犬卵巢卵母细胞体外成熟的研究

从屠宰母犬卵巢获取的卵母细胞,用含有FSH和LH的TCM—199培养基培养24～48h后,卵丘卵母细胞复合体(COC)表现扩展,生发泡(GV)破裂(GThD),且COC的扩展率和GVBD率随着培养时间的延长而逐渐升高.超微结构观察,卵母细胞体外成熟培养后,其胞质内线粒体、皮质颗粒等迁移到皮质区;高尔基复合体减少或消失,颗粒细胞和卵母细胞间的间隙连接消失.     

犬卵母细胞体外成熟的影响因素

采集发情期和间情期犬卵巢,回收大腔（直径大于１ｍｍ）卵泡和不可见卵泡的卵母细胞,在４种成熟液（ＴＣＭ１９９＋２０％ＦＣＳ,ＴＣＭ１９９＋２０％ＦＣＳ＋１０ＩＵ／ｍＬＦＳＨ,ＴＣＭ１９９＋２０％ＥＤＳ和ＴＣＭ１９９＋２０％ＥＤＳ＋１０ＩＵ／ｍＬＦＳＨ）中成熟后进行了受精试验。结果：（１）发情期大于２ｍｍ和１～２ｍｍ的大腔卵泡卵母细胞的体外成熟率（４２．５％,３２．５％）显著高于间情期卵母细胞（２０．４％）,但发情犬不可见卵泡卵母细胞的体外成熟率（２８．９％）与间情期卵母细胞差异不显著;（２）在成熟液中添加促性腺激素,能有效地提高卵母细胞成熟率,不可见卵泡的卵母细胞对促性腺激素的依赖性（３０．０％比７．８％）大于大腔卵泡的卵母细胞（４２．５％比２９．０％）;（３）卵丘扩散与卵母细胞成熟存在相关性;（４）ＥＤＳ可诱导卵丘扩散,但不能有效提高卵母细胞的成熟率;（５）发情期卵巢上的大腔卵泡和不可见卵泡的卵母细胞以及间情期卵巢不可见卵泡的卵母细胞体外培养后,与体外获能的精子进行体外受精,其卵裂率分别为１６．０％（４／２５）,０％（０／４０）和２．５％（１／４０）。     

犬卵母细胞体外成熟及其体外受精研究进展

犬科动物胚胎对于改进犬科珍贵物种及保护濒危犬种十分重要,因此对犬科动物体外受精(IVF)以及辅助生殖(ART)的研究逐渐变得必要.通过体外受精和核移植已经成功获得能够发育的犬科动物胚胎,克隆的犬胚胎移植到受体母犬能成功产仔,但是这一技术的效率仍然很低.主要原因是犬科动物胚胎在体外发育能力很低.犬卵母细胞早期发育和其他动物不同,犬卵巢排出的卵母细胞处于生发泡(GV)期,在输卵管中恢复减数分裂.犬卵母细胞核难以观测并且不容易确定排卵时间,所以很难确定精子入卵的确切时间,并且多精受精的情况时常发生.回顾犬卵母细胞体外成熟(IVM)和体外受精取得的进展,对于提高其胚胎生产效率很有必要.     

犬卵母细胞体外成熟的研究进展

阐述了影响犬卵母细胞体外成熟的各种因素,总结概括了目前新的培养方法,并对国内的研究现状及前景作了思考,以期为研究犬卵母细胞体外成熟研究提供参考。     

犬卵母细胞体外成熟培养液组成成分的研究进展

胚胎移植技术已广泛涉及各种哺乳动物,未成熟卵母细胞的体外成熟培养已成为辅助生殖技术的研究热点。因此,如何获得一个稳定的具有较高成功率的体外成熟培养系统是迫切需要解决的问题,犬由于其特殊的生理等方面的特点,卵成熟率不是很高。现就犬卵母细胞的体外成熟培养液的成分,是否需加激素、蛋白因子、生长因子等物质的研究进展作一综述。     

胰岛素对犬卵母细胞体外成熟的影响

研究不同浓度胰岛素及不同培养时间对犬卵母细胞体外成熟率的影响,为改善犬卵母细胞体外培养体系提供参考,采用切割法收集卵巢表面卵丘—卵母细胞复合体(cumulus oocyte complexes, COCs),在含有0.6%葡萄糖的TCM199中添加不同浓度的胰岛素（0、3、6、9 IU/mL）,38.5 ℃、5% CO₂培养箱内成熟培养,观察卵丘扩散程度,剥离卵丘细胞获得裸卵后,室温下固定15 min;Hoechst 33342染色,压片,荧光显微镜下观察核形态,用SPSS 14.0软件统计试验数据。不同浓度胰岛素培养48 h后,各组卵丘细胞扩散效果都不明显;卵母细胞核成熟期没有达到减数分裂中期（MⅡ）,但是6 IU/mL胰岛素组生发泡破裂期（GVBD）比率（35.88%±14.63%）显著高于对照组（11.25%±9.75%）;6 IU/mL胰岛素组延长培养时间至72和96 h后,MⅠ-MⅡ期卵母细胞成熟率分别为13.33%±1.5%、20.8%±1.9%。以上结果表明,犬体外成熟培养基中添加胰岛素既没有提高犬卵母细胞核成熟到MⅡ期,也没有改善犬卵母细胞卵丘扩散效果。但是,在6 IU/mL浓度下延长培养时间,相对增加了成熟率。     

哺乳动物卵母细胞的体外成熟

哺乳动物卵母细胞的体外成熟刘红林（南京农业大学动物科技学院，２１００９５）范必勤（江苏省农科院牧医所）１引言哺乳动物卵母细胞移离卵泡环境，在体外能够不依赖激素自发成熟。卵母细胞的成熟过程至少需要经过周围卵丘细胞、卵母细胞核以及核外细胞质等方面的变化。...     

牛卵母细胞体外成熟

卵母细胞体外成熟培养研究主要集中在提高体外成熟卵母细胞支持胚胎发育的能力上。本文主要从成熟机理、卵母细胞的来源、卵母细胞的成熟培养环境及培养时间等方面进行了综述,介绍了目前卵母细胞体外成熟培养的进展情况。     

绵羊卵母细胞体外成熟的研究

研究了FSH／LH浓度、年龄和采卵季节对绵羊卵母细胞体外成熟的影响。结果表明：①FSH／LH能促进绵羊卵母细胞体外成熟，适宜的添加浓度很重妻。本实验条件下，添加量以10μg／ml为宜。②成年绵羊卵母细胞成熟率高于性成熟前绵羊，但无显著差异。③发情季节绵羊卵母细胞较乏情季节易成熟。     

Lipid Droplet Analysis Using In Vitro Bovine Oocytes and Embryos

The aim of this study was to quantify the content of lipid droplets in bovine oocytes and embryos from Bos indicus (Bi), Bos taurus (Bt) and Bos indicus × Bos taurus (Bi × Bt). Oocytes were aspirated post‐mortem and subjected to in vitro maturation, in vitro fertilization and in vitro development; the medium employed at each stage (TCM‐199, TALP, SOF) was supplemented with (i) serum replacement (SR), (ii) foetal calf serum (FCS) or (iii) oestrous cow serum (ECS). The structure and distribution of the lipid droplets were established using electron microscopy, but were quantified using an optical microscope on semi‐fine toluidine blue‐stained sections. The highest percentage of embryos corresponded to those produced with FCS and ECS, which differed from embryos generated with SR (p < 0.05). The highest percentage of morulae and the lowest percentage of blastocysts were obtained with the SR supplement (p < 0.05). The oocytes cultured in FCS demonstrated a higher number of lipid droplets compared to those cultured in SR and ECS (p < 0.05). Less accumulation of lipids was observed in embryos supplemented with SR. The lowest and highest numbers of lipid droplets in oocytes corresponded to the Bi and Bt strain, respectively. The lowest amount of lipid droplets in embryos was observed in Bi (p < 0.05). In conclusion, supplementation of the in vitro development culture medium (synthetic oviduct fluid) with a synthetic substitute serum produced similar results in terms of embryo development compared to those obtained with FCS, but a decreased degree of lipid droplet accumulation was observed in the in vitro‐cultured embryos.     

人源促卵泡素对猪卵母细胞体外成熟的影响

促卵泡素(FSH)一直在动物繁殖、体外培养及人类临床上广泛应用,但是无论是人源促卵泡素还是重组促卵泡素的效用、成分及活性都是不同的,由于这个原因,促卵泡素在实践中的应用一直没有一个规范的标准.试验着重研究了纯化于绝经后妇女尿液中的促卵泡素(hFSH)对猪卵母细胞体外成熟的影响,分别对猪体外成熟的卵母细胞进行地衣红染色和皮质颗粒的染色,来检测hFSH对卵母细胞的核及胞质成熟的影响,并检测了体外成熟猪卵丘细胞DNA凋亡的情况.     

生殖激素对哺乳动物卵母细胞体外成熟的影响

生殖激素是卵母细胞成熟培养液中必不可少的成分,它对卵母细胞的完全成熟至关重要。本文综述了其化学特性和对卵母细胞成 熟培养的影响,并对其作用机理进行了简单阐述。     

RFRP-3对猪卵母细胞体外成熟的影响

旨在研究RFRP-3对猪卵母细胞体外成熟的影响。本研究采用从屠宰场收集健康母猪的卵巢中挑取的GV期卵母细胞,随机分为3组,在培养基中分别添加0、10^-6和10^-8mol·L^-1 RFRP-3培养猪卵母细胞44 h后统计各组卵母细胞的成熟率;在后续试验中将收集到的卵母细胞随机分为2组,在培养基中分别添加0和10^-8 mol·L^-1 RFRP-3培养猪卵母细胞44 h,观察猪卵母细胞的卵丘扩展情况并计算各组的卵丘扩展指数和各组卵母细胞的成熟率;利用qRT-PCR检测卵丘扩展因子(PTGS2、HAS2、PTX3)、卵母细胞分泌因子(GDF9、BMP15)和周期蛋白相关基因(CCNB1和CDK1)的表达变化;利用ELISA试剂盒检测MPF和cAMP的含量;采用放射免疫法检测孕酮和雌激素的浓度,每组卵母细胞量不少于100枚,每个试验重复3次。结果表明,与对照组相比,添加10^-8mol·L^-1 RFRP-3培养猪卵母细胞可极显著降低卵母细胞的成熟率(P<0.01);通过显微镜观察并计算卵丘扩展指数发现,试验组中卵丘扩展无明显变化(P>0.05),但卵丘扩展因子(PTGS2、HAS2、PTX3)的表达极显著下降(P<0.01);RFRP-3可以极显著降低猪卵母细胞MPF的含量(P<0.01),对cAMP的含量无显著影响(P>0.05);添加RFRP-3可促进GDF9(P<0.01)和BMP15(P<0.05)的表达,抑制CCNB1(P<0.05)和CDK1(P<0.05)的表达;同时试验组培养基中孕酮、雌激素的浓度也极显著下降(P<0.01)。综上,RFRP-3通过调控猪卵母细胞成熟相关因子和卵丘扩展因子的表达以及类固醇激素的分泌,从而抑制卵母细胞的体外成熟。本研究为阐明RFRP-3对哺乳动物卵母细胞的调控作用奠定理论基础。     

不同因素对猪卵母细胞体外成熟培养的影响

本试验旨在探讨不同外源激素组合的添加、胰岛素—转铁蛋白—亚硒酸钠(ITS)的添加、不同培养皿、石蜡油的添加对卵母细胞体外成熟培养(IVM)的影响。结果显示:①孕马血清促性腺激素+人绒毛膜促性腺激素+促卵泡素(PMSG+HCG+FSH)组高于促卵泡素+促黄体素(FSH+LH)组和尿促性腺激素(hMG)组,相互之间差异显著(80.1%、68.3%、53.3%,P<0.05);②添加1% ITS到猪卵母细胞培养液中对卵母细胞成熟率无显著提高(P>0.05),但显著提高了孤雌激活后孤雌胚胎的卵裂率和囊胚率(63.3%、55.1%,18.7%、12.1%,P<0.05);③凹槽皿组猪卵母细胞成熟率显著高于四孔板和30 mm塑料皿组(73.3%、68.0%、68.3%,P<0.05);④石蜡油的添加对卵丘细胞扩展和卵母细胞体外成熟率均有显著提高(84.8%、69.9%,P<0.05)。结果表明培养液中添加PMSG+HCG+FSH和ITS及选用凹槽皿、成熟培养液上覆石蜡油可提高猪卵母细胞IVM效果。     

间隙连接对牛卵母细胞体外成熟的影响

该试验通过对牛卵母细胞不同形式的处理,讨论细胞间隙连接对于其体外成熟的影响作用.在最适于卵母细胞体外成熟的浓度(1.2 IU/mL)条件下,发现卵母--卵丘细胞之间的间隙连接对卵母细胞的成熟有着直接的影响,并且是体外成熟的一个有利条件.     

FSH对绵羊卵母细胞体外核成熟的影响

为了探讨FSH对绵羊卵母细胞核成熟的影响,本试验将绵羊卵母细胞体外成熟24 h,并在成熟过程中的4个不同时间段内添加FSH,统计各个时间段卵母细胞的生发泡破裂(germinal vesicle break down, GVBD)及第一极体排出情况。结果显示：①在体外成熟培养的前4 h或前8 h添加FSH,经体外成熟的卵母细胞其生发泡破裂率与不添加FSH组无显著差异;②在体外成熟的4~24 h或8~24 h添加FSH,其第一极体排出率与不添加FSH组有极显著差异。说明,在本试验条件下,FSH对绵羊卵母细胞体外成熟具有显著的促进作用,是在减数分裂的恢复后到减数分裂完成之间的某一阶段起的促进作用。     

不同培养时间对家猫卵母细胞核成熟的影响

为了研究不同培养时间对家猫卵母细胞核成熟的影响,以M 199为基础培养液,并添加FSH、LH,分别培养24、28、32、36和43 h后,观察第一极体排出,然后用地衣红染色,将排出第一极体和染色体处于MⅡ期作为卵母细胞成熟的参考判断标志。结果表明,家猫卵母细胞随着培养时间的延长其成熟率也随之增加。成熟培养43 h,极体排出率极显著高于其他各组（P<0.01）,达到66.89%;而24 h组极体排出率为31.51%,极显著低于其他各组（P<0.01）;28、32、36 h各组间差异不显著（P>0.05）。经地衣红染色后,到达MⅡ期的卵母细胞比例与极体排出率趋势相同。43 h组退化率极显著高于其他各组（P<0.01）,达到22.30%。因此,综合考虑成熟率和退化率两项指标,28～36 h为家猫卵母细胞体外核成熟的最佳培养时间。