桑悬浮细胞原生质体培养的研究

采用继代培养三个月后的桑子叶悬浮细胞为材料,进行了原生质体的分离和培养。桑悬浮细胞在纤维素酶、果胶酶、半纤维素酶的混合溶液中,酶解获得产量高、活力强的原生质体。原生质体在K8p(附加6—BA、NAA、2,4—D、LH)液体培养基中,再生细胞经多次分裂,得到肉眼可见的小愈伤组织。再通过增殖继代培养,获得浅黄色、具有明显颗粒结构的愈伤组织,转至各种激素含量的MSB固体培养基中,尚未获得绿苗分化。     

BHK21悬浮细胞在2～8 ℃下短期保存的研究

用密度为5×106个/mL左右的BHK21悬浮细胞为实验原料,在2～8℃条件下静置保存,分别在24、48、72、96 h取样并计数,绘制细胞密度和细胞活力的曲线图,并进行统计学分析.在整个试验培养阶段细胞保持良好状态,趋势线呈平行直线,细胞密度和细胞活力均没有下降.说明BHK21悬浮细胞在2～8℃条件下,在96 h内短期保存时,细胞未出现活力降低或死亡的现象.     

细胞悬浮培养技术生产疫苗的研究进展

传统的疫苗生产方法受很多因素的限制,为了适应扩大化工业生产的需要,细胞悬浮培养技术已经在工业生产上日益成熟,本文就此项技术中关于悬浮培养的细胞性能、细胞悬浮培养驯化的方法、悬浮培养细胞培养基的优化、生物反应器种类等要素进行概述,并对此技术在疫苗生产中的应用作了展望。     

犬瘟热病毒Vero细胞悬浮产业化培养工艺研究

为克服犬瘟热疫苗现有生产工艺的缺陷,试验采用10 g/L Cytodex-1型微载体,按每个微载体15～20个细胞的细胞接种量接种至微载体培养Vero细胞,细胞培养液为10%NBS的DMEM培养液。结果显示,当细胞密度达到8×106CFU/mL时接种犬瘟热病毒,最佳培养时间30 h,接毒剂量按照MOI为0.1接种犬瘟热病毒液;当细胞病变达到50%时,病毒感染细胞时间为30 h,收获毒液。按照上述摸索生产工艺参数,收获的犬瘟热病毒液的病毒液滴度每病毒含量≥108.5TCID50/0.1 mL。将收获的病毒液冻存及下游相关的灭活处理,作为制备犬瘟热疫苗的抗原。研究表明,试验大幅度提升犬瘟热病毒培养量,效价批间差异性均一,实现了产业化反应器悬浮培养代替细胞工厂的技术路线。     

桑树春季新梢生长规律及其增产途径

本文通过对影响春蚕新梢生长诸因子的分析,新梢生长特点的调查。初步揭示了春期新梢生长的规律,探明了新梢在春叶产量形成中的决定作用。确立了丰产桑园春季新梢生长标准,提出增产新梢叶的栽培管理措施。     

一株MDBK细胞的低血清悬浮驯化研究

研究选取一株背景清晰、纯净的MDBK贴壁细胞,通过直接驯化和逐级降低血清相结合的办法,获得了一株可以在低血清培养基中全悬浮培养的MDBK细胞。该细胞在含0.5%胎牛血清的培养基中悬浮培养48 h后的细胞密度稳定在5.0×10⁶/mL以上,培养72 h后细胞密度最高可达1.16×10⁷/mL,且细胞形态良好,活力在93%以上,具有良好的传代稳定性。应用筛选获得的悬浮培养MDBK细胞株分别接种伪狂犬病毒和传染性牛鼻气管炎病毒后,检测病毒敏感性。细胞在24 h均发生了皱缩,72 h大部分死亡。悬浮培养的MDBK细胞对传染性牛鼻气管炎病毒的滴度在24 h达到最大值107.6TCID50/mL,对伪狂犬病毒的滴度在48 h达到最大值107.6 TCID50/mL,说明虽然细胞的培养方式发生了改变,但并没有影响上述两种病毒在该细胞上的增殖特性。对MDBK细胞的全悬浮驯化研究可为相关病毒类疫苗规模化生产及工艺的升级改进提供细胞学基础资料。     

全悬浮培养LMH细胞制备FAdV-4灭活疫苗的研究

通过对LMH细胞进行驯化,获得一株可全悬浮培养的LMH细胞,命名为LMH-S。此细胞可适应无血清、高密度悬浮培养,以初始细胞密度0.5×10⁶/mL～1×10⁶/mL接种,细胞密度最高达6×10⁶/mL。研究确定生物反应器悬浮培养LMH-S细胞制备FAdV-4抗原的最优参数为：接毒时细胞密度2×10⁶/mL～3×10⁶/mL、接毒量0.1MOI～1MOI、接毒后48 h～72 h收毒,所获抗原病毒含量不低于10^9.25TCID₅₀/mL。试验鸡分别免疫0.02 mL、0.05 mL、0.1 mL、0.3 mL疫苗,攻毒保护率分别为9/10、10/10、10/10、10/10,表明疫苗有效性良好。本试验成功建立了LMH全悬浮培养细胞株,确定了FAdV-4抗原的生物反应器悬浮培养工艺,验证了悬浮培养抗原的免疫原性,为高效FAdV-4灭活疫苗的研制奠定了基础。     

桑树愈伤组织诱导及悬浮细胞系的建立

以桑品种育-711的叶片、芽尖、叶柄、茎段为材料,探讨不同外植体、不同培养基和激素配比等因素对桑树愈伤组织的诱导、继代培养以及悬浮细胞培养的影响,并对桑树悬浮细胞的生长曲线进行监测,初步建立桑树细胞悬浮培养体系。试验结果表明:叶片是诱导桑树愈伤组织的理想外植体,愈伤组织最佳诱导条件为MS培养基中添加1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L2,4-D+0.5 mg/L NAA的激素组合,在此培养条件下的诱导率达90%以上;继代培养最优条件为MS培养基中添加1.0 mg/L6-BA+0.5 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L NAA,在此培养条件下继代,愈伤组织生长旺盛,存活率达到100%,培养12 d进入对数生长期,愈伤组织的鲜质量在此期间增加6倍;悬浮细胞在MS液体培养基中添加1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L NAA的培养条件下,细胞增殖较快,生长曲线呈"S"型,活细胞数量在悬浮培养第16天时达到峰值。以桑树叶片作为外植体诱导愈伤组织及初步建立的悬浮细胞系,有助于进一步研发桑树组织培养物次生代谢产物的生产技术。     

PK15细胞全悬浮摇瓶培养工艺初探

PK15细胞是一种被广泛应用于兽用疫苗生产的细胞,然而现今生物制品行业快速发展,传统贴壁培养PK15细胞已经不能满足生产需要.目前通过全悬浮培养技术来培养细胞、病毒已经是发展趋势,但是由于生产用细胞多数为贴壁细胞,难以实现悬浮培养,所以,目前该项技术在疫苗生产上还未广泛应用,技术也还未成熟.故本文探讨PK15细胞在无血...     

低聚壳聚糖对桑树种子萌发和桑树生理特性影响的研究

用低聚壳聚糖溶液处理桑树种子和对桑树进行叶面喷施 ,结果表明 :0 5 %的低聚壳聚糖溶液处理桑树种子 ,可以提高桑树种子的发芽率、发芽指数和幼苗生长势 ,桑树喷施 0 5 %的低聚壳聚糖溶液可提高叶片的叶绿素含量 ,增强光合能力 ,降低硝酸还原酶和过氧化氢酶的活性 ,叶片的可溶性糖、粗蛋白的质量分数分别提高 8 7%、8 2 % ,叶片的单位面积质量也高于对照 ;用处理过的桑叶喂蚕 ,可以提高产茧量和茧质。     

盐胁迫对桑种子发芽及幼苗生理生化特性的影响

桑树在盐碱地栽培 ,受盐害最为严重的时期是种子萌发及幼苗期。采用不同浓度的NaCl溶液胁迫桑种子 ,研究高盐逆境条件下对种子发芽、幼苗生长及生理效应的影响。结果表明 :随NaCl浓度增大 ,桑种子的萌发率、发芽率逐渐下降 ,发芽滞后且发芽后的幼苗生长被抑制 ,当NaCl的浓度达到 5 0mmol/L时 ,子叶长出率、幼苗鲜质量明显下降 ,在 15 0mmol/L浓度下种子无法长出子叶 ;各处理区叶片的含水率、叶绿素的含量也随NaCl的浓度升高而下降 ;脯氨酸含量则随NaCl浓度增大呈先升高后降低的趋势。     

桑树生长与合理采桑模拟研究

经过调查证实全年桑树的自然生长符合LOGISTIC生长方式 ,据此可把桑树鲜物质生长过程分为快速增长期、产量形成期和生长平衡期。为获得最大产量 ,提出尽早进行夏伐和疏芽定条 ,减少夏蚕饲养量 ,平衡秋蚕饲养比例 ,适当提前饲养秋蚕 ,并根据不同生长阶段桑树补偿能力的大小 ,确定病虫防治指标。     

黄花苜蓿游离细胞培养的初步研究

以黄花苜蓿(Medicago hispida)下胚轴和子叶来源的愈伤组织为材料,进行悬浮细胞振荡培养,经200目尼龙网过滤后得到游离的单细胞。这些细胞作浅层培养、可获得小细胞团。实验还观察到悬浮细胞存在多种形态,对其成因及繁殖方式作了简要讨论。     

桑树资源综合利用研究进展

我国桑树资源丰富,全国各地都有栽培．本文对桑树的果、叶、根、枝在医药、食品、化工、畜牧业等方面综合利用进行了综述,为桑树资源将来进一步开发利用提供了科学依据。     

桑树ITS序列测定及特点的初步分析

以蒙桑 (M .mongolicaSchneid)为试验材料 ,采用PCR产物直接测序法测定了其核糖体基因转录内间隔区 (InternalTranscribedSpacer ,IST)的全序列 ,分析了桑树该序列的特点 ,指出了该序列在桑树分子系统学及分子进化研究中潜在的重要作用     

桑苗质量标准主要指标研究

通过为期２年的调查与分析,提出了以桑苗根基直径作为衡量桑苗质量的主要指标。     

密植桑园桑树营养特性的研究简报

通过对密植桑园不同密度下不同品种桑叶营养含量分析表明,氮和可溶性糖的含量随密度提高而提高,而磷与钾的吸收则相反,同一密度下不同品种桑叶养分也有差异。     

冬春季不同淹涝胁迫强度对桑苗和桑树生长的影响

以农桑14号、强桑1号桑苗和2年生盆栽桑为试验材料,研究在冬春季以不同程度淹涝胁迫不同时间后对其长势的影响;同时对比调查了22个桑品种经冬春季淹水处理后与历年春叶产量的变化。结果表明：①桑苗完全淹入水中至开叶初期,不能发芽而死亡;全淹至开叶前结束,随着淹水时间延长,发芽生长明显迟缓。②苗根淹水和苗干一半淹水,最长经过9...     

桑树遗传转化的受体细胞及其再生

以近15年来国内外桑树遗传转化研究为主线,结合植物基因工程的研究动态,从分子生物学和细胞组织学方面阐述了桑树受体细胞与根癌农杆菌的相互作用和TDNA在感染细胞中的转移过程。用植物形态发生的基本原理分析了叶盘转化细胞再生的主要方式,并对植物细胞的感受态、农杆菌完成贴壁反应的先决条件、TDNA的穿壁通道进行了阐述。