killed and ultrastructure changes of testis were observed by TEM.mRNA expression of Bax and Bcl-2 in testis was measured by semiquantitative RT-PCR.The results showed that the testicular ultrastructure in three treated groups was gradually damaged,according to the dosage of gossypol and cellular structure disordered and organelle degenerated,manifesting vacuolation of mitochondria,expansion of endoplasmic reticulum.mRNA expression of Bcl-2 in testis significantly increased(p0.05)in L-group and then significantly decreased(p0.05,p0.01)in M-group and H-group compared with that in the control group;mRNA expression of Bcl-2 in M-group and H-group significantly decreased(p0.05,p0.01)than that in L-group and Bcl-2 mRNA expression in H-group showed a significant decrease(p0.05)compared with that in M-group.On the other hand,mRNA expression of Bax significant increased(p0.05,p0.01)in M-group and H-group than that in the control group.The ratio of Bcl-2/Bax significantly reduced(p0.05,p0.01)in the treated group than that in the control group and was found to be an obvious dose-dependent.It demonstrated that the gossypol could induce the changes on ultrastructure of mice testis,down-regulate mRNA expression of Bcl-2 and up-regulate mRNA expression of Bax,which indicated that sperm cells were induced apoptosis.     

长型Leptin(瘦素)受体mRNA在大鼠消化道中的表达

本试验以5只SD雌性大鼠为研究对象,采用原位杂交技术研究了大鼠消化道长型Leptin(瘦素)受体mRNA的表达及其分布.结果表明,长型Leptin受体mRNA在大鼠胃和十二指肠的粘膜及粘膜下层组织中广泛表达,从而证明了在大鼠消化道存在长型Leptin受体.     

半定量RT-PCR法检测SPRN基因在小鼠各组织中的mRNA表达

[目的]研究SPRN基因在不同组织中的表达水平和机制。[方法]选择3种不同品系的小鼠为试验材料,利用半定量RT-PCR方法,测定不同品系小鼠各组织中SPRN基因的mRNA表达水平,并对其循环次数进行研究。[结果]SPRN基因主要在脑组织中表达,在肺脏和胃中表达量较低,而在淋巴结和脾脏中仅有微量的表达;半定量RT-PCR体系的最佳扩增循环数为23。[结论]成功地建立了检测SPRN基因mRNA表达的半定量RT-PCR方法,该方法具有简便、快速、准确和精密度高等优点。     

槲寄生碱对人肝癌细胞株SMMC-7721 bcl-2mRNA表达的影响

为研究槲寄生碱对人肝癌细胞株SMMC-7721对bcl-2mRNA表达的影响。采用半定量RT-PCR法测定bcl-2mRNA表达变化。结果表明,RT-PCR检测SMMC-7721细胞中bc1-2、mRNA表达的相对强度,发现bc1-2mRNA的表达强度降低(P0.05)。说明中药槲寄生碱抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖作用与降低bcl-2mRNA表达水平有关。