鸡减蛋综合征病毒的分离和初步鉴定

河北省秦皇岛旧１９９８年１０月至１９９９年３月间３０多个鸡场约２７万只鸡发生一起以产蛋率下降３０％以上,同时伴有软壳蛋、退色蛋的疾病,病程１．５￣２个月。采取输卵管、脾脏和肛拭粪样接种于鸭胚,分离到具有血凝性的病毒,用抗ＥＤＳ－７６Ｖ阳性血清与分离毒做ＨＩ试验,结果分离毒的血凝性可被抗ＥＤＳ－７６Ｖ的阳性血清所抑制。因此初步认为秦皇岛市也有ＥＤＳ－７６的发生。     

鸡减蛋综合征病毒的分离与鉴定

从产蛋率下降和出现软壳蛋、薄壳蛋、破壳蛋、无壳蛋等畸形蛋的养鸡厂采集病料,接种于9日龄的鸭胚尿囊腔后分离到1株病毒,经过流行病学调查、细菌分离试验、血凝试验、血凝抑制试验和分离病毒对健康蛋鸡的致病性研究,将分离病毒鉴定为鸡减蛋综合征病毒.     

产蛋下降综合征病毒的分离鉴定

对我省几个暴发产蛋下降综合征的鸡群进行了流行病学调查。用９日龄的鸭胚从病鸡的输卵管和子宫内分泌到两株ＥＤＳ－７６病毒。该病毒对鸡红细胞的凝集作用可被ＥＤＳ－７６的标准阳性血清所抑制。用分离毒接种１８９日龄产蛋母鸡６只，６／６发病。接毒后５天，可从血中测出ＨＩ抗体，１５天时达最高峰，２５天后开始渐渐下降。卵黄ＨＩ抗体与血液ＨＩ抗体呈正相关，只是卵黄ＨＩ抗体价比血液的高一个滴度。接毒鸡所产的蛋，ＥＤＳ     

一株鸡产蛋下降综合征病毒的分离鉴定

利用鸭胚从黑龙江省某自然感染鸡产蛋下降综合征鸡场的病输卵管、子宫中分离到一株病毒。经血凝和血凝抑制试验、ＨＩ交叉试验，电镜观察证实，我们所分离的病原体为产蛋下降综合征病毒。     

鸡减蛋综合征的研究Ⅱ.鸡减蛋综合征病原的分离和鉴定

用某鸡场发生减蛋综合征病鸡的输卵管组织接种１０－１２日龄鸭胚盲传，分离到一株ＥＤＳ－７６·ＥＸＫ２病毒。自第３代起至第１０代，均从鸭胚尿囊液中检出血凝素，凝集鸡红细胞的特性可被ＥＤＳ－７６阳性血清所抑制。鸭胚分离毒不能凝集免红细胞。应用第３和第４代鸭胚尿囊液混合毒经口腔、鼻腔和眼途径人工感染健康产蛋鸡，成功地复制了ＥＤＳ－７６。攻毒后３５天内１１只试验鸡的总产蛋数无明显变化，产蛋率为８５～９４％，     

鸡减蛋综合征病毒广西分离株的鉴定及灭活油佐剂疫苗的研究

通过电镜观察、理化特性、致病性、血凝性及血清型鉴定，证实从广西鸡减蛋综合征（egg drop syndromes,EDS）抗体阳性鸡群所产软壳蛋蛋清中分离的毒株GEV属鸡减蛋综合征病毒（EDSV），与EDSV国际标准毒株AV127属同一血清型。用GEV株研制的灭活油佐剂疫苗，每只鸡肌肉注射0．5mL、1．0mL均能产生高效价EDS抗体，且持续至少5个月以上。     

鸡产蛋下降综合征病毒的分离及初步鉴定

利用鸭胚从吉林省某鸡场表现产蛋量下降,产畸形蛋,血凝抑制试验诊断为产蛋下降综合征(EDS_(76))的病鸡输卵管、子宫中分离到两株病毒(CH—1和CH—2),经血凝试验、血凝抑制试验及电镜观察,证实为鸡产蛋下降综合征病毒.     

张家口地区减蛋综合征病毒分离鉴定

2006年河北张家口市郊区某个体养鸡户的900只210日龄的海兰褐蛋鸡,出现突然性产蛋下降,产蛋率由93%降至71%,蛋壳颜色消退,并出现大量破壳蛋、软壳蛋和少量畸形蛋,破壳蛋和软壳蛋的比例约占13%,但没有其它明显的临床症状.     

鸡减蛋综合症病毒不同提纯方法的比较

试验采用50%(NH4)2SO4、60%(NH4)2SO4、10%聚乙二醇初提病毒,然后用DEAE52和Sephadex G-200层析。最后得出60%(NH4)2SO4、10%聚乙二醇沉淀,Sephadex G-200层析可得到纯度较高的病毒样本。     

减蛋综合征病毒全基因组DNA文库的构建及物理图谱分析

Ｅ Ｄ Ｓ Ｖ Ａ Ａ２ 株纯化 Ｄ Ｎ Ａ 经 Ｈｉｎｄ Ⅲ、 ＰｓｔⅠ和 Ｓｐｈ Ⅰ水解后, 分别提取 Ｄ Ｎ Ａ 片段并克隆至ｐ Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ｋ Ｓ（ ＋ ） 和ｐ Ｇ Ｅ Ｍ３ Ｚｆ （ ＋ ） 载体, 构建了 Ｅ Ｄ Ｓ Ｖ 全基因文库。根据 Ｅ Ｄ Ｓ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 片段和基因组 Ｄ Ｎ Ａ 电泳迁移率计算, Ｅ Ｄ Ｓ Ｖ 基因组大小为３２９ｋｂ , 通过克隆片段酶谱鉴定, 杂交建立了 Ｅ Ｄ Ｓ Ｖ 限制性内切酶 Ｈｉｎｄ Ⅲ、 Ｐｓｔ Ⅰ和 Ｓｐｈ Ⅰ的物理图谱。     

致麻鸭产蛋下降的副粘病毒的分离和鉴定

从浙江省某麻鸭养殖基地产蛋锐减的病鸭生殖器官分离到1株致产蛋下降、不致鸭死亡的病毒株(YH99V)。该病毒易感蛋鸭，经SPF鸡胚传至第9代时致病性突然增强，第11代出现对鸡红细胞的血凝特性，通常在42～80h致死SPF鸡胚，EF15EID50为10^1.8。经磷钨酸负染电镜观察，YH99V粒子呈现圆形、杆状形、葫芦状形等多形态，直径70～400nm不等，病毒外表有囊膜，囊膜外层有排列整齐的纤突。病毒粒子和包涵体位于细胞浆内。病毒抵抗力由弱到强依次为：0．2%甲醛、24h-56℃、45min→紫外线、1h→乙醚≈氯仿≈37℃、16h—pH9→pH5→1％Try。对人眼结膜易感，鸭眼结膜不易感。接种传代细胞BHK-21、IBRS-2均能引起细胞病变。YH99V株与同样引起鸭产蛋下降的AIV、鸭源EDSV无抗原相关性，而能被禽副粘病毒Ⅰ型阳性血清中和。根据试验结果，初步将YH99V判定为鸭副粘病毒。     

鸡减蛋综合征病毒GC2毒株稳定性测定

将ＥＤＳ７６ＧＣ２毒株接种于１０～１１日龄鸭胚尿囊腔内,连续传至第３０代,分别测定不同代次胚液病毒ＨＡ、ＥＩＤ５０及其免疫原性。结果,该病毒不同代次胚液ＨＡ和ＥＩＤ５０分别在１∶２１５和１０５．０／０．１ｍＬ以上,免疫原性良好,对鸭胚致死性随传代次数增加而减弱,说明该病毒稳定性良好。于－２０℃和－５０℃可分别保存６和１２个月以上。     

产蛋下降综合征病毒纤突蛋白Knob-S区原核表达及其活性分析

通过PCR扩增得到产蛋下降综合征病毒(EDSV)纤突蛋白Knob-S区基因,将其克隆至原核表达载体pET-32(a)的多克隆位点构建了原核表达载体pET-32(a)-Knob-S,将其转化至感受态细胞BL21中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,结果获得了42ku的融合蛋白,用纯化的融合蛋白免疫鸡制备抗血清,通过血凝试验、Western blot和血凝抑制试验分析,表明该融合蛋白不能凝集鸡红细胞,无血凝活性;但可与EDSV阳性血清发生特异反应,并诱导机体产生特异性抗体,具有很好的抗原性。     

鸡减蛋综合征病毒的血清学关系研究

利用血凝抑制试验和病毒中和试验对ＥＤＳ地方分离毒ＨＳ－１和国际标准毒ＡＶ－１２７之间的血清学关系进行了研究。分离病毒的血凝特性能够被ＡＶ－１２７高免血清、ＨＳ－１高免血不表所抑制,而不能与ＮＤ阳性血汪民生交叉反应;在病毒中和试验中,ＨＳ－１毒株与国际标准毒株ＡＶ－１２７能够发生交叉中和反应,且两毒株的亲缘值为９５％。结果表明,两者为同一血清型。     

鸡减蛋综合征病毒的理化特性鉴定

利用电镜技术、细胞培养技术及琼脂糖凝胶电泳技术鉴定了鸡减蛋综合征病毒EDSVHS - 1株的理化特性 ,该病毒形态为球形 ,直径为 70～ 80纳米 ,无囊膜 ,对氯仿 ,乙醚不敏感 ,耐酸 ,病毒核酸类型是DNA ,不分节段 ,分子长度测定为 33.6× 10 3 个碱基。     

鸡产蛋下降综合征病毒NE4株DNA的EcoRI＋BamHI部分酶切片段的克隆

用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ消化ＥＤＳＶ抗原－抗体复合物、酚－氯仿抽提ＤＮＡ,得到了完整的ＥＤＳＶ基因组ＤＮＡ（约３３ｋｂ）,用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ＋ＢａｍＨＩ双酶切,得到７个片段,分别回收各片段,与双酶切线性化的ＰＵＣ１９载体质粒连接,转化Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α,成功地克隆了其中的５个片段。