猪流行性腹泻免疫抗体的ELISA检测及其与琼脂扩散试验相关性分析

为了解不同免疫程序对母猪初乳中猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗体水平的影响,以及PEDV抗体的ELISA与琼脂扩散试验(琼扩试验)检测相关性,选取5家免疫程序不同的大型猪场,用PEDV IgA抗体ELISA检测试剂盒对其初乳抗体水平进行检测,并根据检测结果,选OD值大小不同的5组初乳样本,琼扩法检测其PEDV抗体效价并分析。结果显示,5家猪场初乳PEDV IgA抗体阳性率均较高,阳性率为94.00%~100%,阳性样本平均OD值为1.858 8~2.148 0,差异不显著;PEDV抗体琼扩几何平均效价与ELISA检测的OD值存在正相关性。分析表明,母猪产前进行猪流行性腹泻活疫苗和灭活苗各一次的组合免疫较为合理;对PEDV抗体检测琼扩法一定程度上可做为ELISA法的替代。     

抗大肠杆菌肠毒素卵黄抗体的制备和鉴定

为了研究用不耐热肠毒素B亚基(LTB)和耐热肠毒素(STa)的融合蛋白制备鸡卵黄抗体的方法及其中和作用,试验将LTB和STa的编码基因串联并在大肠杆菌中表达获得了重组蛋白,以重组蛋白为免疫原免疫8月龄海兰蛋鸡制备了卵黄抗体,分别用兔肠段结扎试验和乳鼠灌胃试验进行了卵黄抗体对不耐热肠毒素(LT)和STa的体内中和试验。结果表明:用LTB和STa融合蛋白免疫产蛋鸡可诱导产生抗LTB和STa的卵黄抗体,其中抗LTB效价最高可达1∶8 647,抗STa效价最高可达1∶768;卵黄抗体对LT和STa均有中和作用。说明用融合蛋白作为免疫原制备的卵黄抗体具有抗LT和STa的生物学活性,对仔猪大肠杆菌性腹泻的临床治疗有潜在的应用价值。     

禽呼肠病毒琼扩抗原和血清的制备

以禽呼肠病毒S1133毒株尿囊腔接种10日龄无特定病原体(SPF)鸡胚,无菌收集24 h～120 h的死胚尿囊液,加1 mL/L的甲醛灭活,浓缩制得琼扩抗原;用该抗原制成灭活苗两次免疫SPF鸡,无菌采血分离制备阳性血清;选用SPF鸡无菌采血分离制备阴性血清.经过效价测定制备16单位琼扩抗原,8单位阳性血清;取免后的SPF鸡血样4个20～2-5稀释分别与1单位～8单位琼扩抗原做琼扩试验,确定了应该用4单位或8单位琼扩抗原做工作抗原;并以血清中和试验为参照证明琼扩试验在血清抗体监测中的可行性.本研究成功制备了禽呼肠病毒琼扩抗原与血清,为用琼扩试验定量检测禽呼肠病毒感染禽和疫苗免疫禽的抗体奠定了基础.     

猪瘟不同顺序零天免疫的免疫效果比较

以猪瘟兔化弱毒细胞苗分别免疫3组初生仔猪，每头1.5头剂。第1组20头先免疫，1小时后吸初乳。第2组15头，吸初乳后1小时免疫。第3组13头，吸初乳后半小时免疫。75日龄，以猪瘟弱毒单抗酶联方法测定3组动物的平均抗体(OD值)分别为0．25、0．23及0．21。80日龄，每组各随机抽出4头猪，连同非免疫对照猪6头以猪瘟石门系强毒攻击后，对照猪全死，第1组100％保护，第2组75％保护，第3组50％保护。第1组的免疫效果明显优于其它两组。     

猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞苗的应用效果

应用猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞苗(下称猪瘟细胞苗)1500个免疫量免疫接种2月龄以上生猪。至育肥出栏时(10个月),随机取血清样检测。结果,中和抗体滴度均在16倍以上:间接血凝抗体滴度达16倍以上者为96.9%.这表明,其免疫抗体滴度均达到抵抗猪瘟强毒的水平。全县应用猪瘟细胞苗共免疫接种生猪112万头次(注射反应为0.07%),获得了显著的预防效果。母猪免疫接种8个月后所产53～58日龄仔猪,中和抗体滴度达到8倍者为50%,4倍者为43.75%;间接血凝抗体滴度16倍者为5.3%.8倍者为42.1%.4倍者占47.36%。这表明,用猪瘟细胞苗1500个免疫量对母猪一年免疫一次,其所产仔猪在53～58日龄时的母源抗体水平不能全部保护猪瘟病毒的侵袭。     

猪初乳中PEDV IgA抗体捕获ELISA检测方法的建立及其初步应用

为建立评价猪流行性腹泻病毒(PEDV)疫苗免疫效力的方法，本研究利用纯化的PEDV免疫BALB/c小鼠，按照常规方法制备PEDV全病毒单克隆抗体(MAb)作为捕获抗体，PEDV细胞培养上清为夹心抗原，HRP标记的羊抗猪IgA为二抗，采用棋盘滴定法对各反应条件优化后建立了用于猪初乳中PEDV IgA检测的捕获ELISA方法，并确定其临界值为0.25。采用该捕获ELISA对PEDV、PCV2b、PRRSV、PRV、JEV、PPV、FMDV与CSFV IgA抗体阳性猪初乳进行检测，结果显示，除PEDV IgA抗体阳性猪初乳检测结果为阳性外，其他病毒抗体阳性猪初乳检测结果均为阴性，表明该方法特异性强。采用该方法和BIONOTE PEDV IgA试剂盒对从1∶10开始2倍倍比稀释的16个稀释度的阳性猪初乳样品检测，结果显示该方法对阳性样品检测的最大稀释度为1∶40 960，是BIONOTE PEDV IgA试剂盒敏感性的16倍(1∶2 560)，表明本研究建立方法的敏感性高。分别采用同一批次和不同批次制备的MAb包被的ELISA板分别检测5份PEDV IgA抗体阳性和1份PEDV IgA抗体阴性...     

猪瘟不同顺序零天免疫的免疫效果比较

以猪瘟兔化弱毒细胞苗分别免疫3组初生仔猪，每头1．5头剂。第1组20头先免疫，1小时后吸初乳。第2组15头，吸初乳后1小时免疫。每3组13头，吸初乳后半小时免疫。75日龄，以猪瘟弱毒单抗酶联方法测定3组动物的平均抗体（OD值）分别为0．25、0．23及0．21。80日龄，每组各随机抽出4头猪，连同非免疫对照猪6头以猪瘟石门系强毒攻击后，对照猪全死，第1组100％保护，第2组75％保护，第3组50％保护。第1组的免疫效果明显优于其他两组。     

猪传染性萎缩性鼻炎自制菌苗与美国及荷兰商品菌苗的效力比较

用自制的灭活菌苗一次或两次免疫妊娠母猪,其所产的仔猪,于5～7日龄攻击强毒Ⅰ相菌,可获得平均95.3％的病变减少率;初乳K抗体价为8万～16万倍;仔猪攻击时血清传递K抗体价一般为4万～8万倍,2月龄时仍在3000倍以上。美国苗及荷兰灭活苗两次免疫妊娠母猪。所产的仔猪病变减少率分别只有16.7％及21.1％;初乳K抗体价分别为320倍及4万倍;仔猪攻击的血清传递K抗体价分别为100多倍及1.7万倍,1.5月龄时降至1000倍。未注苗母猪所产的仔猪于7及25日龄两次注苗,经3周攻击140～170个感染量,自制菌苗免疫的仔猪平均血清K抗体价达6000～8000倍,攻毒后10天即见有明显的二次抗体应答,在30天时达高峰,同是细菌被加速清除,在70天时,血清K抗体价仍在2000～5700倍以上,整个呼吸道内细菌已清除,全组清菌率100％;美国苗的抗体应答不明显,攻击后几乎不见二次抗体反应,也不见细菌加速清除,清菌率几乎和对照没有差别。现地免疫试验表明,在严重污染情况下,自制菌苗比美国苗至少能推迟仔猪感染一个月,即自制苗的有效被动免疫可持续至2个多月龄,而美国苗只持续到1个多月龄。至3月龄时,自制菌苗的感染率和感染指数比美国苗减少1～2倍,美国苗这时与未注苗对照仔猪几乎无差别。     

抗PRRSVGP5和M蛋白独特型抗体替代抗原诱导机体产生中和抗体的研究

制备猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗独特型抗体(Ab2),探讨Ab2替代抗原对机体免疫调节作用的研究。用纯化的PRRSV-GP5(GP5-Ab1)蛋白和抗PRRSV-M(M-Ab1)蛋白单抗免疫大白兔,当免疫血清琼扩效价达1:16以上,加强免疫后心脏采血分离血清,分别纯化兔抗PRRSV-GP5IgG(GP5-Ab2)和抗PRRSV-MIgG(M-Ab2)血清,分别用GP5-Ab2、M-Ab2以及GP5-Ab2与M-Ab2混合型三种分别免疫未免PRRS疫苗的小猪,同时设PRRS弱毒苗、灭活苗和空白组作对照,免疫后21d采集猪血清,间接ELISA检测免疫Ab2和PRRS疫苗的猪血清全为阳性,空白组仍然为阴性。经细胞中和试验证明免疫Ab2及PRRS疫苗的猪血清都具有中和抗体,说明Ab2在体内具有替代PRRSV的作用诱导机体产生具有中和效应的中和抗体,从而起到保护机体免受PRRSV的感染作用,为猪繁殖与呼吸综合征病新型疫苗的研究提供了新的思路。     

应用琼脂糖免疫扩散法检测仔猪副伤寒血清抗体的研究

应用仔猪副伤寒琼扩抗原，对副伤寒高兔猪进行检测，第一次注射后第５天３／３阳转，抗体持续３４－７２天；对副伤寒弱毒苗免疫猪进行琼扩检测，于注苗后７天９／１１阳转，１４天１１／１１阳转，抗体持续７－４０天，该法与猪布氏杆菌病、猪巴氏杆菌病、猪丹毒、猪弓形体病、猪瘟、猪密蠓旋体病、猪链球菌病均无交叉反应。用本法检测１２８８份现地血清，阳性率３．２６％，试验肜该法监测仔猪副伤寒特异性强，操作简便、快速、具     

鸡法氏囊病卵黄抗体对雏鸡首次免疫效果的影响

对鸡囊病卵黄抗体与雏鸡首次免疫效果的关系进行了研究。结果表明,种蛋中卵黄抗体水平无论高低,其孵化出的雏鸡首次接种弱毒疫苗后免疫效果均不佳,既测不到琼扩抗体,也低不住强毒攻击;若接种2次弱毒疫苗,则有半数以上的鸡出现可测性抗体,尽管抗体的琼扩效价较低,但有70％以上的鸡可抵抗强毒攻击;只接种弱毒疫苗的雏鸡,其卵黄抗体水平与免疫效果呈负相关。首次免疫若采用灭活油乳剂苗和弱毒苗同时接种:则免疫后既可测到琼扩抗体,又可抵抗强毒攻击,且琼扩抗体水平与保护效果呈正相关。     

不同免疫方法制备IBD卵黄抗体的效果比较

用6种不同的免疫方法接种健康产蛋母鸡所制备的卵黄抗体,用琼扩法测定免疫后不同时期的卵黄抗体效价,并将其作1:4稀释后用于临床治疗试验。结果表明,以第5组(首免肌注自制油乳剂灭活苗2 ml/只,1周后同上法二免)效价最高,总有效率达98％以上,12h后症状即见明显好转。     

不同免疫方法制备IBD卵黄抗体的效果比较

用6种不同的免疫方法接种健康产蛋母鸡所制备的卵黄抗体,用琼扩法测定免疫后不同时期的卵黄抗体效价,并将其作1：4稀释后用于临床治疗试验。结果表明,以第5组(首免肌注自制油乳剂灭活苗2mL／只,一周后同上法二免)效价最高,总有效率达98％以上,12h后症状即见明显好转。     

鸡法氏囊病卵黄抗体对雏鸡首次免疫效果的影响

对鸡囊病卵黄抗体与雏鸡首次免疫效果的关系进行了研究。结果表明，种蛋中黄抗体水平无论高低，其孵化出的雏鸡首次接种弱毒疫苗后免疫效果均不佳，既测不到琼扩扩体，也抵不住强毒攻击，若接种２次弱毒疫苗，则有半数以上的鸡出现可测性抗体。尽管抗体的琼扩效价较低，但有７０％以上的鸡可抵抗强毒攻击；只接种弱毒疫苗的雏鸡，其卵黄抗体水平与免疫效果呈负相关。首次免疫若采用灭活油乳剂苗和弱毒苗同时接种；则免疫后既可测到琼     

应用琼扩试验检查鸡腺病毒感染的研究

用鸡胚致死孤儿病毒感染的鸡胚尿液研制了琼扩试验抗原,用于检查人工感染鸡,表现明显的特异性反应,感染鸡抗体的持续期较长,人工感染后3个半月100％呈阳性反应。抗体的最高滴度可达64倍。用琼扩试验证明,在一些地区的鸡场中有腺病毒感染,污染群的阳性率为8～46％。     

大肠杆菌毒素苗与灭活菌苗联用预防仔猪黄(白)痢试验

首次尝试用自家致病大肠杆菌制作灭活菌苗和热敏肠毒素(LT)苗的联苗,并用联苗免疫妊娠母猪,该组仔猪黄(白)痢发病率21.62％,对照组发病率57.46％,联苗保护率62.37％,结果较为理想。     

猪抗鸡IBD血清的研制与应用

将８头健康猪进行ＩＢＤ强化免疫接种，常规采集免疫猪血清，用琼扩试验测定血清ＩＢＤ抗体效价为１：６４～１：１２８。抗血清对自然发生ＩＢＤ的病鸡，皮下注射０．５ｍｌ／只，其总存活率达９５～１００％，但发病后期的病鸡治疗存活率一般为７０％左右。     

猪瘟疫苗免疫哺乳前仔猪的效果观察

用邹县某猪场3头健康母猪同日所生仔猪23头,出生后立即肌肉注射1头份/头猪瘟兔化弱毒疫苗、注射后60～120分钟让仔猪吃初乳。于免疫后10、30日及2、3、4、5、6、7及8个月分别用免疫扩散法监测猪瘟抗体效价。当免疫猪266日龄时,从23头猪中任选4头,经肌肉攻击经复壮后的猪瘟血毒lml/头。结果,免疫后10天,抗体未阳转,30天时,19/23阳性,2月龄以后至8个月,抗体均23/23阳性,266日龄攻毒4/4保护(对照3/3死亡)。说明该免疫程序是可靠的,能够控制猪瘟的发生。哺乳前免疫需要饲养人员与兽医密切配合,这一工作最好在母猪     

应用猪瘟单抗酶联试剂进行猪瘟免疫和疫情监测的试验

应用中国兽药监察所研制的猪瘟弱毒和强毒单抗酶联试剂，对猪瘟免疫抗体和猪瘟疫情进行监测。试验结果表明，一月龄一次接种两头剂和一月龄，二月龄时各接种一头剂猪瘟疫苗的猪均有良好的免疫应答。未吸初乳仔猪的抗体水平较低，而一旦吸初乳后，其ＯＤ值可达０．２０以上。对２０日龄和６０日龄进各接种４头剂猪瘟兔化弱毒疫苗的猪，检测其免疫水平表明，在特定的条件下，大剂量接种疫苗有一定的必要性。用猪瘟弱毒单抗酶联试剂对现     

母源抗体对仔猪接种猪丹毒菌苗后产生免疫力的影响

接种猪丹毒菌苗的母猪5头,经3～5个月后,用猪丹毒菌血清培养凝集试验,其血清中可测到猪丹毒的特异性抗体,但中和试验有3头母猪的血清未能保护小白鼠。用巯基乙醇处理母猪血清,证明其含有 IgG 与 IgM。未吃初乳的新生仔猪血清中没有特异性抗体,证明它不能通过胎盘传递给胎儿。初乳的乳清用凝集试验与中和试验均能测出猪丹毒特异性抗体。吃过初乳的仔猪在13日,15日龄,其血清用以上2种试验可测到猪丹毒特异性抗体,证明母源抗体可通过初乳传递给仔猪。吃过初乳的15～17日龄仔猪,可以抵抗皮内接种猪丹毒强毒活菌的攻击,20日龄仔猪不能抵抗强毒活菌的攻击。1、3、5、7、9及12周龄的仔猪接种猪丹毒菌苗,于3月龄后攻击猪丹毒强毒活菌,其免疫率分别为28.6%、25%、66.6%、75%、87.5%、及100%。根据以上试验结果,我们认为仔猪接种猪丹毒菌苗的适当年龄应在9周龄以后,12周龄时预防注射效果更好;如果在哺乳期注射了菌苗,则必须于断乳1个月后再注射1次,其免疫效果才比较确实。