大鼠肺及其微血管内皮细胞磷酸二酯酶4表达及活性与清热药影响

通过检测肺与肺微血管内皮细胞（PMVEC）Ⅳ型磷酸二酯酶（PDE4）的表达及其活性,探讨入肺经中药对PMVEC环腺苷酸（cAMP）磷酸二酯酶（PDE）活性的影响,为筛选作用于PMVEC的PDE4抑制剂类抗炎药积累资料。本试验采用RT-PCR测定PDE4的表达,应用高效液相色谱（HPLC）检测酶反应前后大鼠肺组织与PMVEC的cAMP变化,计算PDE活性。结果显示：PDE4A、4B、4C、4D在肺与PMVEC内均有表达;17味入肺经清热药均对肺组织cAMP-PDE酶活性有不同程度的抑制作用,其中黄芩、黄药子、青蒿抑制率较高对肺组织酶分别为：75.37%、72%、61.26%,对PMVEC分别为：66.1%、63.54%、59.39%。由此可见,PDE4所有亚型在肺与PMVEC内均有表达;黄芩、黄药子、青蒿等入肺经的清热药能够抑制肺组织和PMVEC内cAMP-PDE活性;以cAMP-PDE活性为指标,有望筛选出其特异性PDE4抑制剂,并揭示入肺经清热药的作用机制。     

中药有效成分诱导肺微血管内皮细胞表达IFN-γ的研究

以体外培养的RPMVECs(rat pul monary microvascular endothelial cells,RPMVECs)为模型,采用双夹心ELISA法和MTT法,研究了绿原酸、连翘酯苷、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素诱导RPMVECs表达IFN-γ(inferteron-γ)的影响以及对PMVECs的毒性。ELISA检测结果表明,加入质量浓度为5,10,20,50,100μg/mL的5种中药成分刺激细胞16 h后,在培养细胞上清液内均能检测到IFN-γ,其中绿原酸、黄芩素组IFN-γ的表达量随药物浓度增大而减少;连翘酯苷组IFN-γ的表达量均较多;黄芩苷、汉黄芩素组均在10μg/mL时IFN-γ的表达量达到峰值,随后IFN-γ的表达量随浓度增大而减少。MTT检测结果显示,各浓度的黄芩苷、黄芩素对PMVECs均有一定程度的抑制作用,而连翘酯苷对PMVECs均有增殖作用,绿原酸、汉黄芩素的细胞毒性则随药物浓度而发生变化。     

大鼠脑微血管内皮细胞的体外培养及鉴定

探讨大鼠脑微血管内皮细胞的体外培养方法,为研究猪链球菌引起脑膜炎的致病机理打下基础.采用脑组织匀浆、二次过筛及酶消化技术分离大鼠脑微血管段,对分离的脑微血管内皮细胞进行了体外培养、形态学观察、免疫荧光鉴定及生长曲线的MTT法测定.结果表明:倒置显微镜下,细胞具有单层"铺路石样"排列的典型特征,免疫荧光检测第Ⅷ因子相关抗原呈阳性,成功建立了大鼠脑微血管内皮细胞的体外培养方法.     

LPS和LT对体外大鼠肠粘膜微血管内皮细胞的影响

将大鼠肠粘膜微血管内皮细胞分为空白对照组、BSA对照组、LPS1组、LPS2组、LT 1组和LT 2组6个组,分别用维持培养液,含50μg/mL BSA、1或10μg/mL LPS、10或50μg/mL LT的培养液静置培养12 h,研究不同浓度LPS和LT对体外大鼠肠粘膜微血管内皮细胞形态及NO分泌量的影响,并确定LPS和LT致大鼠肠粘膜微血管内皮细胞损伤的模型剂量。结果表明,LPS可使细胞长宽比增大,间隙变宽,而LT可使细胞肿大,排列紊乱;各浓度的LPS和LT均能引起肠粘膜微血管内皮细胞的NO分泌量升高,但1μg/mL LPS与50μg/mL LT的作用更明显;LPS和LT致大鼠肠粘膜微血管内皮细胞损伤的模型剂量分别是1和50μg/mL。     

黄芪多糖对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO的影响

笔者探讨黄芪多糖对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO的影响,结果表明:采用硝酸还原酶法黄芪多糖(900μg/mL)组细胞分泌NO量在1 h和3 h时极显著高于对照组(P<0.01),在6 h显著高于对照组细胞(P<0.05);黄芪多糖(450μg/mL)组细胞分泌NO量在1 h和6 h时显著高于对照组(P<0.05),在3 h与对照组差异不显著(P>0.05)。黄芪多糖可引起大鼠肠黏膜微血管内皮细胞NO分泌量的升高。     

大鼠心肌膜、肺、肠黏膜微血管内皮细胞静息膜电位的检测

比较大鼠心肌膜、肺、肠黏膜微血管内皮细胞静息膜电位,为内皮细胞电生理特性研究提供数据。用植块法培养大鼠心肌膜、肺、肠黏膜微血管内皮细胞,采用膜片钳放大器全细胞记录模式,分别测定3种细胞的静息膜电位。结果表明:心肌膜微血管内皮细胞的静息膜电位为(-24±4)mV;肺微血管内皮细胞的静息膜电位为(-27±6)mV;肠黏膜微血管内皮细胞静息膜电位为(-18±4)mV。3种不同组织来源的微血管内皮细胞在静息膜电位上存在异质性。     

大鼠不同部位内皮细胞的体外培养

为了建立一种能有效分离、培养和获取较高纯度的大鼠心肌膜微血管内皮细胞(RMMECs)、肠黏膜微血管内皮细胞(RIMECs)、主动脉内皮细胞(RAECs)、后腔静脉内皮细胞(RPVECs)的模型,自7dSD大鼠分别取左心室壁、空肠、主动脉、后腔静脉,采用II型胶原酶消化、差速贴壁、差速消化法获得较纯的RMMECs、RIMECs、RAECs、RPVECs。结果表明:通过形态学特征及微血管内皮细胞和血管内皮细胞相关特异性抗原检测证实,得到高纯度RMMECs、RIMECs、RAECs、RPVECs。结论:利用胶原酶II型消化法成功分离并培养大鼠的RMMECs、RIMECs、RAECs、RPVECs,为进一步开展内皮细胞的生物学特性的相关研究提供有效的方法。     

银杏叶提取物对体外培养心肌膜微血管内皮细胞分泌NO和ET-1的影响

研究银杏叶提取物(EGb761)对微血管内皮细胞分泌NO和ET-1的影响。采用体外培养大鼠心肌膜微血管内皮细胞(RMMMVECs)模型,测定其一氧化氮(硝酸还原酶法)和内皮素-1(ELISA法)分泌量的变化。EGb761能显著性提高RMMMVECsNO和ET-1的分泌量,且NO/ET-1值没有显著性变化。     

白芍制剂对中性粒细胞相关功能及磷酸二酯酶活性的影响

 【目的】以猪中性粒细胞为靶细胞,研究白芍制剂对其相关功能（呼吸爆发和弹性蛋白酶释放）及磷酸二酯酶活性的影响。【方法】中性粒细胞分离纯化后,以细胞色素C还原法检测中性粒细胞呼吸爆发,以弹性蛋白酶底物的减少反映弹性蛋白酶的释放量,以HPLC检测底物cAMP的变化反映磷酸二酯酶的活性等。【结果】白芍制剂呈剂量依赖性抑制中性粒细胞的呼吸爆发（P＜0.001）,3个不同浓度的抑制率分别为33.15%、45.96%和62.22%;对弹性蛋白酶的释放在低浓度时表现抑制作用（P＜0.05）,抑制率为23.22%,在高浓度时表现促进作用;对中性粒细胞磷酸二酯酶活性具有抑制作用,低、高浓度抑制率分别为13.24%和25.87%（P＜0.01）;HPLC指纹图谱分析表明白芍制剂主要存在5种成分。【结论】白芍制剂对猪中性粒细胞呼吸爆发具有明显的抑制作用,对弹性蛋白酶释放在低浓度有显著抑制作用,其作用机制可能与白芍制剂对磷酸二酯酶活性的抑制有关。     

Baicalin Induces IFN-α/β and IFN-γ Expressions in Cultured Mouse Pulmonary Microvascular Endothelial Cells

We studied the effect of baicalin,an extract from Radix Scutellariae (a traditional Chinese medicine) in inducing mouse pulmonary microvascular endothelial cells (MPMVECs) to produce interferons (IFNs)...     

Baicalin Induces IFN-α/β and IFN-γ Expressions in Cultured Mouse Pulmonary Microvascular Endothelial Cells

We studied the effect of baicalin, an extract from Radix Scutellariae (a traditional Chinese medicine) in inducing mouse pulmonary microvascular endothelial cells (MPMVECs) to produce interferons (IFNs). MPMVECs were cultured in vitro in the presence of different concentrations of baicalin (10, 20, and 30 μg mL-1), and the cells and the culture media were harvested at various time intervals. The proteins and mRNA levels (relative to β-actin) of IFN-α/β and IFN-γ were analyzed by RT-PCR and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). It was observed that baicalin substantially up-regulated the expression of IFN-α/β and IFN-γ. In all baicalin-treated groups, the relative levels of IFN-α/β and IFN-γ mRNAs peaked after 12 h of culturing, and IFN-α/β and IFN-γ proteins peaked after 24 h of culturing. These results suggest that baicalin can effectively induce the expression of IFNs in pulmonary microvascular endothelial cells, and thus potentially act as an antiviral compound. This study may provide background information for developing new antiviral drugs based on baicalin.     

口蹄疫146S对乳鼠心肌膜微血管内皮细胞分泌IL-6的影响

研究口蹄疫146S病毒粒子抗原（FMDV146S）对乳鼠心肌膜微血管内皮细胞（RMMVECs）分泌IL-6的影响,为解决现有口蹄疫疫苗的不足提供数据。体外培养乳鼠心肌膜微血管内皮细胞,用ELISA方法检测FMDV146S处理后细胞上清液中IL-6浓度。乳鼠心肌膜微血管内皮细胞（RMMVECs）在正常状态下低水平分泌IL-6;FMDV146S刺激后IL-6的分泌量显著增加,且呈剂量和时间依赖性,在刺激24h后分泌量达到峰值。MVECs在FMDV146S诱导的免疫与炎症反应中起着重要作用。     

Effects of Polysaccharides from Pulsatilla Decoction on the Microvascular Endothelial Glycocalyx

Pulsatilla decoction is a famous traditional Chinese herbal formula for clearing heat and treating dysentery of animals or human. To elucidate its mechanism, many active components have been studied, however, the roles of its polysaccharides still remain unclear. This study aimed to explore effects of polysaccharides from Pulsatilla decoction （PPD） on the microvascular endothelial glycocalyx （eGC）. The polysaccharides were extracted from PPD by water extraction and alcohol precipitation method. Mice were administered with PPD for 4 wk, and were then anesthetized with ether inhalation and were ifxed by cardiac perfusion with gradient concentration alcian blue solution. The jejunum was sampled and jejunal mucosa was prepared for ultrathin sections by routine method and was analyzed by transmission electron microscope. The results indicated that the eGC was observed as a strong electron-dense smooth linear margin or nonuniform conglomerates coating cell membranes, and PPD signiifcantly increased its thickness from （21.85±1.87） to （28.71±3.61） nm and improved its integrity. This study suggested that PPD may express their biological activities and protect against pathogenic factor damages by inlfuencing the eGC.     

心脉隆注射液对动脉粥样硬化大鼠血管内皮细胞的保护作用

目的探讨心脉隆注射液对动脉粥样硬化（AS）大鼠血管内皮细胞的保护作用.方法采用高脂饲料加维生素D3喂养8周的方法建立动脉粥样硬化大鼠的模型.将大鼠随机分为正常组、模型组、辛伐他汀组、心脉隆治疗组四组,高脂饲料喂养8周后取血测一氧化氮（NO）、内皮素（ET）、前列环素（PGI2）和血栓素（TXA2）的含量.结果心脉隆注射液给药8周后能明显的升高AS大鼠血清NO和血浆PGI2水平（P〈0.05）,显著降低血浆ET的含量（P〈0.05）.结论心脉隆注射液能保护AS大鼠血管内皮细胞,减轻动脉粥样硬化的进程,对动脉粥样硬化有治疗作用.     

猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白诱导血管内皮细胞融合

 猪链球菌2型（SS2）主要引起人和猪的脑膜炎，但其毒力因子溶菌酶释放蛋白(MRP)对构成血脑屏障的微血管内皮细胞有何致病作用迄今不明。为此分离仔兔脾微血管内皮细胞（SMEC），纯化后用SV40-T抗原转化后用作试验的细胞模型。将单层SMEC和电泳纯MRP溶液共孵育，染色后，光镜观察，发现MRP可诱导SMEC发生两种典型形态学变化：致密细胞单层中出现巨大空洞而呈网状；空洞内有细胞融合，形成多核巨细胞，随后巨细胞核极度浓缩释出，巨细胞消失。研究结果表明， MRP单独足以破坏大脑的血管内皮细胞屏障。