霍乱肠毒素抗血清中和大肠杆菌热敏肠毒素的试验

前言肠致病性大肠杆菌可产生热敏肠毒素(LT)和耐热肠毒素(ST)。LT的分子结构、免疫学及生物学的性状与霍乱肠毒素极为相似。Evans等报导,肠致病性大肠杆菌尚可产生一种血管渗透因子(简称PF),它和LT一样不耐热,但给兔皮肤注射后,能引起毛细血管通透性增强,导致注射部位     

猪大肠杆菌热敏肠毒素B亚基基因的克隆及高效表达

本文以多聚酶链反应扩增得到的ＬＴＢ基因ＤＮＡ片段为探针,克隆了含猪源大肠杆菌ＬＴＢ基因的７７５ｂｐＨｉｎｄⅢ酶切片段,对插入片段进行了核苷酸序列测定：将含ＬＴＢ基因的ＥｃｏｒⅠ－ＨｉｎｄⅢ酶切片插 达载体ｐＫＫ２２３－３中得到亚克隆     

金银花连翘提取物对大肠杆菌热敏肠毒素的拮抗作用

应用兔回肠结扎试验研究了金银花连翘提取物对大肠杆菌热敏肠毒素（ＬＴ）致肠分泌的拮抗作用。实验的结果表明，金银花连翘提取物对大肠杆菌致病作用的影响至少涉及到抑菌和对热敏肠毒素的拮抗作用两个方面，且其作用随提取物浓度增高而增强。     

金银花链翘提取物对大肠杆菌热敏肠毒素的拮抗作用

应用兔回肠结扎试验研究了金银花连翘提取物对大肠杆菌热敏肠毒素致肠分泌的拮抗作用，实验的结果表明，金银花连翘提取物对大肠杆菌致病作用的影响至少涉及到抑菌和对热敏肠毒素的拮抗作用两个方面，且其作用提取物浓度增高而增强。     

大肠杆菌热敏肠毒素对猪小肠黏膜微血管内皮细胞活力及细胞因子表达的影响

本试验旨在探究大肠杆菌热敏肠毒素处理(heat labile enterotoxin,LT)后,猪小肠黏膜微血管内皮细胞活力及细胞因子ET-1、IL-1β水平的变化。首先采用D-半乳糖凝胶树脂层析法提取猪E coli LT,利用SDS-PAGE验证蛋白纯度,并用Vero细胞检验提取物的生物学活性,最后采用CCK-8法检测LT对猪小肠黏膜微血管内皮细胞活力的剂量时间效应,ELISA法检测细胞培养上清中ET-1、IL-1β水平的变化。结果表明:所提蛋白为AB_5结构的LT,且具有良好的生物学活性;0.01 mg/L的提取蛋白作用3 h后便可显著降低小肠黏膜微血管内皮细胞的活性(P0.05);作用细胞6 h后,0.01,0.1和10 mg/L LT组细胞培养上清中ET-1的含量显著升高(P0.05),0.01和1 mg/LLT组IL-1β的含量显著升高(P0.05)。结果表明,E coli LT可以显著改变猪小肠黏膜微血管内皮细胞的活力及细胞因子的表达。     

猪大肠杆菌热敏肠毒素A亚基基因的克隆及核苷酸序列分析

本文克隆了含猪源肠毒素大肠杆菌ＬＴＡ基因的６．７ｋｂ ＥｃｏＲＩ酶切片段，进行了限制酶图谱分析和核苷酸序列测定，共测定了１０９３ｂｐ的核苷酸序列，其中ＬＴＡ亚基基因编码区长７６５ｂｐ，编码２５４个氨基酸的蛋白质；计算分子量为２９６５２；氨基酸组成表明，ＬＴＡ富含带电荷的精氨酸、天冬氨酸和谷氨酸，同时酪氨酸和苯丙氨酸也异常的高。     

猪肠道大肠杆菌噬菌体对产肠毒素大肠杆菌的抑菌作用

此前本实验室从健康猪肠道及粪样中分离纯化得到57株大肠杆菌噬菌体,发现其中有12株噬菌体可裂解产肠毒素大肠杆菌(ETEC),本研究旨在探究这些大肠杆菌噬菌体的宿主谱及抑菌效力,以期了解肠道内大肠杆菌噬菌体对机体的保护作用。以89株大肠杆菌为宿主菌(其中包括5株ETEC),采用点滴法、双层平板法和液体扩增法测定噬菌体的宿主谱,利用浊度法测定噬菌体对ETEC的抑菌效力,并对噬菌体分类进行鉴定。12株噬菌体均能裂解一种或多种ETEC,但是均无法通过感染ETEC而增殖。S143_1、S143_2、S144_2、S35、S86_1、L86及S172等7株噬菌体虽然无法通过ETEC产生子代噬菌体,但在感染复数(MOI)为10或100时仍对ETEC具有显著的抑菌效力。12株噬菌体中有8株为T4样噬菌体,其他4株噬菌体均属于有尾噬菌体目肌尾噬菌体科。本研究从猪肠道内分离到12株大肠杆菌噬菌体,虽然无法感染ETEC,但仍可裂解ETEC,其中,7株在MOI为10或100时可有效地抑制ETEC生长。     

猪肠道大肠杆菌噬菌体对产肠毒素大肠杆菌的抑菌作用

此前本实验室从健康猪肠道及粪样中分离纯化得到57株大肠杆菌噬菌体,发现其中有12株噬菌体可裂解产肠毒素大肠杆菌（ETEC）,本研究旨在探究这些大肠杆菌噬菌体的宿主谱及抑菌效力,以期了解肠道内大肠杆菌噬菌体对机体的保护作用。以89株大肠杆菌为宿主菌（其中包括5株ETEC）,采用点滴法、双层平板法和液体扩增法测定噬菌体的宿主谱,利用浊度法测定噬菌体对ETEC的抑菌效力,并对噬菌体分类进行鉴定。12株噬菌体均能裂解一种或多种ETEC,但是均无法通过感染ETEC而增殖。S143_1、S143_2、S144_2、S35、S86_1、L86及S172等7株噬菌体虽然无法通过ETEC产生子代噬菌体,但在感染复数（MOI）为10或100时仍对ETEC具有显著的抑菌效力。12株噬菌体中有8株为T4样噬菌体,其他4株噬菌体均属于有尾噬菌体目肌尾噬菌体科。本研究从猪肠道内分离到12株大肠杆菌噬菌体,虽然无法感染ETEC,但仍可裂解ETEC,其中,7株在MOI为10或100时可有效地抑制ETEC生长。     

大肠杆菌热敏肠毒素对仔猪病理及生理学指标的影响

本试验旨在构建仔猪产热敏肠毒素大肠杆菌模型和热敏肠毒素模型,观察各组的病变情况,并检测相关生理生化指标和病理指标来进行对比分析。通过产热敏肠毒素大肠杆菌灌胃以及热敏肠毒素腹腔注射的方法建立2种仔猪腹泻模型;观察各组的病变情况,检测仔猪模型生理生化、病理指标。结果显示:2个试验组在试验期间与空白组相比较平均日增重均呈现负增长,白细胞和中性粒细胞数显著升高(P0.05),淋巴细胞数显著降低(P0.05);剖检可见肺实变严重,肠系膜淋巴结肿胀,肠腔积液;病理组织学检查发现,各试验组小肠肠壁变薄,肠绒毛脱落变短,杯状细胞增多;免疫组化结果显示,空肠组织中有热敏肠毒素存在。试验结果对比分析表明,毒素组与细菌组具有相似的症状表现与指标类型;热敏肠毒素可能为产热敏肠毒素大肠杆菌病的直接致病因子。     

用肠结扎试验测定霍乱抗毒素与致病大肠杆菌热敏肠毒素的中和作用

<正> 为了进一步证实用霍乱类毒素免疫猪、兔制成的抗毒素对大肠杆菌LT的中和作用,我们进行了猪和兔的肠结扎试验,分别用14个大肠杆菌菌株,其中7个为仔猪黄痢常见的国际标     

热敏肠毒素促进产肠毒素大肠杆菌对小肠上皮细胞系IPEC-J2的黏附的初步研究

本试验利用PCR技术,以K88ac标准株C83902基因组DNA为模板扩增出热敏肠毒素(heat-labile toxins,LT)基因,大小约1.1 kb。将其克隆入表达质粒载体pACYC184,构建和筛选出含正确插入LT基因的pACYC-LT重组质粒。采用同样方法,构建和筛选出两种含点突变LT基因的重组质粒(pACYC-LT72和pACYC-LT192)。进一步将上述重组质粒DNA转化入不表达任何毒素的大肠杆菌SE5000株。GM1-ELISA结果表明,上述重组菌均能在体外正常表达LT毒素蛋白。以猪小肠上皮细胞系IPEC-J2为模型,比较了表达和不表达LT的细菌对细胞黏附性能。数据表明,LT的表达使细菌对肠上皮细胞的黏附效应明显增加(12.3±3.4倍)。两种LT毒素蛋白的单氨基酸突变体的表达证明了LT毒素的ADP核糖基化作用对其增强致病菌对肠细胞的黏附作用是必要的。蛋白激酶A的抑制剂Rp-cAMP、腺苷酸环化酶的抑制剂DDA和LT毒素的受体GM1都可阻断LT毒素对细菌黏附性能的提升作用。     

猪源产肠毒素大肠杆菌疫苗的研究进展

仔猪腹泻是全球集约化猪场的高发疾病之一,给养猪业造成了巨大的经济损失.产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是导致新生仔猪和断奶仔猪腹泻的主要致病菌,菌毛黏附素和肠毒素是其重要的致病因子.接种疫苗是仔猪腹泻最有效的防治方法,然而ETEC疫苗有明显的地域局限性和安全性问题.因此,研制安全、高效且适用性广的ETEC疫苗对畜禽养殖业具...     

猪源大肠杆菌热稳定肠毒素的检测

致病性大肠杆菌产生一种或多种肠毒素称为肠毒素型大肠杆菌(Enterotoxigenic E．COLI ETEC)．ETEC是引起幼畜腹泻的重要病原菌。ETEC能借助于所产生的菌毛抗原粘附于动物小肠黏膜。定居并产生作用于肠壁的外毒素，称为肠毒素。主要有两类肠毒素：一类是不耐热性肠毒素即热敏感肠     

断奶和感染产肠毒素大肠杆菌对猪小肠吸收作用的…

本研究旨在测定断奶猪和未断奶同窝猪小肠对水分，钠，钾和氯的吸收以及确定这些值与小肠绒毛长度和隐窝深度的关系。８０头猪的小肠均分为５段，每段前端注射产肠毒素肠大杆菌（ＥＴＥＣ），后端注射对照液，在断奶时和断奶后，４、７、１１和１４天测定吸收作用。未断奶猪对液体，钾和氯的吸收不随时间而改变，而猪断奶后４、７和１４天对照肠段对水分的吸收明显减少，第４和７天牟氯的吸收低于未断奶对水分的吸收明显减少，第４和     

国内外猪源产肠毒素大肠杆菌疫苗研究进展

仔猪腹泻是全球规模化猪场最常见的疾病之一,给养猪业带来了巨大的损失。产肠毒素大肠杆菌(ETEC)是引起仔猪腹泻的主要病原菌,黏附素和肠毒素是其重要的致病因子,ETEC通过黏附素定植于小肠上皮细胞,在增殖过程中不断产生肠毒素,引起大量水和电解质进入肠腔,导致仔猪腹泻。目前,疫苗免疫是预防ETEC最有效的方法,然而许多商品化大肠杆菌疫苗的临床免疫效果不佳,且地域局限性明显。因此,研制安全、高效、广谱的ETEC疫苗对养猪业具有重要意义。近年来,许多新型试验性ETEC疫苗被相继报道,如ETEC菌毛黏附素和肠毒素疫苗;一些新开发的疫苗,如亚单位疫苗、菌影疫苗、植物载体疫苗和囊泡疫苗等,具有不同的优势,在不同的动物试验中均表现出良好的免疫保护效果。文章简述了国内外学者在ETEC疫苗领域的研究进展,对猪源ETEC各类疫苗的优劣及应用研究情况进行了综述,以期为今后猪源ETEC疫苗的研究提供参考。     

国内外猪源产肠毒素大肠杆菌疫苗研究进展

仔猪腹泻是全球规模化猪场最常见的疾病之一,给养猪业带来了巨大的损失。产肠毒素大肠杆菌（ETEC）是引起仔猪腹泻的主要病原菌,黏附素和肠毒素是其重要的致病因子,ETEC通过黏附素定植于小肠上皮细胞,在增殖过程中不断产生肠毒素,引起大量水和电解质进入肠腔,导致仔猪腹泻。目前,疫苗免疫是预防ETEC最有效的方法,然而许多商品化大肠杆菌疫苗的临床免疫效果不佳,且地域局限性明显。因此,研制安全、高效、广谱的ETEC疫苗对养猪业具有重要意义。近年来,许多新型试验性ETEC疫苗被相继报道,如ETEC菌毛黏附素和肠毒素疫苗;一些新开发的疫苗,如亚单位疫苗、菌影疫苗、植物载体疫苗和囊泡疫苗等,具有不同的优势,在不同的动物试验中均表现出良好的免疫保护效果。文章简述了国内外学者在ETEC疫苗领域的研究进展,对猪源ETEC各类疫苗的优劣及应用研究情况进行了综述,以期为今后猪源ETEC疫苗的研究提供参考。     

大肠杆菌热敏肠毒素B亚基的原核表达及生物学活性分析

从大肠杆菌K88（LT＋,ST＋）菌株中扩增热敏肠毒素B亚基基因（ltb）,得到454 bp片段,克隆至pMD18-T载体后,与pET32a（＋）定向连接,并转化入大肠杆菌BL21中,用IPTG 30℃诱导表达重组LTB蛋白。SDS-PAGE显示,重组蛋白分子量约为34 kDa,超声波裂解后,表达产物主要以包涵体形式存在。经鉴定,纯化复性后的LTB蛋白保留部分与GM1结合的生物学活性。     

猪源大肠杆菌耐热肠毒素基因的分子克隆

以ＰＣＲ方法克隆得到猪源大肠杆菌ＳＴ１基因缺失ＣｏｏＨ端了后两个编码密友和终止密码的ＤＮＡ片段,并以该片段为探针,筛选了以载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ构建的猪大肠力Ｐ５５质粒ＤＮＡ文库,得到插入片段约５．５ｋｂ阳性克隆,亚克隆了约０．５ｋｂ含ＳＴ基因的ＴａｑＩ酶切片段,并对该基因核苷酸序列进行了分析。应用竞争性ＥＬＩＳＡ测定了ＳＴ基因在不同启动子调控下的表达情况,在Ｔ７启动子调控下,ＳＴ基因在大肠     

猪大肠杆菌不耐热肠毒素基因的PCR检测

以产肠毒素性大肠埃希氏菌(ETEC)不耐热肠毒素(LT)保守序列为靶序列,设计合成了一对可扩增336 bp目的片段的引物,建立了检测ETEC不耐热肠毒素(LT)基因的PCR方法.该方法对987p 、鼠伤寒沙门氏杆菌、猪肺疫巴氏杆菌和链球菌的检测结果均为阴性.对15株分离自腹泻仔猪的待检菌株进行检测,有3株LT基因阳性.结果表明:该方法的特异性和敏感性较高,可用于ETEC的临床快速诊断和流行病学调查.